糞便檢查病原學(xué)診斷

1、寄生蟲病診斷、流行、防治 與臨床,,,（1）詢 問 病 史 (History)：感染史、排蟲 史及臨床癥狀,（2）體 格 檢 查 (Physical examination)： 皮下包塊、皮疹,一、Diagnosis of Parasitosis,患者，男，59歲，高校教師，長沙市人，因生食魚片1月余在腹部皮膚出現(xiàn)匍行疹。經(jīng)皮膚組織活檢，在切片中發(fā)現(xiàn)棘顎口線蟲幼蟲切面，后從組織塊中分

2、離到殘存的蟲體。,一、寄生蟲病診斷(Diagnosis of Parasitosis),（1）詢問病史 ( Taking History) 感染史、排蟲史及臨床癥狀,（2）體格檢查 ( Physical Examination) 皮下包塊、皮疹,（3）實驗室檢查 (Laboratory test),實驗室檢查 (Laboratory test),1、基本原則 ( Basic principl

3、e )2、注意事項 (Note)3、病原學(xué)檢查方法 ( Etiological test),（1）寄生蟲通過宿主的排泄物、分泌物、 血 液離開人體，繁殖力強，感染較 重 直接到宿主的排泄物、分泌 物、血液中 查找離體階段。,1、基本原則( Basic principle ),,A. Lumbricoides egg,S. Japonicum egg,B. Mal

4、ayi Microfilaria,Trichomonas vaginalis,（2）寄生蟲通過宿主的排泄物、分泌物、 血液離開人體。對感染較輕、數(shù)量較 少或離體階段個體太小者，可采取濃 集法查找離體階段。,1、基本原則( Basic principle ),Ancylostoma egg,Clonorchis. sinensis egg,（3）寄生于體內(nèi)卻在肛周產(chǎn)卵或蟲卵在

5、 經(jīng)過肛門時粘附在肛門周圍——采 用肛門拭子法查蟲卵。,1、基本原則( Basic principle ),Enterobius.vermicularis egg,,Taenia egg,（4）有離體階段的寄生蟲在查不到離體 階段時，又高度懷疑為感染者或進 行大面積人群調(diào)查——可采用免疫 學(xué)檢查。,1、基本

6、原則( Basic principle ),Circumoval precipitin test (COPT),（5）寄生于體內(nèi)卻無離體階段或呈隱性 感染——可采用組織活檢法查寄生 階段和血清學(xué)檢查。,1、基本原則( Basic principle ),Toxoplasma gondii trophozoite,,Trichinella spiralis cyst,（1）注意蠕蟲卵之間和

7、原蟲包囊之間的鑒別， 以及蠕蟲卵與各種相似物之間的鑒別；,2、注意事項 (Note),（2）注意各種檢查方法的適應(yīng)對象。,（3）有些寄生蟲要注意采集標(biāo)本的時間及 送檢的時間。,（4）有些寄生蟲的離體階段有間隙性排放 的特點，應(yīng)反復(fù)多次檢查。,（5）有些寄生蟲的離體階段具有感染性， 實驗室檢查時應(yīng)防止實驗室感染。,（6）血清學(xué)檢查應(yīng)考慮交叉反應(yīng)、假陽性

8、 和假陰性的存在，僅有輔助診斷意義。,2、注意事項 (Note),寄生蟲病實驗室診斷Laboratory diagnosis of parasitic diseases,,病原學(xué)診斷 免疫學(xué)診斷 分子生物學(xué)診斷,1.糞便檢查*2.血液檢查*3.活體組織檢查4.其他排泄物或抽取液的檢查5.動物接種,病原學(xué)診斷,病原學(xué)診斷 ?糞便檢查,原蟲的滋養(yǎng)體 多種蠕蟲卵,?生理鹽水直接涂片法,1.直接涂片法,原

9、蟲的包囊,?生理鹽水直接涂片法?碘液直接涂片法,1.直接涂片法,病原學(xué)診斷 ?糞便檢查,?直接涂片法簡便易行，但若用糞量過少，則存在一定的漏檢率。,1.直接涂片法,病原學(xué)診斷 ?糞便檢查,重力沉淀法,適合于比重大于水的原蟲包囊及各種蠕蟲卵。,重力沉淀法,1.直接涂片法2.濃集法,病原學(xué)診斷 ?糞便檢查,1.直接涂片法2.濃集法,病原學(xué)診斷 ?糞便檢查,浮聚法,飽和鹽水浮聚法硫酸鋅浮聚法,飽和鹽水浮聚法,病原學(xué)診斷 ?糞便檢查,1

