胎盤組織中的KLF8表達變化在子癇前期發(fā)病中的作用研究.pdf

1、目的:本研究通過檢測正常孕婦早孕期絨毛組織、子癇前期(preeclampsia，PE)患者胎盤組織、經(jīng)缺氧復(fù)氧(hypoxia-reoxygenation，H/R)處理的人早孕期絨毛外滋養(yǎng)細胞HTR8/Svneo細胞中的Krüppel樣因子8(Krüppel-like factor8，KLF8)和基質(zhì)金屬蛋白酶-9(matrixmetalloproteinase-9，MMP-9)的表達，分析KLF8與滋養(yǎng)細胞侵襲、氧化應(yīng)激之間的關(guān)系，探

2、討KLF8在子癇前期發(fā)病過程中的作用。
　　方法:選擇2012年3月至2012年6月在重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院門診進行選擇性流產(chǎn)、妊娠6-11周的22例正常孕婦為研究對象，取絨毛組織標(biāo)本;并選擇2011年9月至2012年3月在重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院住院分娩的22例子癇前期孕婦為研究對象，另以同期足月妊娠行擇期剖宮產(chǎn)術(shù)的20例正常孕婦為對照組，兩組孕婦分娩后取胎盤組織標(biāo)本。采用免疫組化SP法檢測各組孕婦絨毛組織、胎盤組織中KLF8

3、蛋白的定位，實時熒光定量PCR(quantitative real-time polymerase chainreaction，qRT-PCR)技術(shù)檢測各組孕婦絨毛組織、胎盤組織中KLF8mRNA表達水平，采用蛋白印跡法(Western blotting，WB)檢測各組孕婦絨毛組織中KLF8、基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）蛋白的表達水平。給予HTR8/SVneo細胞缺氧復(fù)氧處理（2％氧壓8h，正常氧壓16h，重復(fù)2次）和正常氧壓培養(yǎng)，

4、檢測KLF8在HTR8/SVneo細胞的亞細胞定位，KLF8、MMF-9蛋白的表達水平以及細胞侵襲能力。
　　結(jié)果:
　　(1)正常妊娠6-11周絨毛組織中均有KLF8蛋白表達，主要定位于絨毛組織滋養(yǎng)層中的細胞滋養(yǎng)細胞和合體滋養(yǎng)細胞。KLF8mRNA隨妊娠周數(shù)增加而逐漸升高，并在妊娠8-10周達到高峰（孕8周最高），而后急劇降低。正常早孕絨毛組織中KLF8、MMP-9蛋白表達水平同樣隨妊娠周數(shù)增加而逐漸升高，并在妊娠8-10

5、周達到最高峰（妊娠9周最高），而后逐漸降低。正常早孕絨毛組織中KLF8蛋白及MMP-9蛋白表達呈正相關(guān)關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r為0.66(P＜0.001)。
　　(2)子癇前期組和對照組胎盤組織中均有KLF8蛋白表達，主要定位于胎盤滋養(yǎng)層細胞，血管內(nèi)皮細胞及少量間質(zhì)細胞也可見陽性染色。子癇前期組胎盤組織中KLF8 mRNA表達水平為（0.69±0.08），明顯低于對照組的(1.14±0.09)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。子癇前期組

6、胎盤組織中KLF8、MMP-9蛋白表達水平分別為（0.68±0.05）、（0.21±0.03），均低于對照組的（0.94±0.06）、（0.34±0.03），分別比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。胎盤組織中KLF8蛋白及MMP-9蛋白表達呈正相關(guān)關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r為0.64(P＜0.0001)。
　　(3)正常培養(yǎng)的HTR8/Svneo細胞KLF8蛋白聚集于細胞核中，經(jīng)過H/R處理后的HTR8/Svneo細胞可見部分細胞KLF8

7、蛋白胞漿定位增多。侵襲實驗檢測H/R處理后的HTR8/Svneo細胞侵襲力較正常培養(yǎng)組明顯降低(P＜0.01)。H/R處理后的HTR8/Svneo細胞KLF8、 MMP-9蛋白表達水平分別為（0.42±0.02）、(0.13±0.01)，均低于正常培養(yǎng)組的(0.75±0.02)、(0.19±0.01)，分別比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。
　　結(jié)論: KLF8在生理性H/R的正常孕早期、以病理性反復(fù)H/R為特征的子癇前期孕婦