Ghrelin在冠狀動脈粥樣硬化性心臟病中的作用及其機制研究.pdf

1、第一部分:老年冠狀動脈粥樣硬化性心臟病及缺血性心力衰竭患者外周血ghrelin水平變化。
　　 [目的]觀察老年冠心病(CAD)和缺血性心力衰竭(IHF)患者外周血ghrelin水平的變化。
　　 [方法]采用酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)檢測56例CAD伴IHF組,60例CAD不伴IHF組和100例正常對照組空腹外周血漿ghrelin水平；同時檢測空腹血糖(FBS)、空腹胰島素(FINS)、血脂、肌酐、尿酸等水平,并

2、測量身高、體重、腰圍、臀圍等指標。
　　 [結(jié)果]正常對照組空腹血漿ghrelin水平為220.8±139.6 pmol／L,CAD組空腹血漿ghrelin水平為250.1±191.2 pmol／L,兩組之間比較無統(tǒng)計學差異。而CAD伴IHF組空腹血漿ghrelin水平為209.7±141.5 pmol／L,CAD不伴IHF組空腹血漿ghrelin水平為287.7±222.7 pmol／L,兩組之間比較具有統(tǒng)計學差異,P=0.0

3、27。CAD組與正常對照組比較,CAD組的吸煙比例、收縮壓、腰圍、腰臀比(WHR)、體重指數(shù)(BMI)、尿酸、FBS、FINS和穩(wěn)態(tài)模型胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)均明顯高于正常對照組,而左心室射血分數(shù)(LVEF)明顯低于正常對照組,具有統(tǒng)計學差異；余各項指標之間無明顯統(tǒng)計學差異。CAD伴IHF組和CAD不伴IHF組比較,除了LVEF明顯低于CAD不伴IHF組(P<0.001),具有統(tǒng)計學差異外,余各項指標之間均無明顯統(tǒng)計學差異。<

4、br>　　 [結(jié)論]CAD伴IHF組空腹血漿ghrelin水平較CAD不伴IHF組明顯降低,ghrelin可能是預防CAD進展至IHF的一個保護因子。
　　 第二部分:老年冠狀動脈粥樣硬化性心臟病及缺血性心力衰竭與ghrelin基因多態(tài)性的相關(guān)性研究。
　　 [目的]探討老年漢族人CAD和IHF與ghrelin基因多態(tài)性的相關(guān)性。
　　 [方法]采用病例-對照研究的方法,運用聚合酶鏈式反應(PCR)、測序和限制

5、性片段長度多態(tài)性(RFLP)方法檢測包含最常見的3個多態(tài)位點Leu72Met(C408A,rs696217)、Arg51Gln(G346A,rs34911341)和Gln90Leu(A3412T,rs4684677)的ghrelin基因片段,分析比較56例CAD伴IHF患者,60例CAD不伴IHF患者和100例正常對照者基因型和等位基因的變化。
　　 [結(jié)果]在檢測的包含外顯子2和外顯子3的ghrelin基因片段中,僅發(fā)現(xiàn)一個多

6、態(tài)位點,即Leu72Met(C408A,rs696217)。CAD不伴IHF組和正常對照組之間基因型和等位基因的頻率無顯著性差異,CAD伴IHF組基因型CC和等位基因C的頻率明顯高于CAD不伴IHF組(P=0.025,P=0.011)。Leu72Met多態(tài)性與各項臨床指標之間均無明顯統(tǒng)計學差異。
　　 [結(jié)論]Ghrelin基因外顯子2第408位點基因型CC和等位基因C可能是中國老年人IHF的易感基因。
　　 第三部分:

7、Ghrelin對過氧化氫誘導的大鼠H9c2心肌細胞凋亡的影響及其機制研究。
　　 [目的]觀察ghrelin對過氧化氫(H2O2)誘導的大鼠H9c2心肌細胞凋亡的影響,并探討可能的作用機制。
　　 [方法]體外培養(yǎng)H9c2心肌細胞,建立H2O2誘導的細胞凋亡模型,實驗分五組:對照組、單純H2O2誘導組、ghrelin1μM預處理組、ghrelin0.1μM預處理組和gharelin0.01μM預處理組。應用形態(tài)學觀察、細

8、胞增殖檢測(MTS)法檢測細胞活力,流式和原位末端轉(zhuǎn)移酶標記技術(shù)(TUNEL)檢測細胞凋亡。采用蛋白免疫印跡(western blotting)法測定Bcl-2、Bax、天冬氨酸特異性的半胱氨酸蛋白水解酶-9(caspase-9)和核因子κB(NF-κB)等蛋白的表達,應用比色法測定天冬氨酸特異性的半胱氨酸蛋白水解酶-3(caspase-3)的活性。
　　 [結(jié)果]當H9c2心肌細胞與H2O2共同培養(yǎng)18小時后,H9c2心肌細胞

9、活力明顯下降,而當不同濃度的ghrelin預處理后再與H2O2共同培養(yǎng),心肌細胞的存活率比單純H2O2誘導組明顯升高,細胞凋亡率明顯下降。分子機制研究過程中發(fā)現(xiàn),ghrelin能降低H2O2誘導的Bax和caspase-9蛋白的表達,并能增加H2O2抑制的Bcl-2蛋白的表達；總NF-κB蛋白的表達保持不變,而gllrelin能降低H2O2誘導的磷酸化NF-κB蛋白的表達。比色法研究發(fā)現(xiàn),ghrelin能抑制H2O2誘導的caspase