優(yōu)化牛體外生產(chǎn)胚胎體系的研究.pdf

1、隨著胚胎工程技術(shù)的推廣應(yīng)用，?；铙w采卵及體外受精技術(shù)成為解決體外生產(chǎn)胚胎緊缺的有效途徑。但目前的研究還不能達到產(chǎn)業(yè)化體外生產(chǎn)牛胚胎的目的，故本研究針對牛活體取卵技術(shù)獲取卵母細胞數(shù)量少，質(zhì)量差等特點，旨在建立適合活體取卵技術(shù)的微滴培養(yǎng)技術(shù)，以及從五個方面優(yōu)化體外培養(yǎng)體系，為體外高效生產(chǎn)牛胚胎研究奠定基礎(chǔ)。 本文以屠宰場牛卵巢為材料，采用體外成熟、體外受精、早期胚胎的體外培養(yǎng)等方法，研究了不同體積的受精液及不同早期胚胎培養(yǎng)液體積對體

2、外受精分裂率及囊胚率的影響，同時還研究了微滴培養(yǎng)使用處理石蠟油覆蓋受精液滴和早期胚胎培養(yǎng)液對體外受精的影響。結(jié)果表明：不同體積的受精液70μl和150μl體外受精后卵裂率(67.2﹪、64.2﹪)、囊胚率(25.4﹪、24.3﹪)差異均不顯著(P>0.05)，但顯著優(yōu)于對照組；體積為70μl的受精液覆蓋與不覆蓋石蠟油其分裂率(59.3﹪、70.3﹪)差異顯著(P<0.05)，囊胚率(27.1﹪、21.4﹪)差異不顯著(P>0.05)，但

3、二者均顯著優(yōu)于對照組；受精使用70μl覆蓋石蠟油，其早期胚胎培養(yǎng)使用200μl培養(yǎng)液覆蓋與不覆蓋處理石蠟油，結(jié)果分裂率(72.3﹪、70.5﹪)差異不顯著(P>0.05)，囊胚率(33.2﹪、22.3﹪)差異顯著(P<0.05)，且結(jié)果顯著優(yōu)于對照組，故少量卵母細胞的體外培養(yǎng)應(yīng)使用覆蓋處理石蠟油的微滴培養(yǎng)，可獲得良好的培養(yǎng)效果。在覆蓋物的選擇上，石蠟油的效果顯著優(yōu)于礦物油(P<0.05)，新石蠟油與反復(fù)使用的處理石蠟油效果差異不顯著(P

4、>0.05)。 本文利用以上建立的微滴培養(yǎng)方法，為優(yōu)化體外培養(yǎng)體系，探討了從不同狀態(tài)卵巢所獲卵母細胞、種公牛精液、受精時間、季節(jié)及共培養(yǎng)對體外培養(yǎng)結(jié)果的影響。結(jié)果表明：(1)不同卵巢狀態(tài)所獲卵母細胞培養(yǎng)后，分裂率、囊胚率差異均不顯著(P>0.05)；(2)不同種公牛精液進行體外受精，結(jié)果顯示分裂率和囊胚率差異顯著(P<0.05)，受精前有必要對精液的受精力進行測定，確保體外培養(yǎng)的精液的質(zhì)量；(3)以6h、8h、12h、16h的受