腋臭發(fā)病機(jī)制的基因?qū)W研究及外科治療手段的探索.pdf

1、本文主要從以下幾方面進(jìn)行了論述:
　　第一部分 腋臭發(fā)病機(jī)制的研究:中國(guó)腋臭人群中ABCC11基因SNP538不同基因型的研究
　　目的：
　　近來(lái)，隨著基因技術(shù)的突破，腋臭的基因?qū)W研究有了很大進(jìn)展，大量研究表明ABCC11基因與腋臭密切相關(guān)。ABC(ATP結(jié)合盒)蛋白是人類(lèi)基因組編碼的蛋白大家族，其主要參與細(xì)胞膜的轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程。ABC家族目前發(fā)現(xiàn)有48個(gè)成員，分屬ABCA，ABCB和ABCC亞家族。C亞家族包括多耐藥相關(guān)

2、蛋白(MRPs，MultidrugResistance-associated Proteins)，目前已知12個(gè)成員，包括由ABCC11(MRP8)基因編碼的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白。
　　ABCC11基因的轉(zhuǎn)運(yùn)包括一些親脂陰離子，如某些谷氨?；Y(jié)合體（Gln-3M2H、Gln-HMHA、SG-3M3SH）和白三烯，陰離子膽汁酸，甘氨膽酸等。其中3M2H、HMHA和3M3SH均已被證實(shí)為引起腋臭的主要“氣味前體”。然而ABCC11基因?qū)D(zhuǎn)運(yùn)的影響

3、是直接的還是間接調(diào)控的目前尚未清楚。
　　單核苷酸多態(tài)性(SNPs)是ABCC家族的主要變異，這些突變頻率不一的變異分布于各個(gè)基因的內(nèi)含子和外顯子。位于編碼區(qū)內(nèi)的SNPs包括錯(cuò)義突變、無(wú)義突變及同義突變。同義突變會(huì)導(dǎo)致mRNA的二級(jí)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，僅在表達(dá)水平上導(dǎo)致蛋白的改變，一般不會(huì)導(dǎo)致蛋白結(jié)構(gòu)的改變。
　　本研究旨在了解中國(guó)人群中腋臭患者及非腋臭患者的ABCC11基因多態(tài)位點(diǎn)SNP538的基因型，及兩者ABCC11基因表達(dá)

4、量之間的區(qū)別，從基因水平進(jìn)一步揭示腋臭的發(fā)病機(jī)制。
　　材料與方法：
　　(1)實(shí)驗(yàn)對(duì)象分組:
　　從2014年1月至2014年4月，本人所在機(jī)構(gòu)所有首診為“腋臭”的患者進(jìn)入實(shí)驗(yàn)組候選隊(duì)列。本次研究的目的均在術(shù)前告知受試者，并簽署知情同意書(shū)及術(shù)前風(fēng)險(xiǎn)告知書(shū)。
　　(2)標(biāo)本采集
　　1)實(shí)驗(yàn)組:
　　所有的實(shí)驗(yàn)組受試者均由同一組整形外科醫(yī)生施行手術(shù)操作。6名患者施行術(shù)區(qū)皮下局部腫脹麻醉后，接受大汗腺抽

5、吸術(shù)（具體手術(shù)方式參見(jiàn)論文第二部分），收集吸出的皮下混合組織。另6名患者施行術(shù)區(qū)皮下局部麻醉后，接受雙側(cè)大汗腺切除術(shù)（具體手術(shù)方式參見(jiàn)論文第二部分），直視下修剪腋窩皮下組織并獲取標(biāo)本。兩種方法獲取標(biāo)本均為含有脂肪與大汗腺的混合組織碎片。
　　2)對(duì)照組:
　　2例對(duì)照組患者由同一組乳腺外科醫(yī)生施行手術(shù)操作。手術(shù)在全麻下進(jìn)行。完成腋窩淋巴結(jié)清掃后，切取小塊腋下皮膚組織（不合淋巴結(jié)）。
　　(3)組織學(xué)
　　腋下大汗

6、腺組織經(jīng)福爾馬林固定后，行石蠟包埋、切片，HE染色，行光鏡組織學(xué)檢查。
　　(4)大汗腺ABCC11基因mRNA的RT-PCR分析
　　從每個(gè)樣品管中取出組織10mg，采用Trizol試劑盒提取總mRNA，瓊脂糖凝膠電泳，通過(guò)紫外透射儀觀(guān)察RNA。按逆轉(zhuǎn)錄酶說(shuō)明書(shū)將3μl總RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。采取△△Ct法對(duì)目的基因的表達(dá)進(jìn)行相對(duì)定量;用目的基因與GAPDH/POLR2A的比值表示目的基因的相對(duì)表達(dá)水平。
　　結(jié)果

