體外分析技術(shù)

1、體 外 分 析 技 術(shù),體外分析技術(shù),In vitro analysis techniques：是指離體的組織、血液或體液等作為生物樣本，在人體外進(jìn)行的、分析樣本成分或其含量的檢測(cè)技術(shù)。,特點(diǎn)：超微量分析的靈敏度，高強(qiáng)度的特異性以及簡(jiǎn)便快速的方法領(lǐng)先于其他定量分析技術(shù)。,重點(diǎn)講述,第一節(jié) 放射免疫分析,免疫技術(shù)：以抗原-抗體反應(yīng)原理為基礎(chǔ)，對(duì)樣品中相應(yīng)抗原或抗體進(jìn)行檢測(cè)。標(biāo)記技術(shù)：將可被探測(cè)的示蹤物質(zhì)用化學(xué)方法與化合物連接。標(biāo)

2、記免疫分析：用可微量或超微量檢測(cè)的示蹤劑標(biāo)記抗原、抗體，檢測(cè)免疫反應(yīng)結(jié)果并確定待檢物。,第一節(jié) 放射免疫分析,基本原理,標(biāo)記抗原（Ag*）和非標(biāo)記抗原（Ag）與限量抗體(Ab)競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合。Ag*和Ag與Ab親和力相同。,基本原理,Ab限量，Ag*定量,Ag*和Ag的量大于Ab結(jié)合位點(diǎn)，二者通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)方式與Ab結(jié)合；隨著Ag增加，Ag*與Ab結(jié)合形成Ag*Ab復(fù)合物的放射量降低,二者變化成規(guī)律性。,第一節(jié) 放射免疫分析,基本原理,以Ag*A

3、b復(fù)合物為B，未結(jié)合的Ag*為F，則B/F或B/(B＋F)與Ag的量變存在著函數(shù)關(guān)系，由此可的制作該反應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線 。,第一節(jié) 放射免疫分析,基本試劑,,抗原抗體復(fù)合物,分離方法,,,雙抗體法沉淀法雙抗+沉淀吸附法固相分離法,第一節(jié) 放射免疫分析,放射免疫測(cè)量?jī)x器,第一節(jié) 放射免疫分析,室內(nèi)質(zhì)量控制,1.零標(biāo)準(zhǔn)管結(jié)合率2.非特異性結(jié)合率3.最低濃度管和最高濃度管差4.標(biāo)準(zhǔn)曲線連線回歸的參數(shù)5.E25、E50、E75

4、6.質(zhì)控品7.質(zhì)控圖,第一節(jié) 放射免疫分析,RIA質(zhì)量控制常用指標(biāo),,,靈敏度,,,精密度,,,特異性,,,準(zhǔn)確度,,,穩(wěn)定性,多次重復(fù)測(cè)定結(jié)果的一致性,最小可檢出量,測(cè)定值與真實(shí)值符合程度,抗體特異性，交叉反應(yīng)少,有效期保持原有性能不變,評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)品與被測(cè)物的免疫活性,第一節(jié) 放射免疫分析,第二節(jié) 免疫放射分析,基本原理,將過(guò)量的標(biāo)記抗體與抗原結(jié)合，分離結(jié)合的標(biāo)記抗體與未結(jié)合的多余的標(biāo)記抗體，測(cè)定復(fù)合物的放射性，其活度與待測(cè)

5、抗原的量呈正相關(guān)。,第二節(jié) 免疫放射分析,特點(diǎn)：1．以標(biāo)記抗體作為示蹤劑2．反應(yīng)動(dòng)力學(xué)：標(biāo)記抗體是過(guò)量，非競(jìng)爭(zhēng)性，全量反應(yīng)，反應(yīng)速度快。3．靈敏度明顯高于RIA，約為RIA的10～100倍。4．標(biāo)準(zhǔn)曲線工作范圍寬。5．特異性高。6．穩(wěn)定性好。,第二節(jié) 免疫放射分析,第三節(jié) 非放射性免疫分析,第三節(jié) 非放射性免疫分析,基本原理：指酶標(biāo)記抗原或酶標(biāo)記抗體進(jìn)行的抗原抗體反應(yīng)，然后通過(guò)酶與底物產(chǎn)生顏色反應(yīng)，用于定量測(cè)定。,酶免疫標(biāo)記

6、技術(shù)（ELISA）,第三節(jié) 非放射性免疫分析,基本原理:以熒光素標(biāo)記抗體或抗原作為示蹤劑的一種新的免疫分析技術(shù)，其原理與ELISA相似。該法既可對(duì)液體中的抗原和抗體定量，也可對(duì)組織切片中的抗原、抗體進(jìn)行定性和定量。一般以鑭系元素作為熒光標(biāo)記（示蹤劑）。,熒光免疫分析（FIA）,第三節(jié) 非放射性免疫分析,基本原理：利用化學(xué)或生物發(fā)光系統(tǒng)作為抗原抗體反應(yīng)的指示系統(tǒng)，借以定量檢測(cè)抗原或抗體的方法，發(fā)光物質(zhì)可直接作為抗原抗體的標(biāo)記物，也可以游離

7、形式用于催化劑（酶）和輔助劑標(biāo)記的抗原或抗體的發(fā)光反應(yīng)中。,化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)（CLIA ）,第三節(jié) 非放射性免疫分析,化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)（CLIA ）,第三節(jié) 非放射性免疫分析,第三節(jié) 非放射性免疫分析,ECLIA 是目前最先進(jìn)的標(biāo)記免疫測(cè)定技術(shù)，是繼RIA、ELISA、FIA、CLIA以后的新一代標(biāo)記免疫測(cè)定技術(shù)，具有敏感、快速和穩(wěn)定的特點(diǎn)。直接以[Ru(bpy)3]2+標(biāo)記，反應(yīng)時(shí)標(biāo)記物直接發(fā)光，ECLIA 與普通化學(xué)發(fā)光的主要差異在