分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)常用試劑、緩沖液的配制方法

1、實(shí)驗(yàn)常用試劑、緩沖液的配制方法實(shí)驗(yàn)常用試劑、緩沖液的配制方法1、1MTrisHCl□組份濃度1MTrisHCl（pH7.4，7.6，8.0）□配制量1L□配置方法1.稱量121.1gTris置于1L燒杯中。2.加入約800mL的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?.按下表量加入濃鹽酸調(diào)節(jié)所需要的pH值。pH值濃HCl7.4約70mL7.6約60mL8.0約42mL4.將溶解定容至1L。5.高溫高壓滅菌后，室溫保存。注意：應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定

2、pH值，因?yàn)門ris溶液的pH值隨溫度的變化差很大，溫度每升高1℃，溶液的pH值大約降低0.03個(gè)單位。2、1.5MTrisHCl□組份濃度1.5MTrisHCl（pH8.8）□配制量1L□配置方法1.稱取181.7gTris置于1L燒杯中。2.加入約800mL的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?.用濃鹽酸調(diào)pH值至8.8。4.將溶液定容至1L。5.高溫高壓滅菌后，室溫保存。注意：應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH值，因?yàn)門ris溶液的pH值隨溫度

3、的變化差異很大，溫度每升高1℃，溶液的pH值大約降低0.03個(gè)單位。3、10TEBuffer□組份濃度100mMTrisHCl，10mMEDTA（pH7.4，7.6，8.0）□配制量1L□配置方法1.量取下列溶液，置于1L燒杯中。1MTrisHClBuffer（pH7.4，7.6，8.0）100mL500mMEDTA（pH8.0）20mL2.向燒杯中加入約800mL的去離子水，均勻混合。3.將溶液定至1L后，高溫高壓滅菌。4.室溫保存。

4、4、3M醋酸鈉醋酸鈉□組份濃度3M醋酸鈉（pH5.2）□配制量100mL□配置方法1.稱取40.8gNaOAc?3H2O置于100～200mL燒杯中，加入約40mL的去離子水?dāng)嚢枞芙狻?.加入冰乙酸調(diào)節(jié)pH值至5.2。3.加入去離子水將溶液定容至100mL。4.高溫高壓滅菌后，室溫保存。5、PBSBuffer□組份濃度137mMNaCl，2.7mMKCl，10mMNa2HPO4，2mMKH2PO4□配制量1L□配置方法1.稱量下列試劑，

5、置于1L燒杯中。NaCl8gKCl0.2gNa2HPO41.42gKH2PO40.27g2.向燒杯中加入約800mL的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?.滴加HCl將pH值調(diào)節(jié)至7.4，然后加入去離子水將溶液定容至1L。4.高溫高壓滅菌后，室溫保存。注意：上述PBSBuffer中無二價(jià)陽離子，如需要，可在配方中補(bǔ)充1mMCaCl2和0.5mMMgCl2。6、10M醋酸銨醋酸銨□組份濃度10M醋酸銨□配制量100mL□配置方法1.稱量77.1g醋

6、酸銨置于100～200mL燒杯中，加入約30mL的去離子水?dāng)嚢枞芙狻?.加去離子水將溶液定容至100mL。3.使用0.22μm濾膜過濾除菌。4.密封瓶口于室溫保存。注意：醋酸銨受熱易分解，所以不能高溫高壓滅菌。7、TrisHCl平衡苯酚平衡苯酚□配置方法1.使用原料：大多數(shù)市售液化苯酚是清亮無色的，無需重蒸餾便可用于分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。但有些液化苯酚呈粉紅色或黃色，應(yīng)避免使用。同時(shí)也應(yīng)避免使用結(jié)晶苯酚，結(jié)晶苯酚必須在160℃對(duì)其進(jìn)行重蒸餾除

7、去諸如醌等氧化產(chǎn)物，這些氧化產(chǎn)物可引起磷酸二酯鍵的斷裂或?qū)е翿NA和DNA的交聯(lián)等。因此，苯酚的質(zhì)量對(duì)DNA、RNA的提取極為重要，我們推薦使用高質(zhì)量的苯酚進(jìn)行分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。2.操作注意：苯酚腐蝕性極強(qiáng)，并可引起嚴(yán)重灼傷，操作時(shí)應(yīng)戴手套及防護(hù)鏡等。所有操作均應(yīng)在通風(fēng)櫥中進(jìn)行，與苯酚接觸過的皮膚部位應(yīng)用大量水清洗，并用肥皂和水洗滌，忌用乙醇。3.苯酚平衡：因?yàn)樵谒嵝詐H條件下DNA分配于有機(jī)相，因此使用苯酚前必須對(duì)苯酚進(jìn)行平衡使其pH值

