實驗出凝血檢查

1、實驗 出凝血檢查,（一）血標(biāo)本的采取應(yīng)注意的問題,,,. 、凝血實驗檢查均使用靜脈血。采血人員應(yīng)技術(shù)熟練，以防止組織損傷，外源性凝血因子進入針管。,,．一般血液采集，進入容器至進行實驗所用的時間越短，所分析的凝血因子被保護得越好。從輸液三通管取出血的做法不可取。,,．取血時病人應(yīng)松馳，環(huán)境溫暖，防止靜脈攣縮，止血帶的壓力要盡可能小，取血時，拉針?biāo)ǖ乃俣纫鶆颍寡浩椒€(wěn)地進入注射器，防止氣泡的產(chǎn)生。,,．一旦取樣完畢，立即與抗

2、凝劑充分混合，一般提倡使用真空采血管。,,．用硅化玻璃或塑料注射器采血。考慮結(jié)果的精確性，應(yīng)將試管刻度的可能誤差控制在既定體積的以內(nèi)。,,.采血后標(biāo)本在低溫保存且在一定時間范圍內(nèi)。,,. 國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會（）、國際血栓與止血委員會（）推薦使用（含）或的枸櫞酸鈉作為凝血因子檢查的抗凝劑。,,.抗凝劑在血標(biāo)本的絕對含量可改變血漿中鈣離子濃度，進而影響試驗結(jié)果，因此應(yīng)根據(jù)患者紅細胞比例（）狀況隨時調(diào)整抗凝劑用量。,（二）應(yīng)用試劑應(yīng)注意

3、的問題,,,.組織凝血活酶工作制劑的國際敏感指數(shù)（），為了使不同敏感性的組織凝血活酶在檢測中能得到同樣的結(jié)果，必須要制定一個共同的敏感性指標(biāo)。,,.凝血活酶和部分活化凝血活酶的使用步驟必須嚴(yán)格按照說明書進行。通常在使用前必須充分混勻試劑，以使微粒重新均勻懸浮于液體中。,,.試劑準(zhǔn)備過程中應(yīng)該使用去離子水。,,.正常對照血漿通常將多份健康人血標(biāo)本混在一起，以彌補個體誤差。,（三）使用實驗器材應(yīng)注意的問題,,,. 玻璃器皿的要求：貯存和測試

4、時應(yīng)選用干凈、沒有劃痕的試管。,,. 溫度的要求：人工測定終點法要求水浴箱的溫度必須保持在（±）℃，并且周圍照明設(shè)備要好，便于讀取終點。,（四）實驗操作應(yīng)注意的問題,,,. 許多試驗誤差都來源于技術(shù)的錯誤。在實驗技術(shù)、試劑、溫度及值上很微小的變化都會導(dǎo)致試驗結(jié)果明顯的變化。,,. 手工法或試管法檢查時，傾斜試管動作一定要輕，角度要小，以減少血液與管壁的接觸面積。,,. 血液凝固主要是酶催化的反應(yīng)，所以實驗過程中要嚴(yán)格控制理想的

5、環(huán)境和溶液的離子強度。,,. 試驗結(jié)果準(zhǔn)確還取決于所用的反應(yīng)物的量、加入順序和不同反應(yīng)物的孵育時間。,,. 、需乏血小板血漿。,,. 試驗前檢查血漿是否有溶血、黃疸、脂血和出現(xiàn)凝塊。,. 報告方式：以的秒（）數(shù)報告。以患者（）正常對照（）的比（）報告。在口服藥物治療監(jiān)控時以報告。規(guī)定，不再用百分比（活動度）報告。以秒報告。,年提出值用（ 國際標(biāo)準(zhǔn)化比值）作為結(jié)果報告形式，并用以作為抗凝治療監(jiān)護的指標(biāo)。,,,［病人（）正常人平

6、均（）］受檢者（）正常對照（）：國際敏感指數(shù)（ ）～,,、、、、、,凝 血 時 間 測 定,,目的：掌握玻璃試管法凝血時間測定的方法,,原理：,離體靜脈血與玻璃表面接觸后，血中因子活化并啟動內(nèi)源性凝血途徑，最終生成纖維蛋白而使血液凝固所需的時間。,器材：,直徑玻璃試管支靜脈采血器材℃恒溫浴箱秒表,,步驟：支試管各血，每隔傾斜，第一管計時后，立即觀察第二、三管并計時，直至血液凝固。結(jié)果判斷：從血液剛進入注射器至第管凝固所