10、.直接涂片法2.濃集法,鉤蟲 糞類圓線蟲 毛圓線蟲,鉤蚴培養(yǎng)法,1.直接涂片法2.改良加藤氏法3.濃集法4.線蟲幼蟲培養(yǎng)法,病原學(xué)診斷 ?糞便檢查,1.直接涂片法2.改良加藤氏法3.濃集法4.線蟲幼蟲培養(yǎng)法5.毛蚴孵化法,病原學(xué)診斷 ?糞便檢查,棉拭子法 透明膠紙法,1.直接涂片法2.改良加藤氏法3.濃集法4.線蟲幼蟲培養(yǎng)法5.毛蚴孵化法6.肛門拭子法,病原學(xué)診斷 ?糞便檢查,,,病原學(xué)診斷 ?糞便檢查,

11、病原學(xué)診斷 ?血液檢查,瘧原蟲絲蟲利什曼原蟲弓形蟲,病原學(xué)診斷 ?血液檢查,1.薄血膜法(查瘧原蟲）,采血,,推片,,畫線,,染色,,鏡檢,病原學(xué)診斷 ?血液檢查,2.厚血膜法(查瘧原蟲和微絲蚴）,采血,,涂片,,溶血,,染色,,鏡檢,1.薄血膜法(查瘧原蟲）,病原學(xué)診斷 ?血液檢查,注意事項：1.玻片的潔凈程度對涂制血膜的質(zhì)量有直接關(guān)系，因此要求嚴格按規(guī)程清洗玻片。,2. 采血時間：瘧疾現(xiàn)癥病人可隨時取血，一般以 寒熱

12、發(fā)作時或發(fā)作后數(shù)小時取血為好；夜現(xiàn)周 期型淋巴絲蟲感染調(diào)查則應(yīng)在21～2時之間采 血。,病原學(xué)診斷 ?組織活檢,? 皮膚,皮膚利什曼病 皮膚阿米巴病 豬囊尾蚴病 肺吸蟲病 棘腭口線蟲病 盤尾絲蟲病 疥瘡,病原學(xué)診斷 ?組織活檢,? 皮膚? 骨髓,杜氏利什曼原蟲,病原學(xué)診斷 ?組織活檢,? 皮膚? 骨髓? 淋巴結(jié),內(nèi)臟利什曼病 錐蟲病 弓形蟲病 絲蟲病,病原學(xué)診斷 ?組織活檢,? 皮膚?

13、骨髓? 淋巴結(jié)? 肌肉,旋毛蟲病 囊蟲病 裂頭蚴病 肺吸蟲病,病原學(xué)診斷 ?組織活檢,? 皮膚? 骨髓? 淋巴結(jié)? 肌肉? 直腸,溶組織內(nèi)阿米巴 血吸蟲卵,病原學(xué)診斷 ?組織活檢,? 皮膚? 骨髓? 淋巴結(jié)? 肌肉? 直腸? 肺,衛(wèi)氏并殖吸蟲成蟲/蟲卵 溶組織內(nèi)阿米巴 卡氏肺孢子蟲,?痰液,病原學(xué)診斷 ?其他標(biāo)本檢查,衛(wèi)氏并殖吸蟲 蛔蟲幼蟲 鉤蟲幼蟲 糞類圓線蟲幼蟲 卡氏肺孢子蟲 溶組織內(nèi)阿米

14、巴滋養(yǎng)體,?痰液?尿液,埃及血吸蟲卵 腎膨結(jié)線蟲卵 陰道毛滴蟲 艾氏小桿線蟲成蟲,病原學(xué)診斷 ?其他標(biāo)本檢查,?痰液?尿液?陰道分泌物,陰道毛滴蟲 溶組織內(nèi)阿米巴滋養(yǎng)體,病原學(xué)診斷 ?其他標(biāo)本檢查,?痰液?尿液?陰道分泌物?十二指腸抽取液,藍氏賈第鞭毛蟲 華支睪吸蟲卵 肝片形吸蟲卵 布氏姜片蟲卵 溶組織內(nèi)阿米巴大滋養(yǎng)體,病原學(xué)診斷 ?其他標(biāo)本檢查,?痰液?尿液?陰道分泌物?十二指腸抽取液?鞘膜

