ABCC11基因SNP在腋臭發(fā)病中作用機(jī)制的研究及臨床應(yīng)用的探索.pdf

1、腋臭，俗稱狐臭，是一種常見疾病，臨床表現(xiàn)為雙側(cè)腋部難聞的氣味，患者多有家族史。雖其本身不對(duì)機(jī)體健康造成直接損害，但其散發(fā)出的難聞氣味，給患者帶來很大自卑感及心理負(fù)擔(dān)，影響人際交往及日常生活。因此，患者往往不斷尋求診治，且多要求徹底祛除。目前腋臭的治療方法種類繁多，可分為保守治療和手術(shù)治療。保守治療有效時(shí)間相對(duì)較短，一般難以達(dá)到徹底根治。手術(shù)治療仍是目前祛除腋臭最為徹底的方法。但是手術(shù)治療痛苦相對(duì)較大，還可能出現(xiàn)難以接受的并發(fā)癥。因此，尋

2、求一種療效持久，痛苦少，并發(fā)癥少，為大家公認(rèn)的方法仍需要不斷的研究和嘗試。
　　但是，臨床上對(duì)腋臭的診斷和治療存在著以下瓶頸:首先，腋臭癥的確切發(fā)病機(jī)制尚不明確。一般認(rèn)為特殊異味的產(chǎn)生來自于腋窩部的頂泌汗腺。其分泌物質(zhì)經(jīng)皮膚表面的細(xì)菌作用，分解為多種不飽和脂肪酸，從而產(chǎn)生特殊的氣味。但是其具體分子機(jī)制及典型的常染色體顯性遺傳性未得到良好的解釋。因此，對(duì)腋臭遺傳基礎(chǔ)的進(jìn)一步研究有助于揭示其發(fā)病機(jī)制并為腋臭的治療提供新方向。其次，目前

3、在臨床上，腋臭的診斷仍主要根據(jù)患者腋部特殊異味的主觀感覺判斷，仍缺乏客觀可靠的指標(biāo)。特別是對(duì)腋臭較輕以及術(shù)后異味殘留的患者，僅憑氣味判斷嚴(yán)重程度有時(shí)存在一定的爭(zhēng)議。再次，腋臭的嚴(yán)重程度及療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)尚不統(tǒng)一，以至于各種治療方法難以進(jìn)行科學(xué)有效的比較研究。因此，腋臭發(fā)病機(jī)制的進(jìn)一步研究對(duì)尋找腋臭客觀的診斷及評(píng)價(jià)指標(biāo)、指導(dǎo)腋臭的治療及相關(guān)治療藥物的研發(fā)均具有重要的臨床意義和價(jià)值。
　　目的:
　　1.分析ABCC11基因單核苷酸

4、多態(tài)性與腋臭發(fā)病的相關(guān)性，分析不同基因型與腋臭的嚴(yán)重程度的關(guān)系;
　　2.研究腋窩頂泌汗腺中ABCC11基因編碼蛋白在腋臭患者與正常人的表達(dá)差異，進(jìn)一步探討ABCC11單核苷酸多態(tài)性在腋臭發(fā)病中的作用機(jī)制。
　　3.人頂泌汗腺細(xì)胞體外模型的建立，培養(yǎng)并觀察腺細(xì)胞的生長特性，分析ABCC11基因不同基因型頂泌汗腺細(xì)胞的生長及增殖差異，為進(jìn)一步的研究打下基礎(chǔ)。
　　4.檢測(cè)不同基因型人頂泌汗腺中ABCC11/MRP8及Ap

