TSLP在動脈粥樣硬化炎癥反應(yīng)中的作用和機制.pdf

1、第一部分 TSLP在動脈粥樣硬化血管內(nèi)的表達
　　目的:觀察人和動脈粥樣硬化(AS)模型小鼠的AS血管內(nèi)是否表達胸腺基質(zhì)淋巴細胞生成素(TSLP)及其與樹突狀細胞(DCs)的關(guān)系。
　　方法:采取人無AS血管和18周齡的C57BL/6雄性小鼠血管作為正常對照,人有AS血管和18-22周齡C57BL/6背景ApoE-/-AS模型小鼠病變血管為病變組,用免疫組化法檢測血管中TSLP、CD11c和CD4的表達,用原位雜交技術(shù)檢測血

2、管中TSLP mRNA的表達,用雙重免疫熒光法檢測血管中TSLP和DCs的共表達關(guān)系。
　　結(jié)果:在人和小鼠正常血管均未見明顯TSLP表達,而在人AS病變血管與AS模型小鼠病變血管內(nèi)均見TSLP及TSLPmRNA表達。雙重免疫熒光染色顯示TSLP表達部位周圍明顯DCs聚集。連續(xù)切片免疫組化染色顯示同一血管內(nèi)TSLP表達部位有DCs和TCs共表達。
　　討論:TSLP在人及AS模型小鼠的AS血管顯著表達,其周圍可見明顯DCs、

3、TCs聚集,這說明TSLP作為DCs的上游激活因子,可能直接參與了AS免疫炎癥反應(yīng)的調(diào)控。
　　第二部分氧化低密度脂蛋白誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細胞表達TSLP
　　目的：探討氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)可否誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細胞產(chǎn)生TSLP。
　　方法：將ox-LDL(12.5,25,50,100mg/L)與培養(yǎng)原代人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVECs)共育12小時,在6小時和12小時進行檢測,用RT-PCR檢測TSLP mRNA的表達

4、,采用免疫熒光法檢測細胞胞漿中TSLP表達,用ELISA法檢測細胞培養(yǎng)上清液中TSLP的濃度。
　　結(jié)果：在對照組HUVECs中幾乎未檢測到TSLP表達;在實驗組,HUVECs中檢測到TSLP mRNA表達,胞漿內(nèi)顯著表達TSLP,其上清液中TSLP濃度亦顯著增高,呈劑量-時間依賴性。
　　結(jié)論：ox-LDL能夠誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細胞表達TSLP,這可能在血管免疫炎癥反應(yīng)環(huán)節(jié)中起到重要作用。
　　第三部分氧化低密度脂蛋白誘導(dǎo)

5、血管平滑肌細胞表達TSLP
　　目的：探討氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)能否誘導(dǎo)血管平滑肌細胞產(chǎn)生TSLP。
　　方法：將ox-LDL(12.5,25,50,100mg/L)與培養(yǎng)人動脈平滑肌細胞(HVSMCs)共育12小時,在6小時和12小時進行檢測,用RT-PCR檢測TSLP mRNA的表達,采用免疫熒光檢測細胞胞漿中TSLP表達,用ELISA法檢測細胞培養(yǎng)上清液中TSLP的濃度。
　　結(jié)果：正常對照組HVSMC

6、s中幾乎無TSLP表達;在實驗組,HVSMCs可檢測到TSLP mRNA表達,胞漿中顯著表達TSLP,其上清中TSLP的濃度顯著增高,呈劑量-時間依賴性。
　　結(jié)論：ox-LDL能夠誘導(dǎo)血管平滑肌細胞表達TSLP,這可能在血管免疫炎癥反應(yīng)環(huán)節(jié)中起重要作用。
　　第四部分阿托伐他汀抑制氧化低密度脂蛋白誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細胞表達TSLP
　　目的:觀察阿托伐他汀對ox-LDL誘導(dǎo)原代人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVECs)表達胸腺基質(zhì)淋

7、巴細胞生成素(TSLP)的影響。
　　方法:原代HUVECs培養(yǎng)72小時后分為3組,對照組加50mg/L的ox-LDL培養(yǎng)12小時;實驗組分為2組,分別加50mg/L的ox-LDL和不同濃度的阿托伐他汀培養(yǎng)12小時,于6小時和12小時進行檢測,用ELISA法檢測細胞培養(yǎng)上清液中TSLP的濃度,用RT-PCR檢測TSLP mRNA的表達,采用免疫熒光法檢測細胞胞漿中TSLP表達。
　　結(jié)果:實驗組TSLP和TSLP mRNA的