凝血酶對(duì)兔缺血后肢血管新生的影響.pdf

1、目的： 1．觀察經(jīng)肌肉局部注射凝血酶對(duì)兔缺血后肢血管新生的影響； 2．初步探討凝血酶誘導(dǎo)缺血組織血管新生的可能機(jī)制。 方法： 選用成年健康新西蘭兔40只，采用切除左側(cè)后肢股動(dòng)脈并結(jié)扎其主要分支的方法建立兔后肢缺血模型，于造模后隨機(jī)分為生理鹽水對(duì)照組（NS組）和凝血酶組（THR組），NS組經(jīng)缺血后肢肌肉注射生理鹽水2ml，THR組經(jīng)缺血后肢肌肉注射凝血酶溶液2ml（濃度500IU/ml）。每組動(dòng)物再設(shè)立3天

2、、7天、14天和21天4個(gè)觀察時(shí)間點(diǎn)（n=5）。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物于各時(shí)間點(diǎn)行血管造影，觀察缺血后肢側(cè)枝血管形成情況；取實(shí)驗(yàn)動(dòng)物內(nèi)收肌肌肉組織標(biāo)本制作病理切片，行HE染色觀察肌纖維變化和計(jì)算微血管密度（MVD），并用免疫組化方法檢測(cè)VEGF陽性表達(dá)情況，以彩色圖像分析系統(tǒng)測(cè)定VEGF表達(dá)的積分光密度（IOD）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果應(yīng)用統(tǒng)計(jì)軟件包SPSS13．0處理。 結(jié)果： 1．大體觀察：兩組動(dòng)物在實(shí)驗(yàn)中無意外死亡。兩組動(dòng)物左側(cè)后肢均出現(xiàn)典型

3、缺血表現(xiàn)：跛行、肌肉萎縮、肢體脫毛，未發(fā)現(xiàn)皮膚潰瘍及壞死。 2．血管造影：造模后3天時(shí)左側(cè)股動(dòng)脈主干及其分支血管未見顯影，大腿中段形成少量的側(cè)枝血管，7天時(shí)側(cè)枝血管稍有增多，14天時(shí)側(cè)枝血管明顯增多，21天時(shí)側(cè)枝血管進(jìn)一步增加。兩組在對(duì)應(yīng)的各時(shí)間點(diǎn)側(cè)枝血管計(jì)數(shù)比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0．05）。 3．HE染色：兩組的組織切片中均可見肌纖維萎縮變形、間隙增寬。肌纖維間有一定數(shù)量的毛細(xì)血管分布。兩組的微血管密度MVD值于造模后

4、3天開始增高，7天時(shí)達(dá)高峰，后逐漸降低。THR組在對(duì)應(yīng)的各時(shí)間點(diǎn)微血管密度MVD值均高于NS組，兩者比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0．05）。 4．免疫組織化學(xué)染色：兩組的組織切片中均可見VEGF陽性表達(dá)的血管內(nèi)皮細(xì)胞，VEGF表達(dá)的IOD值于造模后3天開始增高，7天時(shí)達(dá)峰值，后逐漸降低。THR組在對(duì)應(yīng)的各時(shí)間點(diǎn)VEGF表達(dá)的IOD值均高于NS組，兩者比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0．05）。 5．相關(guān)性分析：兩組VEGF表達(dá)的IOD值