血液及其成分的保存、運輸和領(lǐng)發(fā)

1、第四章 血液及其成分的保存、 運輸和領(lǐng)發(fā),全血在保存時會發(fā)生什么樣的變化？全血保存主要需要解決哪些問題？,血液在貯存中的變化,,(一) 血漿的變化,三、血液在貯存中的變化,,(一) 全血的變化,血液在貯存中的變化,,血小板,白細胞,,5天之后逐漸死亡,,24h之后功能逐漸喪失,血液在貯存中的變化,,不穩(wěn)定的凝血因子,活性逐漸下降,,血液在貯存中的變化,,紅細胞,,膜蛋白、脂質(zhì)發(fā)生變化，鉀離子降低，鈉、鈣離子升高。雙凹形

2、變成球形或桑椹形，脆性增加，易發(fā)性溶血。,三、血液在貯存中的變化,,紅細胞的變化,成熟紅細胞不僅無細胞核，而且也無線粒體、核蛋白體等細胞器，不能進行核酸和蛋白質(zhì)的生物合成，也不能進行有氧氧化，不能利用脂肪酸。血糖是其唯一的能源。紅細胞攜帶O2, 自身不消耗O2, 其內(nèi)電解質(zhì)以鉀最多、鈉含量較少, 與血漿的鉀鈉含量相反。紅細胞內(nèi)Ca離子濃度低于血漿。,紅細胞的特點,,主要途徑,,,,磷酸戊糖旁路,葡萄糖酵解,,,合成ATP：合成2

3、,3-DPG（ 2,3-二磷酸甘油酸）,控制靜脈側(cè)氧氣的釋放和維持Hb二價鐵，進行氧氣的傳遞,通過磷酸戊糖通路代謝，為紅細胞提供另一種還原力，在紅細胞氧化還原系統(tǒng)中發(fā)揮重要作用，具有保護膜蛋白、血紅蛋白及酶蛋白的琉基不被氧化，還原高鐵血紅蛋白等多種功能。,,紅細胞能量代謝,成熟紅細胞的糖酵解特點：,紅細胞糖酵解的特點是在酵解過程中有相當(dāng)數(shù)量的1.3-DPG轉(zhuǎn)變成2.3-DPG，后者再脫磷酸變成3-PG，并進一步酵解產(chǎn)生乳酸。此2.3-D

4、PG側(cè)支循環(huán)稱2.3-DPG支路，產(chǎn)生支路的原因是紅細胞中存在DPG變位酶和2.3-DPG磷酸酶，前者活性大于后者，故可使2.3-DPG堆積起來。2.3-DPG生成的主要生理意義在于降低Hb對氧的親和力，在組織氧分壓較低的情況下，HbO2放出氧適應(yīng)組織需要。,血紅蛋白與氧親和性增加,P50是指血紅蛋白氧飽和度為50%時的血氧分壓，可以反映Hb與O2的親和力。P50增大，氧離曲線右移，表示Hb與O2的親和力小，P50減小，氧離曲線左移，

5、說明親和力大。,2,3-DPG的生理意義,維持Na+-K- ATP酶(鈉泵)功能。通過ATP 提供能量,維持K+ 的濃度在紅細胞內(nèi)比血漿高5倍。所以, 紅細胞產(chǎn)生的ATP主要用于維持紅細胞膜Na+-K- ATP酶酶的正常功能, 以保證紅細胞的離子平衡。 在保存過程中, 紅細胞膜和膜蛋白的損傷以及葡萄糖的持續(xù)消耗引起的ATP供能減少都會影響Na+-K- ATP酶功能的正常發(fā)揮, 導(dǎo)致細胞內(nèi)K+ 的逸出, 從而使血漿K+ 濃度不斷升高

6、。,紅細胞ATP的功能（紅細胞內(nèi)糖代謝的意義）,2、維持紅細胞膜上鈣泵一的正常運轉(zhuǎn)，將紅細胞內(nèi)的Ca2+泵入血漿以維持紅細胞內(nèi)的低鈣狀態(tài)。正常情況下，紅細胞內(nèi)的Ca2+濃度很低（20umol/L)。，而血漿Ca2+的濃度為2-3mmol/L。血漿內(nèi)鈣離子會被動擴散進入紅細胞。缺乏ATP時，鈣泵不能正常運行，鈣將聚集并沉積于紅細胞膜上，使膜失去柔韌性而趨于僵硬，使紅細胞易被破壞,紅細胞ATP的功能（紅細胞內(nèi)糖代謝的意義）,維持紅細胞膜上脂