5、oD蛋白表達(dá)及轉(zhuǎn)錄水平，分析二種蛋白的相關(guān)性，進(jìn)一步揭示腋臭的發(fā)病機(jī)制，也為尋找腋臭的臨床診斷及療效評(píng)價(jià)的客觀指標(biāo)提供新方向。
　　5.采用負(fù)壓剝離結(jié)合消痔靈灌注的新方法治療腋臭，隨訪觀察治療效果及并發(fā)癥，結(jié)合ABCC11/MRP8及ApoD蛋白表達(dá)水平的檢測(cè)評(píng)價(jià)手術(shù)效果，分析基因型、腋臭嚴(yán)重程度、療效及預(yù)后的關(guān)系。為腋臭的診斷評(píng)價(jià)指標(biāo)及腋臭的手術(shù)治療方法的改進(jìn)提供理論依據(jù)。
　　方法:
　　1.取正常成人及腋臭患者外

6、周血液以提取DNA，應(yīng)用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-高分辨率溶解曲線(PCR-HRM)技術(shù)，結(jié)合測(cè)序驗(yàn)證檢測(cè)ABCC11基因多態(tài)性位點(diǎn)rs17822931的基因型，分析不同等位基因在腋臭患者及正常人群中的分布情況，探討其與中國漢族人群腋臭發(fā)病的相關(guān)性。
　　2.建立人頂泌汗腺細(xì)胞體外模型，觀察不同基因型人頂泌汗腺細(xì)胞的生長特性并繪制生長曲線，分析不同基因型對(duì)人頂泌汗腺細(xì)胞增殖能力的影響。
　　3.隨機(jī)收取不同基因型的受試者腋窩全層皮膚標(biāo)

7、本，采用組織切片觀察頂泌汗腺的形態(tài)，采用免疫組織化學(xué)、realtime-PCR及western-blotting技術(shù)檢測(cè)不同基因型腋窩頂泌汗腺組織中ABCC11/MRP8及ApoD蛋白的表達(dá)和轉(zhuǎn)錄水平，采用SPSS13.00軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，分析兩種蛋白水平之間的相關(guān)性及與腋臭程度的關(guān)系，分析二種蛋白表達(dá)水平在不同基因型組間是否存在差異，P＜0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　4.收集于湘雅醫(yī)院整形美容外科門診行負(fù)壓剝離結(jié)合消痔靈灌注祛除

8、腋臭患者的一般情況及相關(guān)臨床資料，隨訪觀察并記錄治療效果及并發(fā)癥，與其他報(bào)道的方法進(jìn)行對(duì)比分析，評(píng)價(jià)該治療方法的效果，為手術(shù)方法的進(jìn)一步改進(jìn)提供理論基礎(chǔ);結(jié)合ABCC11/MRP8及ApoD蛋白表達(dá)水平的檢測(cè)分析評(píng)價(jià)手術(shù)效果，為尋找手術(shù)后療效評(píng)價(jià)的客觀參考指標(biāo)提供理論依據(jù)。
　　結(jié)果:
　　1.ABCC11基因多態(tài)性位點(diǎn)rs17822931存在三種基因型:G/G、A/G、A/A，在52個(gè)病例組中頻率分別為9.62％、88.4

9、6％、1.92％;在52例對(duì)照組均為AA型;98.08％的腋臭患者存在G型等位基因，說明該位點(diǎn)的G型等位基因是腋臭的發(fā)生的顯性遺傳因素。不同基因型之間腋臭的嚴(yán)重程度存在差異且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.035＜0.05);
　　2.收集腋窩全層皮膚標(biāo)本58例，其中AA型的正常人8例，不同程度的腋臭患者50例（GG型5例，GA型45例）;免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示ABCC11及ApoD蛋白均特異性的在人腋窩頂泌汗腺細(xì)胞中表達(dá)。不同程度的腋臭

10、患者腋窩皮膚中兩種蛋白的表達(dá)水平存在差異;ABCC11/MRP8蛋白表達(dá)陽性率的秩和檢驗(yàn)分析顯示GG型及GA型的腋臭患者腋窩頂泌汗腺中的ABCC11/MRP8陽性率明顯高于基因型為AA型的正常人;但GG型與GA型的ABCC11/MRP8陽性率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3.光鏡下觀察腋窩皮膚組織切片樣本顯示:基因型為GG及GA型的腋臭患者的頂泌汗腺數(shù)量及處在分泌活躍期的頂泌汗腺比例均明顯高于基因型為AA型的正常人。GG型及GA型之間無

