對蝦養(yǎng)殖環(huán)境中TCBS類群細(xì)菌多樣性分析及蝦源氣單胞菌噬菌體生物學(xué)特性研究.pdf

1、由致病性細(xì)菌爆發(fā)性增殖引發(fā)的水產(chǎn)動物疾病每年都會給水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大經(jīng)濟(jì)損失。傳統(tǒng)上細(xì)菌性水產(chǎn)養(yǎng)殖疾病防治是使用抗生素，但抗生素的濫用會導(dǎo)致耐藥病原體的出現(xiàn)以及水產(chǎn)品抗生素殘留問題，對食品安全構(gòu)成嚴(yán)重威脅。噬菌體具有自我復(fù)制性、宿主高度特異性、對環(huán)境影響較少等特征，在水產(chǎn)養(yǎng)殖細(xì)菌性疾病防治方面被認(rèn)為具有替代抗生素的潛在能力。TCBS培養(yǎng)基全稱為硫代硫酸鹽檸檬酸鹽膽鹽蔗糖瓊脂培養(yǎng)基，是廣泛用于分離水產(chǎn)養(yǎng)殖致病弧菌的選擇性培養(yǎng)基，其他多種致

2、病菌也可在此培養(yǎng)基上生長。本研究旨在從南美白對蝦養(yǎng)殖環(huán)境中分離TCBS細(xì)菌類群，對其進(jìn)行多樣性調(diào)查，分析對蝦養(yǎng)殖環(huán)境中的潛在病原菌。同時分離病原細(xì)菌的裂解性噬菌體，研究其對宿主的侵染特性，為噬菌體在水產(chǎn)養(yǎng)殖細(xì)菌性疾病防治上的應(yīng)用進(jìn)行初步探索。研究結(jié)果如下：
　　1．從福建漳浦的3處南美白對蝦養(yǎng)殖場的7個養(yǎng)殖水體樣本和5個對蝦生物樣本中分離得到了73株TCBS類群細(xì)菌。這些TCBS類群細(xì)菌分離自天然淡水土塘和人工海水池塘這兩種不同的

3、水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)境。經(jīng)16S rRNA比對分析，73株菌中共分為13個屬，26個種。弧菌占總分離株數(shù)的45.2％，全部分離自海水養(yǎng)殖水樣，其余54.8%的細(xì)菌多樣性較為豐富，主要分布在淡水土塘養(yǎng)殖環(huán)境下，但在人工海水養(yǎng)殖池及各對蝦生物樣本中也多有分離到，表明海水與淡水兩種環(huán)境對于TCBS類群細(xì)菌的多樣性與種屬分布具有較大的影響。
　　2．從患紅體病的成熟南美白對蝦肝胰腺中分離到3株疑似致病菌及其裂解性噬菌體，經(jīng)16S rRNA比對分析，

4、3株疑似致病菌與嗜水氣單胞菌Aeromonas hydrophila anaerogenes親緣性近，同源性均高于99.85%，可確定分離得到了嗜水氣單胞菌噬菌體-宿主系統(tǒng)。3株噬菌體裂解性強(qiáng)，根據(jù)宿主菌編號命名為pIS-4、pIS-6與pIS-8。電鏡形態(tài)顯示pIS-4屬于肌尾病毒科，pIS-6與pIS-8屬于長尾病毒科。3株噬菌體侵染同一宿主IS-4的生物學(xué)特性有較大不同：一步生長曲線顯示pIS-4的潛伏期為20 min，裂解量為8

5、5；pIS-6的潛伏期為30 min，裂解量為109；pIS-8的潛伏期為30 min，裂解量為155。3株噬菌體的最適溫度均為25℃，在4~60℃下存活率大于60%。pIS-4的最適pH為8，pIS-6與pIS-8的最適pH為7。
　　結(jié)論：從福建漳浦的3處對蝦養(yǎng)殖場分離得到73株TCBS類群細(xì)菌，其中弧菌全部分離于海水養(yǎng)殖環(huán)境，而淡水土塘養(yǎng)殖環(huán)境下TCBS細(xì)菌的多樣性較為豐富。從患紅體病的南美白對蝦肝胰腺分離得到3株嗜水氣單胞