氨基酸的薄層層析

1、實驗4氨基酸的薄層層析一、一、實驗實驗原理原理薄層層析是一種將固定相在固體上鋪成薄層進行層析的方法。由于該方法具有操作簡便、層析展開時間短、靈敏度高、結果可視化等優(yōu)點，已被廣泛應用于生物化學、醫(yī)藥衛(wèi)生、化學工業(yè)、農業(yè)生產和食品等領域，對天然化合物的分離和鑒定也已廣泛應用。薄層層析時一般將固體吸附劑涂布在平板上形成薄層作為固定相。當液相（展開溶劑）在固定相上流動時，由于吸附劑對不同氨基酸的吸附力不一樣，不同氨基酸在展開溶劑中的溶解度不一樣

2、，點在薄板上的混合氨基酸樣品隨著展開劑的移動速率也不同，因而可以彼此分開。即通過吸附解吸再吸附再解吸的反復進行，而將樣品各組分分離開。本實驗應用硅膠作為固相支持物，用羧甲基纖維素鈉作為粘合劑，以正丁醇、冰醋酸及水的混合液為展開劑，測定混合氨基酸中各分離斑點的Rf值（Rf值詳見第一篇第三章第五節(jié)），以分離和鑒別混合氨基酸的成分。氨基酸的顯色反應：茚三酮水化后生成水化茚三酮，它與氨基酸發(fā)生羧基反應生成還原茚三酮、氨基醛，與此同時，還原茚三酮

3、又與氨基茚三酮縮合生成藍色化合物而使氨基酸斑點顯色。二、二、實驗實驗材料材料（一）（一）樣品1氨基酸標準溶液：（1）0.01molL丙氨酸：稱取丙氨酸8.9mg溶于90%異丙醇溶液至10ml。（2）0.01molL精氨酸：稱取精氨酸17.4mg溶于90%異丙醇溶液至10ml。（3）0.01molL甘氨酸：稱取甘氨酸7.5mg溶于90%異丙醇溶液至10ml。2混合氨基酸溶液：將0.01molL丙氨酸、精氨酸、甘氨酸按等體積制成混合溶液。（

4、二）（二）試劑試劑1硅膠G(C.P.)涂層裂開。0.5h，自然涼干。（4）活化：70℃c烘干60分鐘。a.用冷風吹干，避免破壞氨基酸。最好從玻板背面吹。b.重復點樣時必須等第一點樣品干后再點第二點。2點樣↓（1）標記：用鉛筆距底邊2cm水平線上均勻確定4個點并做好標記。每個樣品間相距1cm。（2）點樣：用毛細管分別吸取丙氨酸、精氨酸、甘氨酸及混合氨基酸溶液，輕輕接觸薄層表面點樣。加樣原點擴散直徑不超過2mm。點樣后用電吹風a輕輕吹干，必