7、質(zhì)與血漿脂蛋白中的脂質(zhì)進行交換。紅細胞膜的脂質(zhì)處于不斷更新中，此過程需消耗ATP。缺乏ATP時，脂質(zhì)更新受阻，紅細胞可塑性降低，易于破壞少量用于谷胱甘肽的生物合成。用于葡萄糖的活化，啟動糖酵解過程。,紅細胞ATP的功能（紅細胞內(nèi)糖代謝的意義）,紅細胞內(nèi)的谷胱甘肽代謝,紅細胞內(nèi)谷胱甘肽含量很高(2mmol/L)，而且?guī)缀跞沁€原型的，主要生理功能是對抗氧化劑對巰基的氧化。,,,,對于需要短時間內(nèi)糾正載氧能力的患者和特別經(jīng)受不住組織缺氧

8、的患者輸入2,3-DPG水平低的血是無益的，應(yīng)該給這些患者輸注保存期不超過7~10天的血液。,二、血液保存需要解決的問題,需解決的問題,血液凝固,紅細胞溶血放氧能力下降,,,抗凝劑,,紅細胞營養(yǎng)代謝抗溶血劑改善放氧保存容器,,紅細胞保存液考慮的幾個方面,保護細胞的能量產(chǎn)生機構(gòu)，使其維持正常結(jié)構(gòu)和功能盡量減慢細胞代謝速度，減少能量消耗并供應(yīng)能量物質(zhì)。其他：抗氧化劑的作用？改善保存容器？,,常用血液保存液的成分： 1、抗凝劑,,

9、血液抗凝劑是防止血液凝固和紅細胞被破壞的化學(xué)物質(zhì),常用的抗凝劑有哪些？,血液保存液的成分,(一) 血液抗凝劑,,枸櫞酸鈉,肝素,EDTA·2Na,原理,Ca,Thrombin,Ca,應(yīng)用,實驗室檢測血液標(biāo)本的抗凝及外科體外循環(huán)手術(shù)的抗凝,實驗室檢測血液標(biāo)本的抗凝,全血及血液成分保存的抗凝劑,,葡萄糖的在血液中濃度應(yīng)為0.5%~l%，以0.5%為宜,葡萄糖用于維持紅細胞代謝，延長紅細胞的保存時間,血液保存液的成分：2、提供紅細

10、胞的能量代謝葡萄糖,,,腺嘌呤,提高ATP水平和活性的另一辦法就是在保存液中加入少量腺嘌呤,腺嘌呤,,,磷酸腺苷（AMP）,,磷酸化,ATP,,血液保存液的成分：2、提供紅細胞的能量代謝,血液保存液的成分：,3、抗溶血劑,,目前國際上使用較多的是甘露醇，它的用量很小，一般在1％以下。,血液保存液的成分：,4、改善紅細胞的放氧能力,,ACD或CPD血液保存到l周和2周后，其紅細胞放氧能力均降到50%，對于即刻需要糾正缺氧的患者，輸注保

11、存時間長的血液是不適宜的。,血液保存液的成分：,4、 改善紅細胞的放氧能力,,影響因素：CO2分壓、O2分壓、pH和2,3-DPG含量及其生成有關(guān)酶系有關(guān),,一、全血在(4±2)℃時的保存,4、 改善紅細胞的放氧能力,,解決的方法：1、保存液中加NaHCO3，所產(chǎn)生的C02，可由內(nèi)在的Ca(OH)2來消除，避免pH降低，有利于2,3-DPG的合成2、加磷酸二羥丙酮，可以增加2,3-DPG含量。3、加丙酮酸鹽、通過輔酶Ⅰ系

