氨基酸薄層層析

1、氨基酸薄層層析氨基酸薄層層析一、實驗目的一、實驗目的1、理解并掌握薄層層析法的原理。2、掌握氨基酸薄層層析法的正確的操作步驟。3、掌握根據(jù)不同物質的移動速率（Rf值）來鑒定被分離的混合物的各種組分。二、實驗原理二、實驗原理1.薄層層析原理薄層層析原理薄層層析時一般是將固體吸附劑涂布在平板上形成薄層作為固定相。當液相（展開溶劑）在固定相上流動時，由于吸附劑對不同氨基酸的吸附力不一樣，不同氨基酸在展開溶劑中的溶解度不一樣，點在薄板上的混合氨

2、基酸樣品隨著展開劑的移動速率也不同，因而可以彼此分開。（即通過吸附解吸再吸附再解吸的反復進行，而將樣品各組分分離開來）2.2.氨基酸與茚三酮的顯色反應氨基酸與茚三酮的顯色反應茚三酮水化后生成水化茚三酮，它與氨基酸的羧基反應生成還原茚三酮、氨及醛，與此同時，還原茚三酮又與氨及茚三酮縮合生成紫紅化合物而使氨基酸斑點顯色。3.3.基于相對遷移率基于相對遷移率RfRf值判定混合氨基酸組分值判定混合氨基酸組分薄層層析中，物質沿溶劑運動方向遷移的距

3、離與溶液前沿的距離之比為Rf值原點到溶劑前沿的距離距離原點到層析斑點中心的薄層層析的具體操作步驟：步驟操作（1）制板①調漿：稱取硅膠3g，加0.5%的羧甲基纖維素鈉8ml，調成均勻的糊狀②涂布：取潔凈的干燥玻璃板，均勻涂層③干燥：將玻璃板水平放置，室溫下放置0.5h，自然晾干④活化：70度下烘干60min（2）點樣①標記：用鉛筆距底邊2cm水平線上均勻確定4個點并做好標記。每個樣品間距1cm②點樣：用毛細管分別吸取丙氨酸、甘氨酸、精氨酸