11、顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　4.頂泌汗腺細(xì)胞培養(yǎng)觀察表明不同基因型的細(xì)胞具有共同特征:培養(yǎng)潛伏期為1-2天;3天后細(xì)胞增殖活躍，進(jìn)入對(duì)數(shù)增殖期，細(xì)胞呈‘鵝卵石’樣，體積較大、透明度好;對(duì)數(shù)增殖期持續(xù)約10-12天，直至第7天達(dá)峰值，第12天各基因型的人頂泌汗腺細(xì)胞增殖受到不同程度的抑制。通過繪制生長曲線并分析比較，顯示GG型及GA型人頂泌汗腺細(xì)胞在第6天、第9天，第12天的細(xì)胞數(shù)量明顯多于AA型，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　5.免

12、疫組織化學(xué)、Western blotting及PCR檢測(cè)結(jié)果顯示腋臭患者腋窩頂泌汗腺中的ABCC11和ApoD表達(dá)及轉(zhuǎn)錄水平均明顯高于正常人，ABCC11的基因型與其mRNA及蛋白水平存在相關(guān)性。ABCC11與ApoD蛋白的水平相關(guān)性分析顯示二者呈正相關(guān)。
　　6.收集并隨訪從2009年3月至2013年3月于湘雅醫(yī)院整形美容外科門診行負(fù)壓剝離結(jié)合消痔靈灌注祛除腋臭的患者171名，其中重度63例，中度81例，輕度27例，隨訪6個(gè)月至

13、26個(gè)月。隨訪顯示治愈316側(cè)，占92.4％;有效26側(cè)，約占7.6％，有效率100％;滿意度調(diào)查顯示，157例患者對(duì)手術(shù)效果表示非常滿意(91.8％)，13例患者表示基本滿意（占7.6％），滿意度達(dá)99.4％。與已有各種腋臭治療手術(shù)方法比較，認(rèn)為該手術(shù)方法滿意度相對(duì)較高，并發(fā)癥發(fā)生率相對(duì)較低。
　　7.手術(shù)前后腋窩皮膚Western blotting及PCR結(jié)果顯示術(shù)后ABCC11/MRP8和ApoD表達(dá)明顯減少或無表達(dá)。不同嚴(yán)

14、重程度與治愈率檢驗(yàn)分析顯示:中度及輕度患者的治愈率相對(duì)重度較高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;
　　結(jié)論:
　　1.ABCC11基因rs17822931位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性是腋臭形成的重要遺傳因素，G型等位基因的存在是腋臭發(fā)生的遺傳基礎(chǔ);該基因在腋窩大汗腺中特異性的表達(dá)，其表達(dá)水平在不同基因型存在差異，影響腋臭的嚴(yán)重程度。ABCC11基因rs17822931位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性基因型的檢測(cè)可作為臨床上客觀診斷及評(píng)價(jià)腋臭的參考依據(jù)之一;
　

15、　2.ABCC11不同基因型的頂泌汗腺內(nèi)蛋白表達(dá)水平及mRNA水平存在差異，該基因可能是通過調(diào)控轉(zhuǎn)運(yùn)多種脂類腋臭前體物質(zhì)的蛋白量，直接影響臭味物質(zhì)的分泌，從而決定腋臭的發(fā)生。
　　3.不同腋臭嚴(yán)重程度頂泌汗腺ABCC11/MRP8及ApoD的表達(dá)水平不同，術(shù)后兩種蛋白的水平明顯減少，兩種蛋白的表達(dá)水平呈正相關(guān)，但相關(guān)性較弱。ABCC11/MRP8及ApoD檢測(cè)有助于腋臭的診斷及療效評(píng)判。
　　4.ABCC11基因單核苷酸位點(diǎn)