兔動脈粥樣硬化病變中炎癥介質(zhì)的表達(dá)及其可能機(jī)制.pdf

1、目的：在成功建立實驗兔動脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)模型的基礎(chǔ)上，觀察實驗兔主動脈壁核因子-kappaB(nuclearfactor-kappaB，NF-κB)、腫瘤壞死因子-alpha(tumornecrosisfactor-alpha，TNF-α)、血管細(xì)胞間粘附分子-1(vascularcelladhesionmolecule-1，VCAM-1)及基質(zhì)金屬蛋白酶-2(matrixmetalloproteina

2、se-2，MMP-2)水平的變化，以探討上述炎癥介質(zhì)之間的相互關(guān)系以及在AS病變形成中的作用機(jī)制。 方法：健康新西蘭雄性白兔18只，3月齡，體重1.8-2.4kg,按清潔級動物分籠喂養(yǎng)，適應(yīng)性喂養(yǎng)一周，稱重后隨機(jī)分為2組：(1)正常對照組(n=6，簡稱對照組)給予普通飼料喂養(yǎng)；(2)高脂加損傷組(n=12簡稱模型組)給予普通飼料加高脂飼料喂養(yǎng)(1％膽固醇+10％蛋黃粉+5％豬油)，高脂飼料喂養(yǎng)2周后，全麻鈍性分離并切開左股動脈，

3、結(jié)扎遠(yuǎn)端，近端在導(dǎo)絲導(dǎo)引下逆行插入PTCA球囊導(dǎo)管(直徑4.0mm)，插入深度為15cm，8atm，往返回拉球囊3次損傷血管內(nèi)皮，撤出導(dǎo)管和導(dǎo)絲，結(jié)扎股動脈并縫合傷口，青霉素10萬U/kg肌注預(yù)防感染，繼續(xù)高脂飼料喂養(yǎng)。上述動物共喂養(yǎng)12周，并于0、12周空腹耳緣靜脈采血。測定血清總膽固醇(totalcholesterol，TC)、甘油三酯(triglyceride，TG)、低密度脂蛋白膽固醇(lowdensitylipoprotein

4、-cholesterol，LDL-C)、高密度脂蛋白(highdensitylipoprotein-cholesterol，HDL-C)水平。將主動脈從根部分離至腹主動脈分叉處離斷，主動脈根部至主動脈弓置于-80℃低溫冰箱保存；取球囊損傷處主動脈，4％多聚甲醛液中固定3h，石蠟包埋。應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色檢測不同組別主動脈壁VCAM-1和MMP-2的表達(dá)。應(yīng)用RT-PCR檢測不同組別主動脈NF-κBmRNA和TNF-αmRNA的表達(dá)。

5、 結(jié)果：體重和血脂：經(jīng)過12周的喂養(yǎng)后，對照組、模型組體重均較自身基礎(chǔ)水平增高。模型組TC、TG、LDL-C、HDL-C較自身基礎(chǔ)水平和對照組顯著升高(p<0.05)。病理學(xué)觀察：大體對照組兔主動脈壁薄，有韌性，不易拉斷，內(nèi)膜光滑，無AS斑塊形成。模型組血管壁變厚，脆性增加，易拉斷，內(nèi)膜呈灰白色，明顯斑塊形成，甚至表面有破潰。光鏡下，對照組主動脈壁各層結(jié)構(gòu)完整，內(nèi)膜光滑、連續(xù)，內(nèi)皮完整，無泡沫細(xì)胞形成；模型組血管內(nèi)膜明顯增厚，內(nèi)膜中

6、有大量炎性細(xì)胞浸潤、泡沫細(xì)胞聚集，重者可見核心壞死及膽固醇結(jié)晶。免疫組化結(jié)果：模型組斑塊內(nèi)MMP-2表達(dá)水平較對照組顯著升高(p<0.05)；模型組斑塊內(nèi)VCAM-1表達(dá)為陽性，對照組則為陰性。RT-PCR結(jié)果：正常組兔主動脈壁僅見微量NF-κBmRNA表達(dá)，未見TNF-αmRNA表達(dá)，而在模型組動脈壁可見到大量NF-κBmRNA和TNF-αmRNA表達(dá)。 結(jié)論：模型組實驗兔主動脈VCAM-1，NF-κB，TNF-α，MMP-2