Ghrelin在冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病中的作用及其機(jī)制研究.pdf

1、第一部分:老年冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病及缺血性心力衰竭患者外周血ghrelin水平變化。
　　 [目的]觀察老年冠心病(CAD)和缺血性心力衰竭(IHF)患者外周血ghrelin水平的變化。
　　 [方法]采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)檢測(cè)56例CAD伴IHF組,60例CAD不伴IHF組和100例正常對(duì)照組空腹外周血漿ghrelin水平；同時(shí)檢測(cè)空腹血糖(FBS)、空腹胰島素(FINS)、血脂、肌酐、尿酸等水平,并

2、測(cè)量身高、體重、腰圍、臀圍等指標(biāo)。
　　 [結(jié)果]正常對(duì)照組空腹血漿ghrelin水平為220.8±139.6 pmol／L,CAD組空腹血漿ghrelin水平為250.1±191.2 pmol／L,兩組之間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。而CAD伴IHF組空腹血漿ghrelin水平為209.7±141.5 pmol／L,CAD不伴IHF組空腹血漿ghrelin水平為287.7±222.7 pmol／L,兩組之間比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,P=0.0

3、27。CAD組與正常對(duì)照組比較,CAD組的吸煙比例、收縮壓、腰圍、腰臀比(WHR)、體重指數(shù)(BMI)、尿酸、FBS、FINS和穩(wěn)態(tài)模型胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)均明顯高于正常對(duì)照組,而左心室射血分?jǐn)?shù)(LVEF)明顯低于正常對(duì)照組,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；余各項(xiàng)指標(biāo)之間無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。CAD伴IHF組和CAD不伴IHF組比較,除了LVEF明顯低于CAD不伴IHF組(P<0.001),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異外,余各項(xiàng)指標(biāo)之間均無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。<

4、br>　　 [結(jié)論]CAD伴IHF組空腹血漿ghrelin水平較CAD不伴IHF組明顯降低,ghrelin可能是預(yù)防CAD進(jìn)展至IHF的一個(gè)保護(hù)因子。
　　 第二部分:老年冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病及缺血性心力衰竭與ghrelin基因多態(tài)性的相關(guān)性研究。
　　 [目的]探討老年漢族人CAD和IHF與ghrelin基因多態(tài)性的相關(guān)性。
　　 [方法]采用病例-對(duì)照研究的方法,運(yùn)用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)、測(cè)序和限制

5、性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(RFLP)方法檢測(cè)包含最常見(jiàn)的3個(gè)多態(tài)位點(diǎn)Leu72Met(C408A,rs696217)、Arg51Gln(G346A,rs34911341)和Gln90Leu(A3412T,rs4684677)的ghrelin基因片段,分析比較56例CAD伴IHF患者,60例CAD不伴IHF患者和100例正常對(duì)照者基因型和等位基因的變化。
　　 [結(jié)果]在檢測(cè)的包含外顯子2和外顯子3的ghrelin基因片段中,僅發(fā)現(xiàn)一個(gè)多

6、態(tài)位點(diǎn),即Leu72Met(C408A,rs696217)。CAD不伴IHF組和正常對(duì)照組之間基因型和等位基因的頻率無(wú)顯著性差異,CAD伴IHF組基因型CC和等位基因C的頻率明顯高于CAD不伴IHF組(P=0.025,P=0.011)。Leu72Met多態(tài)性與各項(xiàng)臨床指標(biāo)之間均無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 [結(jié)論]Ghrelin基因外顯子2第408位點(diǎn)基因型CC和等位基因C可能是中國(guó)老年人IHF的易感基因。
　　 第三部分:

7、Ghrelin對(duì)過(guò)氧化氫誘導(dǎo)的大鼠H9c2心肌細(xì)胞凋亡的影響及其機(jī)制研究。
　　 [目的]觀察ghrelin對(duì)過(guò)氧化氫(H2O2)誘導(dǎo)的大鼠H9c2心肌細(xì)胞凋亡的影響,并探討可能的作用機(jī)制。
　　 [方法]體外培養(yǎng)H9c2心肌細(xì)胞,建立H2O2誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡模型,實(shí)驗(yàn)分五組:對(duì)照組、單純H2O2誘導(dǎo)組、ghrelin1μM預(yù)處理組、ghrelin0.1μM預(yù)處理組和gharelin0.01μM預(yù)處理組。應(yīng)用形態(tài)學(xué)觀察、細(xì)

8、胞增殖檢測(cè)(MTS)法檢測(cè)細(xì)胞活力,流式和原位末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記技術(shù)(TUNEL)檢測(cè)細(xì)胞凋亡。采用蛋白免疫印跡(western blotting)法測(cè)定Bcl-2、Bax、天冬氨酸特異性的半胱氨酸蛋白水解酶-9(caspase-9)和核因子κB(NF-κB)等蛋白的表達(dá),應(yīng)用比色法測(cè)定天冬氨酸特異性的半胱氨酸蛋白水解酶-3(caspase-3)的活性。
　　 [結(jié)果]當(dāng)H9c2心肌細(xì)胞與H2O2共同培養(yǎng)18小時(shí)后,H9c2心肌細(xì)胞

9、活力明顯下降,而當(dāng)不同濃度的ghrelin預(yù)處理后再與H2O2共同培養(yǎng),心肌細(xì)胞的存活率比單純H2O2誘導(dǎo)組明顯升高,細(xì)胞凋亡率明顯下降。分子機(jī)制研究過(guò)程中發(fā)現(xiàn),ghrelin能降低H2O2誘導(dǎo)的Bax和caspase-9蛋白的表達(dá),并能增加H2O2抑制的Bcl-2蛋白的表達(dá)；總NF-κB蛋白的表達(dá)保持不變,而gllrelin能降低H2O2誘導(dǎo)的磷酸化NF-κB蛋白的表達(dá)。比色法研究發(fā)現(xiàn),ghrelin能抑制H2O2誘導(dǎo)的caspase