淡紫擬青霉產(chǎn)類植物生長(zhǎng)素功能蛋白的研究.pdf

1、淡紫擬青霉（Pacilomyces lilacinus(Thom) Samson）對(duì)植物病原線蟲(chóng)、多種農(nóng)作物害蟲(chóng)和病原菌有顯著控害效能，同時(shí)對(duì)植物的生長(zhǎng)有一定的調(diào)節(jié)作用，是一株極具推廣潛力的生防菌和功能菌。
　　為深入研究淡紫擬青霉（PL-HN-16）促進(jìn)植物生長(zhǎng)的原因，以生長(zhǎng)素（IAA）標(biāo)準(zhǔn)物為對(duì)照，采用高效液相色譜技術(shù)（HPLC）對(duì) PL-HN-16麩皮培養(yǎng)物中 IAA進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果表明PL-HN-16培養(yǎng)物中不含IAA，其

2、促進(jìn)植物生長(zhǎng)的活性物質(zhì)不是前人報(bào)道的IAA。
　　本課題組前期進(jìn)行了大量的淡紫擬青霉促進(jìn)雙子葉植物生長(zhǎng)的研究，為進(jìn)一步研究淡紫擬青霉對(duì)單子葉植物生長(zhǎng)的影響，選用水稻為試驗(yàn)對(duì)象，采用PL-HN-16培養(yǎng)液不同濃度處理水稻。結(jié)果表明，培養(yǎng)液稀釋倍數(shù)在64倍時(shí)對(duì)水稻根的生長(zhǎng)明顯優(yōu)于對(duì)照組，促進(jìn)率為23.2％；而稀釋倍數(shù)在8倍時(shí)水稻根的生長(zhǎng)則受到明顯的抑制作用，抑制率為-70.5%；PL-HN-16培養(yǎng)液稀釋倍數(shù)在8倍和16倍時(shí)水稻株高大

3、于對(duì)照組，在 p<0.05水平上差異不顯著；稀釋倍數(shù)在2倍時(shí)水稻株高小于對(duì)照組，在p<0.05水平上差異顯著，表現(xiàn)出明顯的高濃度抑制植物生長(zhǎng)，低濃度促進(jìn)植物生長(zhǎng)，與前期研究結(jié)果一致。
　　在課題組前期建立的類植物生長(zhǎng)素功能蛋白分離純化基礎(chǔ)上，對(duì)PL-HN-16培養(yǎng)上清液，pH大約為4.5，采用CM Sepharose Fast Flow離子交換層析，用0.15 M、0.3 M和0.5 M NaCl的醋酸緩沖液進(jìn)行梯度洗脫，得到三個(gè)

4、組分F1、F2和F3，均在一定濃度內(nèi)對(duì)菜心生長(zhǎng)有促進(jìn)作用，其中 F1組分最佳促進(jìn)濃度為1μg/mL，促進(jìn)率為24.60%；F2組分最佳促進(jìn)濃度為0.1μg/mL，促進(jìn)率為23.06%；F3組分最佳促進(jìn)濃度為0.01μg/mL，促進(jìn)率為23.59%，p<0.05水平上差異顯著。對(duì)F3組分過(guò)Superdex75分子篩，得到大小為14.4 kDa的類植物生長(zhǎng)素功能蛋白；經(jīng)雙向電泳檢測(cè)，結(jié)果為單一位點(diǎn)；對(duì)菜心生長(zhǎng)活性試驗(yàn)中，在0.01μg/mL

5、時(shí)，與對(duì)照組相比，表現(xiàn)出明顯的促進(jìn)作用，其根長(zhǎng)、芽長(zhǎng)和全長(zhǎng)促進(jìn)率分別為24.24%、4.78%和13.04%，在p<0.05水平上差異性顯著。通過(guò)LC-Ms/Ms分析目的蛋白，該蛋白為未知蛋白，對(duì)具有獨(dú)有肽段的蛋白質(zhì)進(jìn)行功能分析，表明目的蛋白與產(chǎn)能和能量轉(zhuǎn)化有關(guān)。對(duì)目的蛋白進(jìn)行 N端測(cè)序分析，獲得6個(gè)氨基酸序列，因技術(shù)制約，無(wú)法獲得后續(xù)氨基酸。Blast比對(duì)結(jié)果表明為未知蛋白。
　　采用苗期、盆栽和大田試驗(yàn)，研究了PL-HN-16

6、麩皮菌劑對(duì)煙葉生長(zhǎng)影響。苗期試驗(yàn)表明，0.5%菌劑處理組比對(duì)照組在高度和最大葉面積上促進(jìn)率分別為54.41%和23.13%；1.5%菌劑處理組在株高、葉面積均明顯的低于對(duì)照組，表現(xiàn)出明顯抑制作用。盆栽試驗(yàn)表明：菌劑處理組的煙株在株高、最大葉長(zhǎng)、最大葉寬和最大葉面積等方面優(yōu)勢(shì)明顯優(yōu)于對(duì)照組，1.5%處理組比對(duì)組照分別高出79.28%、71.94%、36.22%和138.14%，差異顯著。大田試驗(yàn)數(shù)據(jù)表明：5 g/株和10 g/株處理組的煙