8、達(dá)到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下：①液化苯酚應(yīng)貯存于20℃，此時(shí)的苯酚呈現(xiàn)結(jié)晶狀態(tài)。從冰柜中取出的苯酚首先在室溫下放置使其達(dá)到室溫，然后在68℃水浴中使苯酚充分溶解。②加入羥基喹啉（8Quinolinol）至終濃度0.1％。該化合物是一種還原劑、RNA酶的不完全抑制劑及金屬離子的弱螯合劑，同時(shí)因其呈黃色。有助于方便識(shí)別有機(jī)相。③加入等體積的1MTrisHCl（pH8.0），使用磁力攪拌器攪拌15分鐘，靜置使其充分分層后，除去上層水相

9、。分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)常用培養(yǎng)基的配制方法分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)常用培養(yǎng)基的配制方法1、Ampicillin□組份濃度100mgmlAmpicillin（100mgml）□配制量50mL□配置方法1.稱量5gAmpicillin置于50mL離心管中。2.加入40mL滅菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。3.用0.22μm濾膜過濾除菌。4.小份分裝（1mL份）后，20℃保存。2、IPTG□組份濃度24mgmLIPTG（24mgmL）□配制量50mL配

10、置方法1.稱量1.2gIPTG置于50mL離心管中。2.加入40mL滅菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。3.用0.22μm濾膜過濾除菌。4.小份分裝（1mL份）后，20℃保存。3、XGal□組份濃度20mgmLXGal（20mgmL）□配制量50mL□配置方法1.稱取1gXGal置于50mL離心管中。2.加入40mLDMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解后，定容至50mL。3.小份分裝（1mL份）后，20℃保存。4、LB培養(yǎng)基培養(yǎng)基□

11、組份濃度1％（WV）Tryptone，0.5％（WV）YeastExtract，1％（WV）NaCl□配制量1L□配置方法1.稱量下列試劑，置于1L燒杯中Tryptone10gYeastExtract5gNaCl10g2.加入約800mL的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?.滴加5NNaOH（約0.2mL），調(diào)節(jié)pH值至7.0。4.高溫高壓滅菌后，4℃保存。5、LBAmp培養(yǎng)基培養(yǎng)基□組份濃度1％（WV）Tryptone0.5％（WV）Yeas

12、tExtract1％（WV）NaCl0.1mgmLAmpicillin□配制量1L□配置方法1.稱量下列試劑，置于1L燒杯中Tryptone10gYeastExtract5gNaCl10g2.加入約800mL的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?.滴加5NNaOH（約0.2mL），調(diào)節(jié)pH值至7.0。4.加去離子水將培養(yǎng)基定容至1L。5.高溫高壓滅菌后，冷卻至室溫。6.加入1mLAmpicillin（100mgmL）后均勻混合。7.4℃保存。6、

13、TB培養(yǎng)基培養(yǎng)基□組份濃度1.2％（WV）Tryptone2.4％（WV）YeastExtract0.4％（VV）Glycerol17mMKH2PO472mMK2HPO4□配制量1L□配置方法1.配制磷酸鹽緩沖液（0.17MKH2PO4，0.72MK2HPO4）100mL。2.稱取下列試劑，置于1L燒杯中。Tryptone12gYeastExtract24gGlycerol4mL3.加入約800mL的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?.加去離子

14、水將培養(yǎng)基定容至1L后，高溫高壓滅菌。5.待溶液冷卻至60℃以下時(shí)，加入100mL的上述滅菌磷酸鹽緩沖液。6.4℃保存。7、TBApm培養(yǎng)基培養(yǎng)基□組份濃度1.2％（WV）Tryptone2.4％（WV）YeastExtract0.4％（VV）Glycerol17mMKH2PO472mMK2HPO40.1mgmLAmpicillin□配制量1L□配置方法1.配制磷酸鹽緩沖液（0.17MKH2PO4，0.72MK2HPO4）100mL。溶

15、解2.31gKH2PO4和2.54gK2HPO4于90mL的去離子水中，攪拌溶解后，加去離子水定容至100mL，高溫高壓滅菌。2.稱取下列試劑，置于1L燒杯中。Tryptone12gYeastExtract24gGlycerol4mL3.加入約800mL的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?.加去離子水將培養(yǎng)基定容至1L后，高溫高壓滅菌。5.待溶液冷卻至60℃以下時(shí)，加入100mL的上述滅菌磷酸鹽緩沖液和1mLAmpicillin（100mgmL

16、）。6.均勻混合后4℃保存。8、SOB培養(yǎng)基培養(yǎng)基□組份濃度2％（WV）Tryptone0.5％（WV）YeastExtract0.05％（WV）NaCl2.5mMKCl10mMMgCl2□配制量1L□配置方法1.配制250mMKCl溶液。在90mL的去離子水中溶解1.86gKCl后，定容至100mL。2.配制2MMgCl2溶液。在90mL的去離子水中溶解19gMgCl2后，定容至100mL，高溫高壓滅菌。3.稱取下列試劑，置于1L燒杯