ABCA1在子癇前期發(fā)病中的作用及其機制研究.pdf

1、1、ABCA1基因單核苷酸多態(tài)性分布及其與子癇前期脂代謝異常的關聯(lián)性研究
　　目的:
　　采用cases-controls方法檢測ABCA1基因2個候選單核苷酸多態(tài)位點(SNPs):R219K和I883M的基因型、等位基因及單倍型在子癇前期組和正常妊娠組中的頻率,探明ABCA1基因SNPs在福建漢族婦女中的分布,探索ABCA1基因與子癇前期發(fā)生、發(fā)展的相關性,并揭示這2個基因多態(tài)位點在子癇前期脂代謝異常中的作用。
　　

2、方法:
　　選取研究對象621例,均為福建地區(qū)漢族人群,其中子癇前期患者組305例,正常妊娠組316例。采用聚合酶鏈-限制性片段長度多態(tài)性反應(PCR-RFLP)的技術手段,并結合瓊脂糖凝膠電泳技術檢測ABCA1基因2個SNP位點在中國福建地區(qū)漢族婦女中的等位基因以及基因型的頻率分布特點,通過與之相關聯(lián)的血脂等臨床資料,探索ABCA1基因2個SNPs位點與子癇前期及其血脂代謝的遺傳相關性。
　　采用SHEsis在線分析軟件和

3、SPSS17.0軟件包進行相關數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析。
　　結果:
　　(1)子癇前期組和正常妊娠組ABCA1基因上述2個SNP位點基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡定律,P值均大于0.05,樣本具有群體代表性。
　　(2)ABCA1基因R219K多態(tài)位點K等位基因頻率和RK+KK基因型頻率在子癇前期病例組明顯降低,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。I883M多態(tài)位點三種基因型頻率和等位基因頻率在子癇前期病例組和對

4、照組間未發(fā)現(xiàn)顯著性差異。
　　(3)子癇前期組(包括輕度組及重度組)血清TG、TC、LDL、ApoB、HDL、ApoAI水平分別與對照組比較,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　(4)ABCA1基因上述2個SNPs的基因型與血脂水平的關聯(lián)分析,發(fā)現(xiàn)子癇前期病例組內(nèi)R219K位點K等位基因攜帶者(RK+KK基因型)血清甘油三酯(TG)濃度低于RR基因型,而HDL-C濃度剛好相反,差異有顯著的統(tǒng)計學意義(P<0.05)。子

5、癇前期病例組I等位基因攜帶者(MI+II基因型)較MM基因型攜帶者血液中HDL-c及ApoA1濃度明顯增高,差異有顯著性(P<0.05)。
　　(5)采用SHEsis在線分析軟件對ABCA1基因上述2個SNPs位點間進行兩兩配對連鎖不平衡分析,發(fā)現(xiàn)這兩個SNPs位點間不存在較強的連鎖不平衡關系,故無法構建單倍體。
　　2、子癇前期產(chǎn)婦血清和胎盤組織中ABCA1表達及其與血脂代謝的關聯(lián)研究目的:
　　實驗檢測子癇前期組和

6、正常妊娠組的血脂濃度,血清和胎盤組織中ABCA1表達水平,研究ABCA1基因及蛋白表達與血脂異常代謝之間存在的相關性,闡明血脂代謝的異常在子癇前期病理機制中的重要作用,并進一步探索ABCA1在子癇前期患者體內(nèi)可能是通過參與血脂異常代謝、動脈粥樣硬化性改變,從而對子癇前期的發(fā)病起著重要作用。
　　方法:
　　選擇同期住院分娩的子癇前期組52名(其中輕度子癇前期產(chǎn)婦28名,重度子癇前期產(chǎn)婦24名)、正常妊娠組30例,酶法檢測血脂

7、濃度,ELISA法檢測血清ABCA1濃度,實時熒光定量RT-PCR法和免疫印跡法檢測胎盤組織中ABCA1基因和ABCA1蛋白表達水平。
　　結果:
　　(1)子癇前期組血清TG、TC、LDL濃度較正常妊娠組明顯升高,而HDL濃度則明顯降低,且與病情的嚴重程度成正相關,上述差異均有顯著的統(tǒng)計學意義(P<0.05),表明子癇前期患者母體自身動脈硬化指數(shù)增高,血管病變風險性增加。(2)子癇前期組血清ABCA1濃度及胎盤組織ABCA

8、1基因和蛋白表達水平較正常妊娠組均顯著降低,且與病情嚴重程度成正相關,差異具有顯著性(P<0.05)。
　　(3)子癇前期組血清ABCA1濃度與胎盤組織ABCA1蛋白表達水平呈正相關(r=0.384,P<0.05),與血清低密度脂蛋白(LDL)濃度呈負相關(r=-0.279,P<0.05),而與高密度脂蛋白(HDL)呈正相關(r=0.318,P<0.05)。
　　3、正常妊娠與子癇前期血清ABCA1及OX-LDL表達特點及對

9、內(nèi)皮細胞損傷的影響
　　目的:
　　研究正常妊娠婦女及子癇前期患者血清中氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)的表達及OX-LDL/ABCA1比值的差異,以及不同血清干預對內(nèi)皮細胞損傷的影響,探討子癇前期血清中OX-LDL及OX-LDL/ABCA1表達變化與內(nèi)皮細胞損傷的關系,進一步明確ABCA1在子癇前期發(fā)病中的作用及其作用機制。
　　方法:
　　研究對象同第二部分,ELISA法定量檢測上述正常妊娠及子癇前期組血清中

10、OX-LDL的表達水平;原代培養(yǎng)臍靜脈內(nèi)皮細胞,分別用上述不同組別血清體外干預人臍靜脈內(nèi)皮細胞生長,利用:熒光標記的牛血清白蛋白檢測內(nèi)皮細胞的單層屏障功能;咪噢蘭比色法(MTT)檢測內(nèi)皮細胞的增殖能力;硝酸還原酶法檢測內(nèi)皮細胞的一氧化氮(NO)合成能力,以評估正常妊娠及子癇前期患者血清對內(nèi)皮細胞功能的影響。
　　結果:
　　(1)子癇前期組患者血清中OX-LDL表達水平較正常妊娠組明顯升高,與血清中ABCA1蛋白表達水平呈負

11、相關(r=-0.681,P<0.05),且與病情的嚴重程度相關聯(lián)。
　　(2)與正常妊娠組相比,子癇前期組血清可使臍靜脈內(nèi)皮細胞功能明顯受損,包括:通過單層內(nèi)皮細胞的牛血清白蛋白濃度升高,即內(nèi)皮細胞的單層屏障功能受損;內(nèi)皮細胞增殖能力明顯被抑止;培養(yǎng)基中NO濃度明顯降低。上述改變與病情嚴重程度成正比,且差異有顯著的統(tǒng)計學意義。
　　(3)子癇前期組血清中OX-LDL/ABCA1比值較正常妊娠組明顯升高,且與臍靜脈內(nèi)皮細胞功能