12、統(tǒng)增加1,3-二磷酸甘油酸（1, 3- DPG），然后變成2,3-DPG。4、加維生素C，增加還原力，進而維持有關(guān)酶的活性。,全血在(4±2)℃時的保存,保存溫度,,紅細胞代謝緩慢，乳酸生成速度下降，pH下降速度也變緩慢。,維持紅細胞正常代謝，血袋要排放整齊，避免重疊堆積。,溫度對紅細胞保存的影響,6 ℃以上時, 無法保證血液成分的活性和有效性。高于10 ℃紅細胞破壞增加, 10 ℃以上超過30 min游離血紅蛋白的含量逐

13、漸增加,pH下降,血鉀濃度也逐漸上升。保存溫度低于下限2℃時, 紅細胞可能溶解破裂,輸給患者可能造成輸血不良反應(yīng)。儲存溫度≦6 ℃可最大限度地抑制血液中的細菌生長。在不正確的條件下儲存30 min 以上的血液有發(fā)生細菌污染和( 或) 細胞功能喪失的可能,一、全血在(4±2)℃時的保存,保存容器,,聚乙烯烴袋,聚氯乙烯（PVC)袋,,全血、紅細胞等的保存,血小板的保存,,,,血液保存液,,ACD保養(yǎng)液（枸櫞酸鹽-葡萄糖-

14、枸櫞酸）pH5.03 21天,CPD保養(yǎng)液（枸櫞酸鹽-葡萄糖-枸櫞酸-磷酸鹽） pH5.63 21天,CPDA保養(yǎng)液(枸櫞酸鹽-葡萄糖-枸櫞酸-磷酸鹽-腺嘌呤)pH5.63 35天,加入磷酸鹽,加入腺嘌呤,,,二、血液保存液,,三、血液在貯存中的變化,,(二) 貯存期（shelf life）,全血，聚氯乙烯塑料袋，4℃條件下貯存：ACD或CPD保存液：貯存期為21天CPDA-1保存液：貯存期為35天,一、濃縮紅

15、細胞保存,,4℃保存保存液是全血保存液從采血日起，與相應(yīng)的保存液的儲存期一致,二、添加劑紅細胞保存,,濃縮紅細胞,剩余營養(yǎng)物質(zhì)少黏稠貯存中易發(fā)生溶血,二、添加劑紅細胞保存,,1、濃縮紅細胞加羥乙基淀粉（分子量3萬）溶液在(4±2)℃貯存可保存14天。2、濃縮紅細胞加磷酸腺嘌呤及慶大霉素的新維代漿血，在(4±2)℃可保存35天。,(一) 含膠體的紅細胞懸液（膠體代漿血）,二、添加劑紅細胞保存,,(二) 晶體鹽

16、紅細胞懸液（晶體鹽代漿血）,目前還不能斷定高水平的ATP是否為氯化氨的作用, 有關(guān)理論也有待于進一步研究。但作者深信新溶液的保存作用, 且有可能是氨的存在是基于這種溶液的非滲透性低滲的原因并得以維持ATP􀀁 的含量和延長紅細胞的貯存期。,二、添加劑紅細胞保存,,(三) 紅細胞復(fù)蘇液,復(fù)蘇液（丙酮酸鹽、肌苷、葡萄糖、磷酸鹽、腺嘌呤及NaCl ）,,加入濃縮紅細胞,37℃保溫1小時,紅細胞復(fù)蘇： ATP和2,3-DPG恢復(fù)

17、到正常水平,,,,輸注前要去除復(fù)蘇液,鑒定血液應(yīng)在充分的自然光線或日光燈下進行（必要時可用放大鏡檢查）,,一、正常血的肉眼觀察,血液流入袋內(nèi)多呈暗紅色，有時呈鮮紅色,,血漿呈草黃色或淡黃色者為多見,分層,紅細胞層呈暗紅色,,,白膜層,,,,,分層界面清晰,一、正常血的肉眼觀察,血漿層內(nèi)不應(yīng)有肉眼可見的血塊、絮狀物或漂浮物。有時出現(xiàn)不同程度的均勻乳黃色或乳白色脂肪顆粒樣漂浮物，在37℃加溫時易溶解呈透明狀若細菌污染則加熱后不透明。,,