7、需時間即為凝血時間。,,正常參考值：～分鐘報告方式： （玻璃試管法）,注意事項：,試管應(yīng)潔凈干燥，抽血應(yīng)“一針見血”且血液中不含泡沫。溫度恒定為℃，傾斜試管角度應(yīng)在°左右。,評價：,凝血時間曾用玻片法測定，但由于毛細血管采血，易混入組織液而使凝血時間正常，屬于淘汰方法。延長：嚴(yán)重內(nèi)源性凝血途徑凝血因子有缺陷；血中抗凝物質(zhì)增多；肝素治療縮短：高凝狀態(tài)（早期）,凝 血 酶 原 時 間,,原理：,在乏血小板血漿中加入組織

8、因子和鈣離子（鈣凝血活酶）后，血漿發(fā)生凝固的時間即為凝血酶原時間（）。,步驟：,取空腹靜脈血加入含有枸櫞酸鈉的試管中混勻備用。抗凝血以離心分離血漿將試劑、正常人混合血漿、待測血漿與℃預(yù)熱。血漿加入混勻的試劑，開動秒表計時。,,正常參考值：：～秒：±：～,,報告方式：：，正常人血漿：：,注意事項：,試管應(yīng)潔凈干燥，抽血應(yīng)“一針見血”，抗凝劑與血液比例（：）應(yīng)準(zhǔn)確。取血后內(nèi)完成測定。鈣凝血活酶必須標(biāo)有國際敏感指

9、數(shù)（），越接近于越敏感。標(biāo)本測定前應(yīng)先測定正常人混合血漿，其值在允許范圍內(nèi)才能測定樣本。,評價：,血漿凝血酶原是一種篩選試驗，是用來證實先天性或獲得性纖維蛋白原、凝血酶原和凝血因子、、的缺陷或相應(yīng)抑制物的存在，也用于監(jiān)測口服抗凝治療時引起的凝血酶原和因子、水平的下降。,實質(zhì)：,對檢測樣本（血漿）中存在凝血激酶時的再鈣化反應(yīng)，這種過程包括了因子、組織因子、磷脂、鈣離子對凝血酶原的活化，凝血酶裂解纖維蛋白原和纖維蛋白單體的聚集交聯(lián)。,活化

10、部分凝血活酶時間測定,,原理：,用白陶土激活因子、腦磷脂代替血小板磷脂，測定乏血小板血漿加入后凝固所需時間。,步驟：,采血 空腹靜脈血 枸櫞酸鈉混勻。分離血漿 離心分鐘分離血漿。溶解試劑 臨用時加蒸餾水，室溫靜置以上，混勻后使用。預(yù)溫活化 血漿試劑混勻，℃準(zhǔn)確孵育（其間輕輕搖動數(shù)次）加鈣計時 加入 混勻并立即開動秒表計時，后，觀察混合液流動狀態(tài)。,,正常參考值：一般在～（不同儀器和試劑所測之參考值有差別）報告方式：

11、：，正常人血漿：,注意事項：,采血時穿刺盡量一針見血，不要淤血和氣泡，采血后立即與抗凝劑混合，盡快送往實驗室。使用枸櫞酸鹽（抗凝）血漿 如果不能立即測試，應(yīng)盡快分離血漿，盛血漿的容器加塞，防止值改變血漿在～℃下保留天 鈣凝血活酶必須標(biāo)有國際敏感指數(shù)（），越接近于越敏感。,臨床意義：,延長：表明有內(nèi)源性凝血途徑有關(guān)因子的缺陷（血友?。┖屠w維蛋白原缺乏。 纖維活力增加，如繼發(fā)性，原發(fā)性纖溶以及血循環(huán)中有纖維蛋白（原）降解產(chǎn)物（）。

12、 血循環(huán)中有抗凝物質(zhì)。,,縮短：　　　 高凝狀態(tài)，如的高凝期，促凝物質(zhì)進入血液以及凝血因子的活性增高等。,評價：,和同時檢測是目前二期止血缺陷的主要篩選試驗組合。,在有臨床出血癥狀的前提下：,提示正常 延長 因子的缺陷延長 正常 因子、、缺陷正常 正常 懷疑因子缺陷可能延長 延長 除因子、、、缺陷 外，主要是異?？鼓镔|(zhì) 的增多,,,,,血漿復(fù)鈣時間,,原

