異位ACTH綜合征的發(fā)病機(jī)制及靶向治療研究.pdf

1、【目的及意義】異位ACTH綜合征是Cushing綜合征中診治最為困難的一種類型，其患者不得不面對原發(fā)腫瘤和高皮質(zhì)醇血癥的雙重威脅。目前因其發(fā)病機(jī)制不明，臨床缺乏有效的診斷方法以及治療措施，因而致死和致殘率非常之高。本研究的目的皆在探討異位ACTH綜合征激素異常分泌和腫瘤發(fā)生的分子機(jī)制，并尋找可能的靶向治療措施。 【研究方法】1、使用KF-PCR的方法分析POMC基因的相關(guān)轉(zhuǎn)錄及調(diào)控因子在異位AcTH綜合征腫瘤組織及細(xì)胞中的表達(dá)情

2、況，并通過重硫酸鹽直接測序的方法比較分泌ACTH的胸腺類癌組織與正常胸腺組織及其它腫瘤組織POMC基因啟動子的甲基化情況。2、根據(jù)導(dǎo)致異位ACTH綜合征的胸腺類癌組織和正常胸腺組織基因表達(dá)譜的結(jié)果，使用TR-PCR及Western Blot的方法驗(yàn)證p2l激活激酶3(PAK3)在異位ACTH綜合征腫瘤組織和細(xì)胞中的表達(dá)情況，進(jìn)一步擴(kuò)大腫瘤表達(dá)譜，同時探討其過度表達(dá)的機(jī)制、下游信號通路，以及PAK3在NIH3T3細(xì)胞上調(diào)表達(dá)后的生物學(xué)作用

3、。3、觀察全反式維甲酸、羅格列酮以及POMC基因的RNA干擾對DMS一79細(xì)胞 ACTH分泌的靶向抑制作用。 【研究結(jié)果】1、轉(zhuǎn)錄Tpit與POMC基因的表達(dá)高度相關(guān)，POMC基因啟動子在分泌ACTH的胸腺類癌組織中甲基化程度顯著降低。2、PAK3只在胸腺類癌、嗜鉻細(xì)胞瘤、垂體瘤、甲狀旁腺腺瘤瘤等神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤組織中高度表達(dá)，PAK3高表達(dá)的組織細(xì)胞p-JNK水平升高，野生型和突變型的PAK3轉(zhuǎn)染NIH3T3細(xì)胞，可以激活腫(

4、通路，增加細(xì)胞的遷移能力。3、全反式維甲酸和羅格列酮靶向抑制DMS-79細(xì)胞．ACTH分泌的效果不明顯，但RNA干擾POMC基因可以有效抑制DMS-79細(xì)胞的ACTH分泌。 [結(jié)論]POMC基因啟動子CpG島的低度甲基化(表觀遺傳學(xué)改變)以及某些轉(zhuǎn)錄因子的異常表達(dá)，使POMC啟動子活化，激活．POMC基因的轉(zhuǎn)錄，從而使垂體外腫瘤獲取分泌ACTH的能力。PAK3的上調(diào)可能通過激活JNK MAPK通路，增加細(xì)胞遷移能力，從而在致異位