18、一、正常血的肉眼觀察,白膜層(buffy coat)，荷葉狀、放射波浪狀、雪花狀、龜裂狀等,,一、正常血的肉眼觀察,紅細胞層暗紅色不含肉眼可見的血凝塊或其他異常物質(zhì)。如果有氣泡：1周后逐漸消失 正常在保存中如氣泡日漸增多，則有污染產(chǎn)氣桿菌的可能。,,,一、正常血的肉眼觀察,血液發(fā)出前，要仔細檢查，觀察是否有紅細胞微小凝塊，即冷凝集現(xiàn)象。冷凝集的血輸用前加溫，一般37℃ 5~10分鐘經(jīng)保溫的血液

19、若有溶血發(fā)生則應(yīng)放棄。,,二、異常血的肉眼觀察,一般庫存血紅細胞為暗紅色，如果顏色變成暗紫色（高錳酸鉀溶液顏色），則常常是細菌污染造成紅細胞溶血的結(jié)果。這種血不能輸用，必須進行細菌培養(yǎng)。,(一) 血液顏色變化,,二、異常血的肉眼觀察,溶血：發(fā)生溶血的初期，血漿層底部首先變?yōu)榧t色或白細胞層出現(xiàn)玫瑰色的小環(huán)，這些現(xiàn)象是溶血初期的特征。溶血加重后，紅色血漿部分則越來越多，并向上部擴展，最后全部血漿變?yōu)榧t色。,(二) 血漿層與紅細胞層分界

20、不清,,二、異常血的肉眼觀察,抗凝不佳：形成肉眼見到的小凝塊，嚴重時可形成整個大塊血凝塊往往沉降在血細胞層內(nèi)，可使整齊的表面變成凹凸不平。,(三) 大量血塊存在,,二、異常血的肉眼觀察,庫存血亦可能發(fā)生大小不等的纖維蛋白絮狀凝塊，漂浮于血漿層表面或懸浮在血漿層中。多量、大塊的血凝塊或纖維蛋白塊的存在，均表明血液質(zhì)量不佳，不僅輸血困難，也可能發(fā)生輸血反應(yīng)。原來血液沒有凝塊，保存后產(chǎn)生了血凝塊，則應(yīng)懷疑可能是細菌污染所致。,(三)

21、大量血塊存在,,二、異常血的肉眼觀察,乳糜：血漿內(nèi)含過多脂肪。庫存血如發(fā)生血漿明膠化現(xiàn)象，可能細菌污染，不能發(fā)出使用。,(四) 血漿層呈乳糜或明膠化,,,血液的冷凍保存研究開始于20世紀40年代1949年P(guān)olge和Smith等人發(fā)現(xiàn)甘油對牛精子的冷凍保存有保護作用，從中得到啟示第二年，Smith應(yīng)用甘油作保護劑冷凍紅細胞獲得成功其后，血液冷凍保存的研究迅速發(fā)展，但是由于沒能解決去除防凍保護劑的問題，臨床尚未能得到廣泛應(yīng)

22、用。,,,,1956年，Tullis應(yīng)用Cohn分離器將防凍劑甘油去除，從而使冷凍紅細胞成功地應(yīng)用于臨床。,1963年，Huggins發(fā)現(xiàn)紅細胞在糖溶液中有可逆性的聚集反應(yīng)，利用此反應(yīng)原理，可用糖液洗滌法去除防凍保護劑—甘油。,,Meryman等人利用不同濃度梯度的氯化鈉洗滌紅細胞去除防凍劑,,一、血細胞的低溫損傷機制,,低溫損傷機制,why？,一、血細胞的低溫損傷機制,,相變溫度區(qū)間：細胞在冷凍或復(fù)溶過程中，發(fā)生液相和固相轉(zhuǎn)變的溫度

23、區(qū)間在相變過程中，通常伴隨吸熱或者放熱反應(yīng)，以及體積的改變,一、血細胞的低溫損傷機制,,降溫過程的低溫損傷：來自于降溫、復(fù)溫過程中必須經(jīng)過的一個溫度區(qū)間，即－15℃ 至－60℃ 之間。該溫度區(qū)間對細胞具有殺傷性。,一、血細胞的低溫損傷機制,,(一) 鹽變性學(xué)說,慢速冷凍細胞損傷的主要原因：Lovelock等人提出，細胞外水結(jié)冰時，細胞收縮、脫水使細胞內(nèi)外產(chǎn)生的高濃度電解質(zhì)，作用于細胞膜，引起脂蛋白復(fù)合物的變性和部分類脂質(zhì)的

