綿羊胚胎體外生產(chǎn)技術(shù)的研究.pdf

1、本實驗使用屠宰場獲得的綿羊卵巢旨在研究綿羊體外成熟、體外受精(IVM/IVF)及早期胚胎培養(yǎng)中的影響因素，以期篩選出較為合理的綿羊卵母細胞體外成熟、體外受精和早期胚胎發(fā)育培養(yǎng)體系。結(jié)果表明： 1.切剖法從屠宰綿羊卵巢表面卵泡采集得到的可用卵母細胞數(shù)顯著多于抽吸法(4.47枚/卵巢VS2.51枚/卵巢)，但耗時較長(55秒vs51秒)。 2.添加不同劑量的FSH均能刺激卵母細胞的體外成熟，且各組間卵母細胞的成熟率沒有顯著差

2、異(P＞0.05)；但是，添加1μg/ml和5μg/mlFSH的成熟培養(yǎng)液得到的卵裂率都顯著大于添加10μg/mlFSH的成熟培養(yǎng)液(P＜0.05)。 3.表明綿羊成熟培養(yǎng)液中添加一定劑量的EGF能夠顯著提高卵母細胞的成熟率，且100ng/ml的EGF添加濃度與0ng/mlEGF及50ng/mlEGF添加濃度相比較還能顯著提高受精后綿羊卵母細胞的卵裂率，建議為合適添加濃度。 4.培養(yǎng)液中一定濃度范圍內(nèi)顆粒細胞(濃度為2-

3、6×106個/m1)的存在對卵母細胞體外成熟率沒有明顯的影響，但能顯著的提高卵母細胞受精后的卵裂率(55.6％vs53.8％)和桑囊率(28.9％vs19.1％)(P＜0.05)。 5.公羊個體對體外受精結(jié)果的影響不容忽視。實驗結(jié)果表明，來自三只不同公羊的精液經(jīng)相同的獲能處理，進行卵母細胞體外受精，結(jié)果在卵裂率(54.7％，41.3％，43.3％)和?？芭?囊胚率(28.2％，19.7％，22.6％)上都有顯著差異(P＜0.05

4、) 6.綿羊受精16小時的卵裂率、桑囊率顯著高于受精8小時、12小時和20小時。 7.四種培養(yǎng)液Ⅰ液：TCM199+GCM+15％ESS+EGF；Ⅱ液：TCM199+15％ESS+EGF；Ⅲ液：SOF液+15％ESS+10μg/mlNEAA+20μg/mlEAA+EGF；Ⅳ液：SOF液+BSA+10μg/mlNEAA+20μg/mlEAA+EGF與受精后的胚胎共培養(yǎng)，結(jié)果表明，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ液卵裂率顯著大于Ⅳ組培養(yǎng)液(P＜0

5、.05)，Ⅰ液顯著大于Ⅱ液(P＜0.05)，Ⅲ液與Ⅰ、Ⅱ液間差異不顯著。四組胚胎發(fā)育培養(yǎng)液之間所得的桑囊率在Ⅰ液中較高但與其它三組差異不顯著(P＞0.05)。 8.綿羊卵母細胞體外成熟、體外受精及早期胚胎培養(yǎng)的TCM199體外受精漸變培養(yǎng)體系與目前沿用的常規(guī)體外受精體系相比較，雖然成熟率差異不顯著(81.3％vs80.4％)，但卵母細胞體外受精后的卵裂率(72.1％vs50.8)和桑囊率(94.8％vs24.5％)差異極顯著(P