免疫第十八單元

1、第十八單元第十八單元免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)一、血清學(xué)技術(shù)血清學(xué)反應(yīng)是指在體外進(jìn)行的抗原抗體結(jié)合反應(yīng)，相關(guān)的技術(shù)稱為血清學(xué)技術(shù)。(一)沉淀反應(yīng)可溶性性抗原和相應(yīng)特異性抗體以合適的比例結(jié)合，在反應(yīng)體系中出現(xiàn)不透明的沉淀物，這種抗原抗體反應(yīng)稱為沉淀反應(yīng)。單向免疫擴(kuò)散、雙向免疫擴(kuò)散、對(duì)流免疫電泳、免疫電泳均為沉淀反應(yīng)。1單向免疫擴(kuò)散制備含特異性抗體的瓊脂板。在適當(dāng)?shù)奈恢么蚩祝酉鄳?yīng)抗原于孔內(nèi)?？乖孕】紫蛩闹墉傊袛U(kuò)散，在適當(dāng)?shù)奈恢眯纬森h(huán)

2、狀的沉淀線。環(huán)的直徑和抗原的濃度呈正相關(guān)。此法常用于人或動(dòng)物血清免疫球蛋白和補(bǔ)體成分的測(cè)定。2雙向免疫擴(kuò)散在瓊脂板上按一定距離打孔。在相鄰的兩孔中分別加入抗原和抗體?？乖涂贵w在瓊脂中擴(kuò)散，當(dāng)二者相對(duì)應(yīng)時(shí)，可在兩孔間的適當(dāng)位置形成由免疫復(fù)合物組成的沉淀線。此法常被用于抗原或抗體的定性。3對(duì)流免疫電泳將兩端各打一排孔的瓊脂板置電泳槽中，在陰極一側(cè)的孔中加抗原，陽極一側(cè)孔中加抗體，通電使抗原抗體分子泳動(dòng)，當(dāng)二者相對(duì)應(yīng)時(shí)，可于一定時(shí)間后在兩排

3、孔之間形成沉淀線。對(duì)流電泳是電場(chǎng)作用下的雙向免疫擴(kuò)散。4免疫電泳先將待測(cè)抗原樣品做瓊脂糖凝膠電泳，使不同的組分依電泳速度不同而分散開。然后在樣品泳道一側(cè)的適當(dāng)距離處挖一和泳道平行的直線溝槽。于槽內(nèi)加入已知抗體(一種或多種)。讓抗原和抗體進(jìn)行雙向免疫擴(kuò)散，在泳道和槽的中間形成沉淀線。此法可用于免疫球蛋白缺乏或增多疾病的診斷和鑒別診斷。(二)凝集反應(yīng)顆粒性抗原(細(xì)菌、紅細(xì)胞、偶聯(lián)抗原的乳膠顆粒)與相應(yīng)抗體結(jié)合后出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象，此稱為

4、凝集反應(yīng)。1直接凝集直接凝集是顆粒性抗原(細(xì)菌、紅細(xì)胞)與相應(yīng)抗體結(jié)合產(chǎn)生的凝集反應(yīng)。利用直接凝集可鑒定細(xì)菌和血型。2間接凝集將可溶性抗原或抗體包被在紅細(xì)胞或乳膠顆粒載體表面后，與相應(yīng)抗體或抗原作用出現(xiàn)的凝集。采用紅細(xì)胞為載體的間接凝集稱間接血凝。采用乳膠顆粒為載體的凝集稱為乳膠凝集。以包被抗原檢測(cè)抗體的間接凝集稱為正向間接凝集。以包被抗體檢測(cè)抗原的間接凝集稱為反向間接凝集。用此法可檢測(cè)乙型肝炎表面抗原和甲胎蛋白此法可檢測(cè)乙型肝炎表面抗

5、原和甲胎蛋白等?！練v年真題解析】1.血清中常規(guī)檢查檢測(cè)不到的HBV標(biāo)志物是(2004)AHBsAgBHBeAgCHBcAgD抗HBeE抗HBc答案：C解析：目前臨床診斷乙型肝炎最常用的是檢測(cè)HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe和抗HBc，俗稱“乙肝兩對(duì)半乙肝兩對(duì)半”。核心抗原(HBcAg)存在于Dane顆粒核心結(jié)構(gòu)的表面，為內(nèi)衣殼成分，其外被HBsAg所覆蓋，因此在周圍血中很難檢測(cè)到。2.骨肉瘤病人可出現(xiàn)（2002）A血

