牛卵母細胞及胚胎體外培養(yǎng)體系的建立.pdf

1、本實驗重點是在新建胚胎實驗室建立與優(yōu)化牛卵母細胞及胚胎體外操作技術體系，進一步推動生物胚胎工程的發(fā)展，并為牛的體細胞克隆和轉基因牛的研究打下基礎。為此，從屠宰場收集卵巢，采集卵巢表面直徑為2.8mm卵泡的卵母細胞，以TCM199添加20％FBS為基礎液，對其進行成熟培養(yǎng)，研究FSH/LH17β-E<,2>/EGF濃度、卵巢的運輸時間和保存溫度、卵母細胞采集方法、卵巢所處生理狀態(tài)等對牛卵母細胞體外成熟的影響；研究了孤雌激活體系與牛卵母細胞

2、在藥物中作用時間對牛卵母細胞孤雌激活的影響；研究了受精體系與成熟卵母細胞受精前的處理方法對牛卵母細胞體外受精的影響：還研究了胚胎體外培養(yǎng)體系對牛胚胎體外發(fā)育的影響。結果表明： 1．在新建胚胎實驗室建立了牛卵母細胞的體外成熟體系。在屠宰場選擇處于卵泡期的奶牛和黃牛卵巢，保存在30℃生理鹽水中4h內運送回實驗室，采用抽吸法采卵，采用成熟液 Tissue Culture Medium-199(Earle's)液+20％FBS+50 μ

3、g/ml LH+50μg/ml FStH+20μg/ml 17β-E<,2>對A、B級卵母細胞進行體外成熟，24小時成熟率可達80％。 2．EGF能顯著提高牛卵母細胞的成熟率，且隨著EGF添加量的不斷增加牛卵母細胞的成熟率也呈上升趨勢，添加50μg/ml時，成熟率可達到82.2％。但由于藥品昂貴，未繼續(xù)做大劑量添加的比較。 3．牛卵母細胞的孤雌激活條件為5mmol/L離子霉素作用5min，2mmol/L，6-DAMP作用