AMD3100加重apoE---小鼠動(dòng)脈粥樣硬化病變及其可能機(jī)制.pdf

1、背景:動(dòng)脈粥樣硬化(athero sclerosis,As)是以內(nèi)皮損傷或功能障礙為始動(dòng)環(huán)節(jié)的慢性炎癥反應(yīng)過(guò)程,在此過(guò)程中損傷和修復(fù)并存。內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelial progenitor cells,EPC)因其可以分化為成熟內(nèi)皮細(xì)胞而發(fā)揮著血管內(nèi)皮損傷后再內(nèi)皮化作用,且諸多研究顯示了其對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的保護(hù)作用。研究證實(shí),大量趨化因子參與了動(dòng)脈粥樣硬化的病變進(jìn)程?；|(zhì)細(xì)胞衍生因子1α(stromal cell-derived f

2、actor1 alpha,SDF-1α)與其受體CXCR4的相互作用可以動(dòng)員骨髓干細(xì)胞向內(nèi)皮損傷處歸巢并趨化炎癥細(xì)胞募集。
　　目的:觀察CXCR4阻斷劑AMD3100對(duì)apoE-/-小鼠動(dòng)脈粥樣硬化病變的影響,以探討SDF-1α/CXCR4對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的\作用及可能機(jī)制。
　　方法:36只8周齡雄性apoE-/-小鼠隨機(jī)分為三組:①普食組(正常飼料喂養(yǎng))②高脂組(高脂飼料喂養(yǎng),PBS0.1ml/2d,腹腔注射)③AMD3

3、100組(高脂飼料喂養(yǎng),AMD31002.5mg/kg/2d,腹腔注射),其中的高脂飼料為正常飼料加0.25％膽固醇和15%豬油。12周后,所有小鼠經(jīng)20%烏拉坦0.2～0.3 ml腹腔麻醉,摘除眼球取血,ELISA法測(cè)血清SDF-1α水平,采用氧化酶法測(cè)定apoE-/-小鼠血清中三酰甘油(triglyceride,TG)、總膽固醇(total cholesterol,TC)、高密度脂蛋白膽固醇(high density lipopro

4、tein cholesterol,HDL-C)和低密度脂蛋白膽固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)含量。蘇丹 IV染色檢測(cè)主動(dòng)脈內(nèi)膜面動(dòng)脈粥樣硬化病變。石蠟切片HE染色檢測(cè) apoE-/-小鼠主動(dòng)脈根部橫切面動(dòng)脈粥樣硬化病變。冰凍切片油紅O染色檢測(cè)主動(dòng)脈竇脂質(zhì)沉積。免疫組織化學(xué)檢測(cè)小鼠胸主動(dòng)脈CXCR4和炎癥因子TNF-α和NF-κB表達(dá)。RT-PCR和Western Blot分別檢

5、測(cè)小鼠動(dòng)脈組織TNF-α、動(dòng)脈和心臟組織NF-κB mRNA和蛋白表達(dá)。差速貼壁法結(jié)合微孔法分離培養(yǎng)小鼠骨髓細(xì)胞,免疫熒光鑒定CD133/VEGFR-2雙陽(yáng)性細(xì)胞為EPC; MTT比色法、Transwell遷移法、黏附實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)細(xì)胞的增殖、遷移和黏附能力;通過(guò)計(jì)數(shù)典型EPC克隆形成單位和觀察次級(jí)集落單位的大小及細(xì)胞密度檢測(cè)各組內(nèi)皮祖細(xì)胞的克隆形成能力,RT-PCR和Western Blot檢測(cè)EPC上CXCR4 mRNA和蛋白表達(dá)。<

6、br>　　結(jié)果: AMD3100組小鼠主動(dòng)脈內(nèi)膜面和主動(dòng)脈根部橫截面的動(dòng)脈粥樣硬化病變均較高脂組嚴(yán)重,免疫組化和Western Blot法發(fā)現(xiàn)AMD3100組小鼠胸腹主動(dòng)脈炎癥因子TNF-α、NF-κB的蛋白表達(dá)也增高。血脂檢測(cè)發(fā)現(xiàn)AMD3100處理組 apoE-/-小鼠血清 TG、TC、HDL–C和LDL-C含量與高脂組均無(wú)顯著性差異。AMD3100組小鼠外周血 SDF-1α水平和動(dòng)脈壁 CXCR4表達(dá)低于高脂組。AMD3100組小鼠

7、骨髓源性 EPC的增殖、遷移、黏附及克隆形成能力均下降;AMD3100降低了apoE-/-小鼠骨髓EPC上CXCR4mRNA和蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)論:
　?、?CXCR4阻斷劑AMD3100加重apoE-/-小鼠動(dòng)脈粥樣硬化病變;
　?、?CXCR4阻斷劑AMD3100上調(diào)炎癥因子TNF-α和NF-κB表達(dá),減少動(dòng)脈壁CXCR4表達(dá);
　?、?CXCR4阻斷劑AMD3100抑制apoE-/-小鼠骨髓源性內(nèi)皮祖細(xì)