24、丟失，增加了細胞對陽離子的通透性，并使細胞膜上形成一些小孔，冰融化時水進入細胞內(nèi)引起滲透休克,一、血細胞的低溫損傷機制,,(二) 冰晶的機械作用,快速冷凍時細胞損傷的主要原因：在快速冷凍時，細胞內(nèi)形成許多冰晶，冰晶作用于細胞膜，并使細胞膜上產(chǎn)生小孔，使得細胞膜不可逆地喪失其半透性,一、血細胞的低溫損傷機制,,(二) 冰晶的機械作用,降溫過快或過慢，都會殺死細胞在慢的降溫速率下，細胞的低溫損傷源于“鹽變性”在高降溫速率下，細胞的

25、低溫損傷源于“胞內(nèi)冰”細胞冰凍保存的最佳降溫速率，應(yīng)該是慢到足以防止“胞內(nèi)冰”，同時又快到使“鹽變性”最小不同的細胞，由于細胞膜的生物特性不同，對最佳降溫速率的要求也不同。,一、血細胞的低溫損傷機制,,(三) 化學(xué)損傷,Levitt提出：冷凍時，在細胞脫水和溶質(zhì)濃縮過程中，蛋白質(zhì)組分異?？拷?，最終使蛋白質(zhì)分子中巰基(SH)和二硫鍵(SS)發(fā)生相互不可逆的反應(yīng)，形成新的化學(xué)鍵，導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性而引起細胞死亡。,一、血細胞的低溫損傷機制,

26、,(四) 細胞的融化反應(yīng),細胞復(fù)融過程中的損傷：融化反應(yīng)尚不明確,一、血細胞的低溫損傷機制,,(四) 細胞的融化反應(yīng),經(jīng)驗總結(jié)：慢速冷凍的標(biāo)本應(yīng)慢速融化快速冷凍的標(biāo)本則應(yīng)采用快速融化的方法,二、冷凍保護劑,,冷凍保護劑可根據(jù)它們能否穿透細胞膜分為兩種,,細胞外保護劑,,加入保護劑后，可降低溶液的冰點，并增加未凍水量,小分子,大分子,,能自由地通過細胞膜,不能穿透細胞,,二、冷凍保護劑,,二、冷凍保護劑,,(二) 冷凍保護劑的種類

27、,細胞內(nèi)保護劑：甘油、DMSO、葡萄糖、乙二醇、丙三醇、甲醇、乙醇、乙酸胺、甲酞胺等。細胞外保護劑：乳糖、麥芽糖、木糖、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、右旋糖酐、白蛋白、羥乙基淀粉（HES）、聚乙二醇（PEG）、甘露醇等。,三、低溫血液保存與玻璃化,,玻璃化就是生物材料在由液態(tài)向固態(tài)轉(zhuǎn)化過程中沒有相變熱產(chǎn)生，也就是沒有晶體生成。有人認為冷卻速率達到10℃/秒，顆粒小于5~l0nm就不會使生物材料受到冷凍損傷，這就叫玻璃化。,三、低溫血

28、液保存與玻璃化,,添加冷凍保護劑或快速冷凍生物材料的目的就是使生物材料中的水處于容易達到玻璃化的狀態(tài)。,四、紅細胞甘油化、冷凍、融化和去甘油的方法,,解凍：慢速融化去除甘油試劑可用糖液聚集法或不同濃度梯度氯化鈉洗滌法,解凍：快速融化去除甘油試劑可用不同濃度梯度氯化鈉溶液，由高滲逐漸過渡到等滲分次洗滌,,五、冷凍紅細胞的制備方法,,在我國普遍使用,高濃度甘油慢速冷凍,五、冷凍紅細胞的制備方法,,高濃度甘油慢速冷凍,鹽液離心洗滌法,糖液