15、積液,班氏微絲蚴,病原學(xué)診斷 ?其他標(biāo)本檢查,?痰液?尿液?陰道分泌物?十二指腸抽取液?鞘膜積液?腦脊液,弓形蟲 耐格里屬阿米巴 廣州圓線蟲,病原學(xué)診斷 ?其他標(biāo)本檢查,病原學(xué)診斷 ?動物接種,在懷疑弓形蟲感染時，可采取血液、骨髓、淋巴結(jié)、腦脊液沉淀的涂片染色鏡檢，但陽性機會不大，因此常將上述材料接種小白鼠以分離病原體。,1.皮內(nèi)試驗(IDT)2.間接血凝試驗(IHA)3.免疫熒光法（IF）4.免疫酶染色試驗（IE

16、ST）5.酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）6.膠體金免疫測定技術(shù)（CGIA）,免疫學(xué)診斷,免疫學(xué)診斷,酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）,1) 抗原包被2) 加樣（一抗）3) 洗滌4) 加酶標(biāo)抗體（二抗）5) 洗滌6) 加底物顯色7) 觀察結(jié)果,免疫學(xué)診斷,膠體金免疫測定技術(shù)（CGIA）,Dipstick,+ –,CT,,,免疫學(xué)診斷,存在的問題 1. 不同寄生蟲之間的交叉反應(yīng)， 2. 難以區(qū)分現(xiàn)癥感染與既往感染。,解

17、決辦法 1. 單一組分抗原， 2. 檢測短程抗體。,分子生物學(xué)診斷,1.核酸分子雜交技術(shù),,,*,蟲體 DNA模板,標(biāo)記的 DNA 探針,,,,,,,分子生物學(xué)診斷,2. PCR技術(shù),分子生物學(xué)診斷,2. PCR技術(shù),50?l反應(yīng)體系10×PCR緩沖液 5?lP1 0.2?mol/LP2 0.2

18、?mol/LdNTP 200?mol/LTaq酶 2U樣本DNA 0.1?g H2O 補足50?l,分子生物學(xué)診斷,2. PCR技術(shù),94℃ 4’94℃ 1’56℃ 1’72℃ 1’72℃ 8’,,35 Cycles,

19、分子生物學(xué)診斷,2. PCR技術(shù),PCR技術(shù)具有高度的敏感性，有嚴格的操作要求，若操作不當(dāng)，很容易出現(xiàn)假陽性和假陰性，因此，在試驗中應(yīng)嚴格遵守操作規(guī)程，并同時設(shè)立陽性、陰性和空白對照。,湖 南 63794 76.705 4652.9,湖 南 63794 76.705

20、 4652.9,,感染蟲種數(shù) 感染人數(shù) 平均感染率（%） 構(gòu)成比（%） 1 499871 33.8267 56.6709 2 256684 17.3700 29.1005

21、3 96225 7.3009 10.9091 4 24109 1.6315 2.7332 5 4372 0.2959

22、 0.4957 6 686 0.0464 0.0778 7 95 0.0064 0.0108 8

23、 16 0.0011 0.0018 9 2 0.0001 0.0002,,,,單一與多蟲感染的感染率及構(gòu)成比,（二）寄生蟲病的流行特點,1、地方性：,a. 中間宿主與媒介昆蟲的分布,（二）寄生蟲病的流行特點,1、地方性：,a. 中間宿

24、主與媒介昆蟲的分布,b. 生活習(xí)慣和生產(chǎn)方式 ( 血吸蟲的感染方式),（二）寄生蟲病的流行特點,1、地方性：,a. 中間宿主與媒介昆蟲的分布,b. 生活習(xí)慣和生產(chǎn)方式 ( 血吸蟲的感染方式),c. 氣候,2、季節(jié)性：,a. 媒介昆蟲的季節(jié)性所致,b. 人類生產(chǎn)、生活活動形成感染季節(jié)性,（二）寄生蟲病的流行特點,,2、季節(jié)性：,a. 媒介昆蟲的季節(jié)性所致,b. 人類生產(chǎn)、生活活動形成感染季節(jié)性,c. 寄生蟲在外界發(fā)育及活動的季節(jié)性,（二）

25、寄生蟲病的流行特點,,3、自然疫源性,a. 基本概念： 有些人體寄生蟲無明顯宿主特異性， 可寄生于多種動物，這些寄生蟲可在 無人參與的情況下在動物之間相互傳 播。這種性狀稱自然疫源性。,b. 人獸共患寄生蟲病(parasitic zoonoses):