6、酸性磷酸酶升高B血堿性磷酸酶升高C血CEA升高1免疫酶染色酶標(biāo)抗體和抗原(如組織切片上的抗原)發(fā)生特異性結(jié)合后，加入酶底物。底物在酶的催化下生成有色的物質(zhì)。2酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)(1)間接法：將已知的抗原包被在固相載體的表面，加入待檢標(biāo)本(含特異性抗體)，再加入酶標(biāo)記抗Ig抗體(第二抗體)。加底物顯色，根據(jù)顏色的光密度判定標(biāo)本中抗體的含量。(2)夾心法：將已知的特異性抗體包被在固相載體表面，加入待檢標(biāo)本(含抗原)，標(biāo)

7、本中的抗原和包被的抗體結(jié)合。沖洗后，加入該抗原的酶標(biāo)抗體，加底物顯色。根據(jù)顏色的光密度判定標(biāo)本中抗原的含量。3ELISPOT測(cè)定法用某種細(xì)胞因子的抗體包被固相載體(如96孔板)，加入待檢細(xì)胞，經(jīng)孵育后，如待檢細(xì)胞分泌了細(xì)胞因子，這些因子被包被的抗體捕獲。洗去細(xì)胞，加細(xì)胞因子特異性抗體。洗去未結(jié)合抗體。加酶標(biāo)抗體，洗去未結(jié)合抗體。加底物顯色后，可出現(xiàn)有顏色的斑點(diǎn)。根據(jù)斑點(diǎn)的數(shù)量可判定細(xì)胞因子分泌細(xì)胞的數(shù)量，根據(jù)斑點(diǎn)的深淺，也可判定此細(xì)胞因

8、子的相對(duì)含量。(四)化學(xué)發(fā)光物質(zhì)標(biāo)記技術(shù)用化學(xué)發(fā)光物質(zhì)(如魯米諾)標(biāo)記的抗原或抗體進(jìn)行抗體或抗原檢測(cè)的方法。其結(jié)果用發(fā)光光度計(jì)來檢測(cè)。(五)免疫印跡試驗(yàn)將抗原物質(zhì)用聚丙烯酰胺凝膠電泳分帶后轉(zhuǎn)至硝酸纖維素膜上，用酶標(biāo)或放射性核素標(biāo)記的抗體識(shí)別和結(jié)合抗原，加底物顯色或做放射自顯影顯示結(jié)果。該法能測(cè)定待檢蛋白質(zhì)的分子量和特異性。應(yīng)用該法檢測(cè)血清中的HIV抗體是確認(rèn)HIV感染的方法。三、淋巴細(xì)胞的分離和檢測(cè)技術(shù)(一)外周血單個(gè)核細(xì)胞的分離聚糖泛

9、影葡胺(又稱淋巴細(xì)胞分離液)密度梯度離心法是分離制備外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheralbloodmononuclearcell，PBMC)的常用方法。將抗凝血疊加于分離液上，通過低速離心，即可將不同比重的細(xì)胞分層：紅細(xì)胞沉于管底；中性粒細(xì)胞密集布于紅細(xì)胞層與分離液之間；血小板懸浮于血漿中；PBMC則密集于血漿層與分離液界面。PBMC含淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞。利用單核細(xì)胞粘附塑料的特性，可將其從PBMC中移去。(二)流式細(xì)胞法流式細(xì)胞法(

10、flowcytometry，F(xiàn)CM)是用熒光活化細(xì)胞分類儀(fluescenceactiratedcellster，F(xiàn)ACS)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行分類的方法。用熒光素標(biāo)記的抗體識(shí)別和結(jié)合待分離的細(xì)胞。根據(jù)細(xì)胞標(biāo)記熒光素的有無和種類，采用FACS可分離各種免疫細(xì)胞。采用流式細(xì)胞法，也可利用細(xì)胞的表面標(biāo)志對(duì)各種免疫細(xì)胞進(jìn)行鑒定?！練v年真題解析】1要從混合的T、B細(xì)胞中分離T細(xì)胞，最佳的方法是A.流式細(xì)胞技術(shù)B.放射免疫分析法C.ELISAD.

11、雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)E.免疫電泳答案：A解析：流式細(xì)胞術(shù)是一種可以對(duì)細(xì)胞或亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)進(jìn)行快速測(cè)量的新型分析技術(shù)和分選技流式細(xì)胞術(shù)是一種可以對(duì)細(xì)胞或亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)進(jìn)行快速測(cè)量的新型分析技術(shù)和分選技術(shù)。術(shù)。其特點(diǎn)是：①測(cè)量速度快測(cè)量速度快；②可進(jìn)行多參數(shù)測(cè)量可進(jìn)行多參數(shù)測(cè)量，并具有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；③是一門綜合性的高科技方法，它綜合了激光技術(shù)、計(jì)算機(jī)技術(shù)、流體力學(xué)、細(xì)胞化學(xué)、圖像技術(shù)等從多領(lǐng)域的知識(shí)和成果；④既是細(xì)胞分析技術(shù)，又是精確的分選技