29、聚集洗滌法,按解凍后洗脫甘油的方法：,方法：先采用高張溶液使融化的高滲紅細胞滲透壓達到平衡，接著用逐漸減低的高張溶液進行分次洗滌，最后用含有葡萄糖的等滲NaCl懸浮,五、冷凍紅細胞的制備方法,,等張溶液是指不引起紅細胞膜變形的溶液，這個概念是從生理角度考慮的。 有些溶質(zhì)的等滲濃度與等張濃度相同或相近，如0.9%的氯化鈉溶液，既是等滲溶液又是等張溶液。,五、冷凍紅細胞的制備方法,,有些溶質(zhì)如鹽酸普魯卡因、甘油、尿素等，等滲溶液不等于等

30、張溶液。例如2.6%的甘油溶液與0.9%的氯化鈉溶液具有相同的滲透壓，但是2.6%的甘油100%溶血，所以是不等張的。高張溶液會使紅細胞脫水皺縮，低張溶液會使紅細胞吸水膨脹。,五、冷凍紅細胞的制備方法,,先采用高張溶液使融化的高滲紅細胞滲透壓達到平衡，接著用逐漸減低的高張溶液進行分次洗滌，最后用含有葡萄糖的等滲NaCl懸浮,,內(nèi),外,高滲,,水,,高張,水,,五、冷凍紅細胞的制備方法,,(一) 慢速冷凍糖液聚集洗滌制備法,1、糖

31、液聚集洗滌法去甘油原理,在pH5.2~6.1的范圍內(nèi)，血漿中的丙種球蛋白與紅細胞膜的脂蛋白之間可形成一種可逆性的復(fù)合物,五、冷凍紅細胞的制備方法,,(一) 慢速冷凍糖液聚集洗滌制備法,1、糖液聚集洗滌法去甘油原理,當(dāng)加入非電解質(zhì)溶液時，如果糖、葡萄糖、蔗糖等，由于離子強度減小，與脂蛋白結(jié)合的球蛋白之間又可結(jié)合，使紅細胞聚集成團塊沉下來，除去甘油上清液,,五、冷凍紅細胞的制備方法,,(一) 慢速冷凍糖液聚集洗滌制備法,1、糖液聚集洗滌法去

32、甘油原理,當(dāng)加入電解質(zhì)如生理鹽水或升高pH值，可使球蛋白之間的結(jié)合斷開，也可使丙種球蛋白與紅細胞膜脂蛋白之間的結(jié)合斷開，使紅細胞重新懸浮,加等體積甘油化試劑,五、冷凍紅細胞的制備方法,,(一) 慢速冷凍糖液聚集洗滌制備法,2、制備方法（國內(nèi)改進）,ACD或CPD全血(200 ml),,濃縮紅細胞(90~120 ml),離心移出血漿,,甘油化紅細胞(室溫平衡半小時),,甘油化：分漿后所得的濃縮紅細胞轉(zhuǎn)移到專用洗滌塑料袋中，袋內(nèi)裝有一由塑

33、料管密封的電磁攪拌器。在電磁攪拌器的攪拌下緩緩加入等體積的甘油試劑。,,37~40℃水浴中融化,,冷凍紅細胞,,解凍紅細胞,置-80℃冰箱或干冰中貯存,,去甘油紅細胞,,加入等體積50%的葡萄糖溶液后，分別再用10%蔗糖溶液500 mL洗脫3次。分別去除上清,,臨床輸用,測上清血紅蛋白合格后,,懸浮紅細胞,,加100 mL 0.9%NaCl洗滌，離心去上清，再加100 mL 0.9%NaCl重新懸浮紅細胞,,五、冷凍紅細胞的制備方法,

34、,(一) 慢速冷凍糖液聚集洗滌制備法,洗脫甘油：,國外均采用5%果糖進行洗脫甘油，因果糖價格昂貴，我國用蔗糖代替果糖比較經(jīng)濟。,五、冷凍紅細胞的制備方法,,(二) 慢速冷凍鹽液洗滌制備法,使用不同濃度梯度的NaCl溶液先由高滲逐漸過度到等滲，可用大容量離心機反復(fù)離心或用連續(xù)離心機分離、洗脫掉冷凍紅細胞的防凍劑，達到去甘油的目的。此方法比糖液洗滌法經(jīng)濟，紅細胞回收率高，并且質(zhì)量好,五、冷凍紅細胞的制備方法,,(二) 慢速冷凍鹽液洗滌制