13、理：,在去鈣離子的抗凝血漿中，重新加入適量的鈣后，血漿發(fā)生凝固。,步驟：,草酸鈉靜脈血混勻，離心分離血漿。血漿置℃水浴中， ，立即開動秒表記錄時間。,,正常參考值： ±分（分鐘）,注意事項：,不要溶血，否則時間縮短新鮮配制分離血漿以轉(zhuǎn)分為宜，高速離心可使大量血小板下沉而導(dǎo)致復(fù)鈣時間延長。,復(fù)鈣交叉時間,,步驟：,按下列比例準(zhǔn)備份待測血漿：加樣量 受檢血漿

14、（）－ 正常血漿（） －上述試管，置℃ ，加 ，混勻后，記錄血漿凝固時間。,,,,注意事項：,所用血漿均為富含血小板血漿，分離出血漿后需在內(nèi)檢測完畢。,臨床意義：,最早作為內(nèi)源性凝血系統(tǒng)相關(guān)凝血因子缺陷的篩選檢查，但由于這個試驗不如，又容易受血小板數(shù)量和功能影響，目前只用來篩選是否存在病理性抗凝物質(zhì)增多。,,延長的復(fù)鈣時間如被量的正常血漿所糾正，則表示受檢血漿中缺乏內(nèi)源凝血因子；如不被少量正常血漿糾正，提

15、示存在異常抗凝物質(zhì)。,血漿纖維蛋白原,,,纖維蛋白原的測定方法眾多，大體上分三大類：基于經(jīng)加凝血酶后，形成纖維蛋白的方法，即可凝固蛋白法。物理、化學(xué)測定法。免疫學(xué)測定法。,目的和原理,,,為了解凝血途徑最后環(huán)節(jié)的狀況，排除纖維蛋白原減少、異常對凝血篩選試驗的影響，了解纖溶活動度等可選擇本試驗。,,法以凝血酶作用于受檢血漿中的纖維蛋白原，使其形成纖維蛋白，血液凝固。,,纖維蛋白原的量與凝固時間成負相關(guān)，檢測結(jié)果與參比血漿制成的標(biāo)準(zhǔn)曲

16、線對比可得出纖維蛋白原的含量。,步驟：,將參比血漿用血漿稀釋液作原倍、：、：、：、：稀釋管。取稀釋血漿于小試管中，置℃水浴預(yù)熱分鐘，再加凝血酶溶液，記錄時間。,,,,,,,,,,相關(guān)分析：,首先先清除內(nèi)存。，濃度（或），輸入（如不取對數(shù)，濃度直接輸入， 讀取值輸入；全部數(shù)據(jù)輸入完畢，按讀出相關(guān)系數(shù)。待測讀數(shù)或→讀出相關(guān)濃度。如不取對數(shù)，待測讀數(shù)直接?→讀出相關(guān)濃度。最終濃度需根據(jù)樣品稀釋倍數(shù)乘積。,^,標(biāo)準(zhǔn)曲線：,（

17、） （）,,,,,,,,,,,,,,,如血漿纖維蛋白原含量大于 時，應(yīng)稀釋血漿后重測，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。低于 時，需將原血漿改為∶或∶稀釋，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得結(jié)果后，除以或除以。,,正常參考值： ～,臨床意義：,纖維蛋白原增高除生理情況下的應(yīng)激反應(yīng)、妊娠后期外，主要出現(xiàn)感染、灼傷、動脈粥樣硬化、急性心肌梗死、多發(fā)性骨髓瘤、糖尿病、敗血癥

18、等。纖維蛋白原減少見于、原發(fā)性纖溶亢進癥、重癥肝炎、肝硬化和溶栓治療時。,評價：,方法測定的是纖維蛋白原功能，因此需纖維蛋白原結(jié)構(gòu)正常，且有一定的含量，對低（無）纖維蛋白原血癥和因此后纖維蛋白原血癥應(yīng)改用和等免疫檢測手段。,主要誤差來源：,血漿稀釋不準(zhǔn)。凝血酶活性不足或失效。凝血酶一般應(yīng)在低溫保存，稀釋后在塑料(聚乙烯)試管中，置℃可保存活性小時。測定終點觀察不準(zhǔn)確，尤其是纖維蛋白原含量高時，往往很快即凝固，手工法重復(fù)性較差，不易