7、：
　　(1)組織學(xué)表現(xiàn)
　　HE染色顯示實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組均可見(jiàn)明顯頂泌汗腺腺體，有完整的管腔結(jié)構(gòu)，周?chē)姆置诓坑上偌?xì)胞、肌上皮細(xì)胞、基底膜帶所組成，但不同標(biāo)本內(nèi)的分泌部的腺細(xì)胞高度不一，推測(cè)可能與分泌活動(dòng)相關(guān)。
　　(2)基因型檢測(cè)結(jié)果
　　本次實(shí)驗(yàn)共收集14例標(biāo)本，其中實(shí)驗(yàn)組12例，對(duì)照組2例。經(jīng)TRIZOL提取總mRNA，RT-PCR后，通過(guò)對(duì)ABCC11基因多態(tài)性位點(diǎn)SNP538的等位基因型檢測(cè)發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組有

8、11例為GA型，1例為GG型，對(duì)照組2例均為AA型。
　　(3)目的基因表達(dá)水平
　　本次實(shí)驗(yàn)共收集14例標(biāo)本，其中實(shí)驗(yàn)組12例，對(duì)照組2例。經(jīng)TRIZOL提取總mRNA，RT-PCR后，通過(guò)GAPDH、 POLR2A雙內(nèi)參定量分析目的基因表達(dá)量。采取△△Ct法對(duì)目的基因的表達(dá)進(jìn)行相對(duì)定量，用目的基因與GAPDH/POLR2A的比值表示目的基因的相對(duì)表達(dá)水平。結(jié)果發(fā)現(xiàn)12例實(shí)驗(yàn)組的標(biāo)本中ABCC11基因表達(dá)量較對(duì)照組的表達(dá)量

9、明顯增高。經(jīng)wilcoxon檢驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)組相對(duì)GAPDH△Ct和相對(duì)POLR2A△Ct的p值均為3.813e-07，有顯著差異。
　　結(jié)論：
　　ABCC11基因多態(tài)位點(diǎn)SNP538的基因型與腋臭發(fā)生密切相關(guān)。腋臭患者的ABCC11基因表現(xiàn)型為GG或GA型，其在mRNA水平表達(dá)較AA型無(wú)腋臭患者明顯增高，提示ABCC11基因SNP538G→A導(dǎo)致該基因在mRNA水平的表達(dá)減弱。
　　第二部分 腋臭外科治療方式的探索:改良

10、小切口大汗腺抽刮法與傳統(tǒng)大汗腺切除術(shù)的臨床對(duì)比試驗(yàn)
　　目的：
　　近年來(lái)，源于脂肪抽吸技術(shù)的大汗腺微創(chuàng)抽吸術(shù)開(kāi)始流行，其具有疤痕隱蔽、皮膚壞死率低、術(shù)后恢復(fù)快等優(yōu)勢(shì)，被認(rèn)為是安全有效的腋臭外科治療手段。但該術(shù)式的復(fù)發(fā)率一直存在爭(zhēng)議。
　　本人自2009年開(kāi)始采用改良的小切口大汗腺抽刮術(shù)，并進(jìn)行了臨床配對(duì)試驗(yàn)，與金標(biāo)準(zhǔn)的大汗腺切除術(shù)式進(jìn)行對(duì)比?，F(xiàn)將結(jié)果闡述與此。
　　材料與方法：
　　(1)受試者
　

11、　從2009年2月至2014年2月，本人所在機(jī)構(gòu)所有首診為“腋臭”的患者進(jìn)入候選隊(duì)列。納入標(biāo)準(zhǔn)為:經(jīng)臨床查體確診為雙側(cè)腋臭、且自愿參加此項(xiàng)臨床試驗(yàn)的患者;曾經(jīng)接受過(guò)腋臭外科治療（包括激光）以及腋下區(qū)域有疤痕存在的患者被排除在外。最終有65名候選人進(jìn)入實(shí)驗(yàn)組，超過(guò)300名歸入對(duì)照組。經(jīng)計(jì)算機(jī)統(tǒng)計(jì)配對(duì)，從對(duì)照組中隨機(jī)選出65名與試驗(yàn)組性別一致、年齡差別≤2歲的應(yīng)試者與之進(jìn)行配對(duì)。
　　(2)手術(shù)方式
　　1)實(shí)驗(yàn)組:
　　

12、進(jìn)行術(shù)區(qū)及切口標(biāo)記，術(shù)區(qū)皮下進(jìn)行局部腫脹麻醉，單側(cè)150-200ml，范圍超過(guò)標(biāo)記外緣1cm。腫脹麻醉達(dá)成后，沿切口標(biāo)記切開(kāi)皮膚(0.2cm)，用抽吸針進(jìn)行皮下潛行分離，范圍為術(shù)前標(biāo)記的整個(gè)腋毛區(qū)。隨后將抽吸管一頭連于負(fù)壓吸引器，調(diào)節(jié)負(fù)壓為1.875mmHg。
　　整個(gè)抽吸過(guò)程在15分鐘左右，術(shù)畢讓患者穿上醫(yī)用彈力腋套，目的為腋部加壓及固定敷料，一周內(nèi)禁止摘除。同時(shí)宣教患者術(shù)后一周內(nèi)禁止洗澡，并限制肩關(guān)節(jié)上舉活動(dòng)。
　　2)