35、備法,1、制備方法,加入160 mL 57.1％甘油化試劑,ACD或CPD全血(200 ml),,濃縮紅細胞(90~120 ml),離心移出血漿,,甘油化紅細胞,,37~40℃水浴中解凍,,冷凍紅細胞,,解凍紅細胞,室溫平衡半小時，置－80℃冰箱或干冰中貯存,,去甘油紅細胞,,加入40 mL 9%NaCl，再加0.9％NaCl 250ml，離心去上清，再加0.9% NaCl 400~500 mL離心去上清，再用0.9% NaCl洗滌一次

36、,,臨床輸用,測上清血紅蛋白合格后,,懸浮紅細胞,,加100 mL 0.9% NaCl,,五、冷凍紅細胞的制備方法,,(三) 快速冷凍紅細胞制備方法,1、制備方法,加入等體積甘油化試劑,ACD或CPD全血(200 ml),,濃縮紅細胞(90~120 ml),離心移出血漿,,甘油化紅細胞,,45℃水浴中3分鐘內(nèi)完全融化,,冷凍紅細胞,,解凍紅細胞,－196℃冰凍，液氮蒸汽中貯存,,一次洗滌紅細胞,,利用細胞分離器或標(biāo)準離心機分次洗滌，加含

37、有16％甘露醇的生理鹽水300～350 mL離心去上清,,懸浮紅細胞,加等體積的0.9％NaCl或含有0.2％葡萄糖的生理鹽水懸浮,,去甘油紅細胞,,加0.9％NaCl或0.2％葡萄糖的生理鹽水1000~2000 mL離心去上清,,五、冷凍紅細胞的制備方法,,(三) 快速冷凍紅細胞制備方法,2、甘油試劑配方,甘油 (w/v) 28 %甘露醇 (w/v)

38、 3 %氯化鈉 (w/v) 0.65％,六、冷凍紅細胞的質(zhì)量標(biāo)準,,(一) 紅細胞回收率在80%以上(二) 輸入人體24小時后紅細胞存活率在70%以上(三) 洗滌后紅細胞懸浮液上清血紅蛋白不超過1 g/L(四) 懸浮紅細胞甘油含量在1 g/L以下(五) 懸浮紅細胞體外溶血試驗上清液血紅蛋白增加不超過50%(六) ATP、2,3-DPG和紅細胞脆性接近正常。(七) 血液細菌培養(yǎng)應(yīng)

39、無細菌生長。,七、冷凍血的特點和臨床應(yīng)用,,(一) 優(yōu)點,保存期可長達10年。能部分調(diào)節(jié)血液供求不平衡現(xiàn)象，特別為需稀有血型輸 血的患者提供了方便，爭取到了搶救時間。平時貯備，一旦需要可立即解凍洗滌，滿足患者需要。對于自身輸血者，可用此方法預(yù)先獻血冷凍貯存，需要時解凍洗滌輸用。,七、冷凍血的特點和臨床應(yīng)用,,(一) 優(yōu)點,經(jīng)過洗滌的紅細胞，由于去除了絕大部分白細胞、血小板和血漿蛋白，減少了輸血副反應(yīng)。,七、冷凍血的特點和臨床應(yīng)

40、用,,(一) 優(yōu)點,冷凍血由于去除了細胞代謝產(chǎn)物、抗凝劑及可能的肝炎病毒，即使大量輸注也可避免酸中毒、高鉀血癥以及減少肝炎的傳播。由于去除了抗A抗B抗體，O型血真正成為萬能供血者。,七、冷凍血的特點和臨床應(yīng)用,,(一) 優(yōu)點,冷凍血的2,3-DPG含量與冷凍前區(qū)別不大，接近正常。輸入人體后，氧的釋放能力比常規(guī)方法保存血要好，可以立即糾正缺氧，這對于胸外科手術(shù)和新生兒換血有利。,七、冷凍血的特點和臨床應(yīng)用,,(二) 缺點,工藝較為