26、 在脊椎動物與人之間自 然傳播的寄生蟲病。,c. 意義：(a) 反映寄生蟲在自然界的演化過程； (b) 反映寄生蟲病在流行病學(xué)和防治中 的復(fù)雜性；,（二）寄生蟲病的流行特點,（三）流行三環(huán)節(jié),1、傳 染 源 體內(nèi)有寄生蟲生存、繁殖，并能將 寄生蟲排出體外的人和動物。

27、,2、傳播途徑 寄生蟲由傳染源排出以后，經(jīng)過一 定的方式再侵入其他易感者所經(jīng)過 的途徑。,經(jīng)口感染,蛔蟲、蟯蟲、溶組織內(nèi)阿米巴、肺吸蟲、肝吸蟲、帶絳蟲等,感染方式小結(jié),,經(jīng) 口 感 染,自 體 外 感 染,自 體 內(nèi) 感 染,輸 血

28、 感 染,經(jīng) 胎 盤 感 染,直 接 接 觸 傳 播,由 節(jié)肢 動物 傳 播,經(jīng)皮膚、粘膜感染,蛔蟲、蟯蟲、溶組織內(nèi)阿米巴、肺吸蟲、肝吸蟲、帶絳蟲等,鉤蟲、血吸蟲、絲蟲等,絲蟲、瘧原蟲、利氏曼原蟲,陰道毛滴蟲、疥螨,弓形蟲,瘧原蟲,豬帶絳蟲,蟯蟲,感染方式小結(jié),,,,,,,,,（三）流行三環(huán)節(jié),1、傳 染 源 體內(nèi)有寄生蟲生存、繁殖，并能將

29、 寄生蟲排出體外的人和動物。,2、傳播途徑 寄生蟲由傳染源排出以后，經(jīng)過一 定的方式再侵入其他易感者所經(jīng)過 的途徑。,3、易感人群 對寄生蟲有較高感受性的人群。,（四）影響寄生蟲病流行的因素,1、自然因素 溫度、濕度、雨量、植被、地理環(huán)

30、 境等。,各?。▍^(qū)、市）總感染率分級標(biāo)化感染率（%） ?。▍^(qū)、市）17.0~29.9 黑龍江、內(nèi)蒙古 北30.0~39.9 吉林、寧夏、北京、天津、山西40.0~49.9 河北、新疆、甘肅、青海、陜西、上海

31、50.0~59.9 湖北、西藏、山東、遼寧60.0~69.9 江蘇、河南、安徽70.0~79.9 廣東、云南、湖南、江西80.0~89.9 浙江、貴州、四川、福建、廣西90.0~ 海南

32、 南,,,,,（四）影響寄生蟲病流行的因素,1、自然因素 溫度、濕度、雨量、植被、地理環(huán) 境等。,3、社會因素 國家政策、經(jīng)濟狀況、科學(xué)水平、 文化教育、醫(yī)療衛(wèi)生、防疫保健、生產(chǎn)方式。,2、生物因素 中間宿主、媒介昆蟲。,原則：切斷寄生蟲病流行的三環(huán)節(jié),（一）消 滅 傳 染 源

33、 普查、普治病人、帶蟲者以及 保蟲宿主,（二）切斷傳播途徑 加強糞便和水源管理，注意環(huán) 境和個人衛(wèi)生，控制和消滅傳 播媒介及中間宿主,（三）保 護

34、易 感 者 加強個體防護，提高自我保護 意識,,,患者周××，男，25歲，某部戰(zhàn)士，四川五勝縣人，因糞便毛蚴孵化陽性而入院。患者1965年入伍，駐四川省西昌專區(qū)某地，該地為血吸蟲病流行區(qū)，入伍后，曾參加水稻種植，常與疫水接觸。1967年間因經(jīng)常有間歇性腹瀉，懷疑患血吸蟲病，在本單位先后作毛蚴孵化檢查八次，均為陰性。后又發(fā)現(xiàn)肝、脾腫

35、大。1970年8月曾在部隊醫(yī)院割治扁桃腺，住院期間曾作過血吸蟲皮內(nèi)試驗，呈陽性反應(yīng)，但因乙狀結(jié)腸組織鏡檢未見蟲卵而未能確診。出院回原單位后，于一次腹瀉后在衛(wèi)生隊又做糞便毛蚴孵化檢查，結(jié)果孵出毛蚴，才確診為血吸蟲病。,體格檢查：肝可觸及，有壓痛。脾于肋緣下約 2cm處觸及，中等硬度，無壓痛。余 無異常?；灲Y(jié)果：白細胞總數(shù)7400，嗜酸性粒細胞10%， 肝功能正常。治療