蛙類后肢血管灌流

1、蛙類后肢血管灌流蛙類后肢血管灌流【目的要求】1學(xué)習(xí)后肢血管灌流的方法。2觀察某些藥物對血管緊張度的影響。【基本原理】器官灌流法是重要的分析性實(shí)驗(yàn)方法之一，可用于研究某些體液因素或藥物對器官組織的直接作用。蟾蜍后肢灌流是將任氏液灌入離體后肢的動脈，在一定壓力的作用下，使灌流液流經(jīng)組織毛細(xì)血管，再從靜脈流出。如果在灌流液中加入某種藥物，則可根據(jù)靜脈流出量的變化，了解藥物對血管的作用?！緞游锱c器材】蟾蜍或蛙、常用手術(shù)器械、5000ml貯液瓶、

2、螺絲止水夾、莫非氏管、輸液導(dǎo)管、五角板（圖429）、動脈插管（一段尖端拉細(xì)的塑料管）、記紋鼓或記錄儀、記滴器或多用儀、電極支架、受滴器、電磁標(biāo)、秒表、固定針、10ml量筒、1ml注射器、5號針頭、玻璃管、任氏液、去甲腎上腺素（1∶10000）、乙酰膽堿（1∶1000000）。【方法與步驟】1準(zhǔn)備恒壓灌流裝置按圖429安裝，將一5000ml有下口的貯液瓶裝滿任氏液。將瓶的上口插入一根中心玻璃管，用膠塞封閉瓶口，使貯液瓶內(nèi)溶液只通過中心管與

3、大氣相通，并且固定中心管的下口位置。灌流壓力等于由中心管下口水平至血管所在水平面的液柱高度的壓力。打開螺絲上水夾，使灌流液充滿導(dǎo)管，并調(diào)節(jié)莫非氏管內(nèi)的滴管出口，使之高于管內(nèi)液面（便于觀察滴數(shù)）。關(guān)閉止水夾。2標(biāo)本制備蟾蜍或蛙雙毀髓后，背位置于五角板上，自下腹部中線剪開腹壁，輕輕將內(nèi)臟推向一側(cè)，再剪開背部腹膜，分離背主動脈，用線結(jié)扎尿殖動脈，以防漏液。在背主動脈下方穿兩條線，一條線用以結(jié)扎近心端，另一條線在遠(yuǎn)心端打一活結(jié)備用。左手提起近心

4、端的結(jié)扎線，右手用眼科剪沿離心方向在背主動脈上剪一小口，將準(zhǔn)備好的動脈插管從切口處插入，用備用線扎緊插管。打開止水夾，用灌流液沖洗血管內(nèi)血液。調(diào)節(jié)止水夾，使灌流速度保持20滴min左右。用金冠剪剪去動脈插管前方的肢體。內(nèi)臟器官自基部結(jié)扎后再剪去。將兩后肢趾端固定于灌流蛙板上，固定動脈插管（圖429），防止灌流過程中發(fā)生扭曲。3將五角板固定在支架上，使其肢端位于上方，軀干部位于斜下方。靜脈流出液集中于五角板的一角流下。固定灌流壓力為15—

5、25cmH2O。4固定受滴器使流出的液滴正好可以接通受滴器的兩電極（勿使液滴停留在兩極之間，以免發(fā)生短路）。受滴器的插頭接多用儀或記滴器的受滴器插孔。用記紋鼓記錄時，自上而下依次安裝記滴、刺激標(biāo)記及記時標(biāo)記電磁標(biāo)，各自的插頭插入多用儀的同名插孔，3只筆尖對齊。開啟電動記紋鼓，連續(xù)記錄3—4次穩(wěn)定的流量（計(jì)數(shù)0.5min滴數(shù)或用量筒收集流出液），求出均值作為對照。5于灌流導(dǎo)管近動脈插管處用注射針頭刺入管內(nèi)，緩慢注入0.2ml去甲腎上腺素溶

6、液，同時作好加藥記號，記錄流量變化。6待流量穩(wěn)定后，用同樣方法觀察并記錄乙酰膽堿對流量的影響。將記錄的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)填入表47表4747后肢灌流實(shí)驗(yàn)記錄表（后肢灌流實(shí)驗(yàn)記錄表（0.5min0.5min流量）流量）對照1234均值對照1234均值(ml或滴)(ml或滴)給藥后時間(min)流量(ml或滴)給藥后時間(min)流量(ml或滴)1133551010151520203030去甲腎上腺素乙酰膽堿7收集各組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，按附錄三統(tǒng)計(jì)方法處理。