13、對(duì)照組:術(shù)區(qū)標(biāo)記完成后，進(jìn)行局麻。局麻達(dá)成后，沿術(shù)前標(biāo)記切開(kāi)皮膚，用剪刀進(jìn)行皮下分離，形成對(duì)偶皮瓣。用左手食指及中指協(xié)助掀起皮瓣，修剪其皮下表面的脂肪組織及大汗腺組織，直至看到乳白色的真皮組織，盡可能保留真皮下血管網(wǎng)。徹底止血后沖洗創(chuàng)面，皮內(nèi)6-0尼龍線(xiàn)連續(xù)縫合切口。對(duì)側(cè)同法操作。術(shù)區(qū)用彈力繃帶加壓包扎，7天后解除。告知患者術(shù)后一周內(nèi)禁止洗澡，肩關(guān)節(jié)制動(dòng)。
　　(3)術(shù)后評(píng)估
　　每位患者都進(jìn)行術(shù)后隨訪(fǎng)，方式為門(mén)診復(fù)診或電話(huà)

14、隨訪(fǎng)，安排在術(shù)后1月、3月、6月。每次隨訪(fǎng)都記錄5項(xiàng)內(nèi)容:患者滿(mǎn)意程度、皮膚壞死情況、血腫、異味復(fù)發(fā)程度、疤痕。
　　結(jié)果：
　　兩組的性別比例一致，女∶男均為42∶23。實(shí)驗(yàn)組年齡從15歲至38歲，平均22.78歲;對(duì)照組年齡從16歲至39歲，平均22.91歲。實(shí)驗(yàn)組的隨訪(fǎng)時(shí)間為3個(gè)月到40個(gè)月，平均7.69個(gè)月，對(duì)照組的隨訪(fǎng)時(shí)間為3個(gè)月到20個(gè)月，平均6.81個(gè)月。
　　(1)患者滿(mǎn)意程度
　　22名(33.

15、85％)實(shí)驗(yàn)組患者及8名(12.31％)對(duì)照組患者對(duì)術(shù)后結(jié)果完全滿(mǎn)意。相較于對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組的患者滿(mǎn)意率更高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異(P=0.004，Chisquare test)。
　　(2)皮膚壞死
　　實(shí)驗(yàn)組有3名(2.31％)患者經(jīng)歷了腋下皮膚壞死，而對(duì)照組發(fā)生壞死的為16名(12.31％)。其中實(shí)驗(yàn)組只有1名患者的左側(cè)腋下術(shù)區(qū)為嚴(yán)重壞死，并接受了二期皮瓣修復(fù)術(shù)后痊愈。對(duì)照組有8名患者診斷為嚴(yán)重壞死，并均接受了再次手術(shù)，包括

16、重新清創(chuàng)縫合術(shù)（3例）、局部皮瓣修復(fù)術(shù)（5例）。發(fā)生嚴(yán)重壞死的患者，恢復(fù)時(shí)間均超過(guò)2周。實(shí)驗(yàn)組的術(shù)后皮膚壞死率低于對(duì)照組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異（P=0.002,Chi square test，）。
　　(3)血腫
　　對(duì)照組發(fā)生3例(2.31％)，實(shí)驗(yàn)組未發(fā)現(xiàn)。數(shù)據(jù)無(wú)統(tǒng)計(jì)意義(P=0.25，F(xiàn)isher's exact test。
　　(4)異味復(fù)發(fā)
　　術(shù)后共有15名實(shí)驗(yàn)組患者和6名對(duì)照組患者主訴有異味復(fù)發(fā)，經(jīng)復(fù)診

17、評(píng)估后，其中實(shí)驗(yàn)組2名患者的3側(cè)腋窩、對(duì)照組1名患者的雙側(cè)腋窩復(fù)發(fā)癥狀較明顯，需要并接受了二次治療。其余主訴有復(fù)發(fā)癥狀的患者，復(fù)發(fā)程度均較輕，且都肯定了手術(shù)的效果。實(shí)驗(yàn)組的術(shù)后復(fù)發(fā)率高于對(duì)照組，僅具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.041，Chi square test)。
　　(5)疤痕
　　對(duì)照組的術(shù)后疤痕更長(zhǎng)（平均長(zhǎng)度3.61cm，n=130），外形更難看，表現(xiàn)為疤痕增生或疤痕攣縮，部分疤痕寬度＞3mm(P=0.000，Chi s

18、quare test)。實(shí)驗(yàn)組的疤痕相對(duì)更隱蔽，（平均長(zhǎng)度0.32cm，n=130），均不超過(guò)0.5cm。
　　結(jié)論：
　　本次研究共有65位雙側(cè)腋臭患者接受雙側(cè)大汗腺改良抽吸術(shù)，與接受傳統(tǒng)大汗腺切除術(shù)的對(duì)照組相比，試驗(yàn)組術(shù)后皮膚壞死率更低(1.88％，p＜0.01)，患者滿(mǎn)意率更高(33.85％，p＜0.01)，異味復(fù)發(fā)率更高((11。54％，p＜0.05)，疤痕更隱蔽美觀(guān)(0.77％，p＜0.01)。所以，我們認(rèn)為改良的