食品檢驗(yàn)工高級(jí)操作技能試卷及答案

1、1.1.食物中核黃素的測(cè)定方法食物中核黃素的測(cè)定方法任何一種方法均可。1主題內(nèi)容與適用范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了用微生物法和熒光法測(cè)定食物中核黃素含量。本標(biāo)準(zhǔn)適用于各類食物中核黃素的測(cè)定。第一微生物法2原理某一種微生物的生長(zhǎng)(繁殖)必需某些維生素。例如干酪乳酸桿菌(Lactobacilluscasei，簡(jiǎn)稱L.C.)的生長(zhǎng)需要核黃素，培養(yǎng)基中若缺乏這種維生素該細(xì)菌便不能生長(zhǎng)。在一定條件下，該細(xì)菌生長(zhǎng)情況，以及它的代謝物乳酸的濃度與培養(yǎng)基中該維生素

2、含量成正比，因此可以用酸度及混濁度的測(cè)定法來(lái)測(cè)定樣品中核黃素的含量。3試劑本實(shí)驗(yàn)用水均需蒸餾水。試劑純度均為分析純。3.1冰乙酸。3.2甲苯。3.3無(wú)水乙酸鈉。3.4乙酸鉛。3.5氫氧化銨。3.6干酪乳酸桿菌(LactobacilluscaseiATCC7469)。3.7鹽酸：0.1molL。3.8氫氧化鈉：1molL和0.1molL。3.90.9%氯化鈉溶液(生理鹽水)：使用前應(yīng)進(jìn)行滅菌處理。3.10核黃素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(25μgmL)：

3、將標(biāo)準(zhǔn)品核黃素粉狀結(jié)晶置于真空干燥器或盛有硫酸的干燥器中。經(jīng)過(guò)24h后，準(zhǔn)確稱取50mg，置于2L容量瓶中，加入2.4mL冰乙酸和1.5L水。將容量瓶置于溫水中搖動(dòng)，待其溶解，冷至室溫，稀釋至2L，移至棕色瓶?jī)?nèi)，加少許甲苯蓋于溶液表面，于冰箱中保存。3.11核黃素標(biāo)準(zhǔn)中間液(10μgmL)：準(zhǔn)確吸取20mL核黃素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，加水稀釋至50mL。3.12核黃素標(biāo)準(zhǔn)使用液(0.1μgmL)：準(zhǔn)確吸取1.0mL中間液于100mL容量瓶中，加水

4、稀釋至刻度，搖勻。每次分析要配制新標(biāo)準(zhǔn)使用液。3.13堿處理蛋白陳：分別稱取40g蛋白陳和20g氫氧化鈉于250mL水中。混合后，放于370.5℃恒溫箱內(nèi)，24～48h后取出，用冰乙酸調(diào)節(jié)pH至6.8，加14g無(wú)水乙酸鈉(或23.2g含有3分子結(jié)晶水的乙酸鈉)，稀釋至800mL，加少許甲苯蓋于溶液表面，于冰箱中保存。3.140.1%胱氨酸溶液：稱取1gL－胱氨酸于小燒杯中。加20mL水，緩慢加入約5～10mL鹽酸，直至其完全溶解，加水稀

5、釋至1L，加少許甲苯蓋于溶液表面。3.15酵母補(bǔ)充液：稱取100g酵母提取物干粉于500mL水中，稱取150g乙酸鉛于500mL水中，將兩溶液混合，以氫氧化銨調(diào)節(jié)pH至酚酞呈紅色(取少許溶液檢驗(yàn))。離心或用布氏漏斗過(guò)濾，濾液用冰乙酸調(diào)節(jié)pH至6.5。通入硫化氫直至不生沉淀，過(guò)濾，通空氣于濾液中，以排除多余的硫化氫。加少許甲苯蓋于溶液表面，于冰箱中保存。3.16甲鹽溶液：稱取25g磷酸氫二鉀和25g磷酸二氫鉀，加水溶解，并稀釋至500mL

6、。加入少許甲苯以保存之。6.1接種液的制備：使用前一天，將菌種由儲(chǔ)備菌種管中移入已消毒的種子培養(yǎng)液中，同時(shí)制做管。在370.5℃保溫16～24h。取出后離心10min(3000rpm)，以無(wú)菌操作方法傾去上部液體，用已消毒的生理鹽水淋洗二次，再加10mL消毒生理鹽水，在液體快速混合器上振搖試管，使菌種成混懸體。將此液傾入已消毒的注射器內(nèi)，立即使用。6.2樣品的制備6.2.1將樣品用磨粉機(jī)、研缽磨成粉末或用打碎機(jī)打成勻漿。6.2.2稱取約

7、含5～10μg的核黃素樣品(谷類約10g，干豆類約4g，肉類約5g)，加入50mL0.1molL鹽酸溶液，混勻。置于高壓鍋內(nèi)，在10.3104Pa(15lbin2)壓力下水解30min。6.2.3冷至室溫，用1molL氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至4.6(取少許水解液，用澳甲酚綠檢驗(yàn)，溶液呈草綠色即可)。6.2.4加入淀粉酶或木瓜蛋白酶，每克樣品加入20mg酶。在40℃恒溫箱中過(guò)夜，大約16h。6.2.5冷至室溫，加水稀釋到100mL，過(guò)濾。對(duì)

8、于脂肪量高的食物，可用乙醚提取，以除去脂肪。6.3標(biāo)準(zhǔn)管的制備兩組試管中每管各加核黃素標(biāo)準(zhǔn)使用液0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mL，每管加水至5mL，再每管加5mL基本培養(yǎng)儲(chǔ)備液混勻。6.4樣品管的制備6.4.1吸取樣品溶液5～10mL，置于25mL具塞試管中，用0.1molL氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至6.8(取少許溶液，用溴麝香草酚藍(lán)檢驗(yàn))，加水稀釋至刻度。6.4.2取兩組試管，各加(6.4.1)樣品稀釋液1、2、3、

9、4mL，每管加水至5mL，每管再加5mL基本培養(yǎng)儲(chǔ)備液混勻。6.5滅菌：將以上樣品管和標(biāo)準(zhǔn)管全部塞上棉塞，置于高壓鍋內(nèi)，在6.9104Pa(10lbin2)壓力下滅菌15min。6.6接種和培養(yǎng)6.6.1待試管冷至室溫，在無(wú)菌操作條件下接種，每管加一滴接種液(6.1)，接種時(shí)注射器針頭不要碰試管壁，要使接種液直接滴在培養(yǎng)液內(nèi)。6.6.2置于370.5℃恒溫箱中培養(yǎng)約72h，培養(yǎng)時(shí)每管必須在同一溫度。培養(yǎng)時(shí)間可延長(zhǎng)18h或減少12h。必要

10、時(shí)可在冰箱內(nèi)保存一夜再滴定。若用混濁度測(cè)定法，以培養(yǎng)18～24h為宜。6.7滴定將試管中培養(yǎng)液倒入50mL三角瓶中，加0.001%溴麝香草酚藍(lán)溶液5mL，分二次淋洗試管，洗液倒至該三角瓶中，以0.1molL氫氧化鈉溶液滴定，終點(diǎn)呈綠色。以第一瓶的滴定終點(diǎn)作為變色參照瓶。約30min后再換一參照瓶，因溶液放置過(guò)久顏色變淺。6.8用標(biāo)準(zhǔn)核黃素溶液的不同濃度為橫坐標(biāo)及在滴定時(shí)所需0.1molL氫氧化鈉的毫升數(shù)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。6.9計(jì)算