FIZZ1在動脈粥樣硬化發(fā)病中的作用及其機制.pdf

1、動脈粥樣硬化(Atherosclerosis，AS)導致的心腦血管疾病是當今人類死亡的首位原因。雖然AS的概念已提出近100年，而且國內、外學者對其發(fā)病機理進行了深入研究，但其病死率仍居高不下，可能與其發(fā)病機制尚不十分明確有關。關于其形成的學說較多，其中Ross提出的“AS是一種炎癥性疾病”備受關注，他指出AS是動脈壁對各種炎癥損傷的炎癥-增殖反應，在此過程中涉及炎癥、內膜巨噬細胞聚集、平滑肌細胞的增殖遷移及細胞外基質的聚集等諸多環(huán)節(jié)。

2、 FIZZ1(Foundininflammatoryzone1)是2000年發(fā)現的一個因子，研究表明它在缺氧、炎癥等狀態(tài)下循環(huán)單核細胞和激活巨噬細胞中顯著升高，且在缺氧引起肺血管重塑的過程中，FIZZ1可引起肺血管平滑肌細胞的增殖和遷移。如前所述，在動脈粥樣硬化病變中炎癥和缺氧同時存在，激活的單核——巨噬細胞明顯增多，大量的處于活化狀態(tài)的巨噬細胞積聚于動脈粥樣斑塊及周圍動脈組織內。因此我們有理由推測，動脈粥樣硬化病變組織中FIZ

3、Z1表達上調，并可能參與AS的形成和發(fā)展。 本研究擬建立apoE基因敲除小鼠動脈粥樣硬化模型，測定動脈粥樣硬化組織中FIZZ1的表達；用重組的FIZZ1蛋白刺激體外培養(yǎng)的小鼠主動脈平滑肌細胞增殖和遷移，并探討其可能的信號轉導通路，從而為防治AS提供新的思路和理論依據。 本課題主要研究結果和結論如下： 1.應用微膠乳凝集法檢測血清超敏C-反應蛋白(hs-CRP)表明：雖然AS模型組和羅格列酮干預組的hs-CRP水平

4、均顯著高于正常對照組，但羅格列酮干預后，血清hs-CRP水平顯著低于AS模型組。提示羅格列酮具有抑制炎癥反應的作用。 2.病理形態(tài)學結果表明，正常對照組的內膜完整性較好，無動脈粥樣硬化病變形成。AS模型組可見內膜完整性破壞，內膜下大量的泡沫細胞聚集，形成明顯的動脈粥樣硬化斑塊，而羅格列酮灌胃組泡沫細胞聚集程度及動脈粥樣硬化斑塊面積顯著低于AS模型組，表明羅格列酮具有抗動脈粥樣硬化的作用。 3.應用免疫組織化學和RT-PC

5、R檢測發(fā)現：與正常對照組比較，AS模型組血管組織FIZZ1蛋白和mRNA表達明顯增高，而羅格列酮干預組血管組織FIZZ1表達明顯降低。 4.重組FIZZ1蛋白濃度依賴性地促進體外培養(yǎng)的小鼠主動脈平滑肌細胞(VSMCs)的增殖：3H-TdR法及MTT法均表明，FIZZ1干預后能顯著地促進VSMCs對3H-TdR摻入及對MTT的攝取和代謝。免疫細胞化學檢測結果顯示，FIZZ1刺激后VSMCs增殖細胞核抗原(PCNA)的表達增強、陽性

6、細胞數明顯增多。流式細胞儀檢測細胞周期結果也表明，重組FIZZ1蛋白刺激后，S期細胞數明顯增多，而G0/G1期細胞數明顯減少。多種方法均提示FIZZ1能夠顯著促進VSMCs的增殖。 5.利用Boyden小室觀察到：重組FIZZ1蛋白濃度依賴性地促進體外培養(yǎng)的小鼠主動脈平滑肌細胞(VSMCs)的遷移。 6.靜止的VSMCs中加入重組FIZZ1蛋白，顯著地增加了Akt1蛋白的表達，PI3K的抑制劑Ly294002以劑量(10

7、μmol/L～30μmol/L)依賴性的方式抑制FIZZ1誘導的Akt1的表達。 7.靜止的VSMCscyclinD1水平較低，而p21和p27水平較高，加入重組FIZZ1蛋白后，cyclinD1的表達明顯增高，而p21和p27明顯降低。Ly294002以劑量(10μmol/L～30μmol/L)依賴性的方式抑制FIZZ1誘導的cyclinD1表達增高和p21及p27的表達降低。表明PI3K/AKT通路介導了FIZZ1對VSMC

8、s的增殖作用。 8.免疫熒光法表明FIZZ1促進血管平滑肌細胞F-actin的表達，而預先加入Ly294002可劑量依賴性地拮抗FIZZ1導致的F-actin的表達，提示FIZZ1通過活化PI3K/Akt通路促進VSMCs內F-actin的表達，從而促進VSMCs的遷移。 綜上所述，本研究首次表明：動脈粥樣硬化病變組織內FIZZ1的表達顯著增強，而羅格列酮可能通過抑制炎癥反應顯著降低AS病變組織中FIZZ1的表達；重組F

9、IZZ1蛋白可濃度依賴性地促進體外培養(yǎng)的小鼠主動脈平滑肌細胞的增殖和遷移；FIZZ1促進VSMCs增殖可能是通過誘導PI3K/Akt的活化，而后者又通過上調cyclinD1的表達，同時下調CDK抑制劑p21和p27的表達來實現的；FIZZ1通過活化VSMCs內PI3K/Akt通路，促進F-actin的表達，從而促進VSMCs的遷移。由此，我們可得出結論：AS發(fā)生過程中的炎癥反應可誘導FIZZ1的表達，FIZZ1又通過激活PI3K/Akt