Salusins對(duì)Apoe---小鼠動(dòng)脈粥樣硬化形成及血管炎癥反應(yīng)的影響.pdf

1、文章主要從以下幾方面進(jìn)行了論述。
　　第一部分Salusins對(duì)ApoE-/-小鼠動(dòng)脈粥樣硬化形成的影響。
　　目的：探討心血管活性肽salusin-α和-β對(duì)ApoE-/-小鼠動(dòng)脈粥樣硬化(AS)形成的影響。
　　方法：將21只六周齡SPF級(jí)健康雄性ApoE-/-小鼠（與C57BL/6J小鼠具有相同的遺傳背景）隨機(jī)分為三組:模型組、salusin-α組、salusin-β組，另取7只六周齡雄性C57BL/6J野生型小

2、鼠作為正常對(duì)照組，均喂以高脂飼料（含有0.15％的膽固醇和21％的脂肪）促進(jìn)AS的形成。在salusin-α組和salusin-β組小鼠皮下分別植入載有salusin-α和-β的滲透性微量泵，按照0.6 nmol/kg/h的劑量給藥，模型組和正常對(duì)照組則給予相應(yīng)體積的生理鹽水，每?jī)芍芨鼡Q一次新泵，8周后處死各組小鼠，檢測(cè)小鼠血漿中總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)及高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)含量;

3、采用HE染色和油紅O染色分析各組小鼠主動(dòng)脈AS斑塊病變情況。
　　結(jié)果：1.Salusins對(duì)小鼠血漿中血脂水平的影響模型組小鼠血漿中TG、TC、LDL-C和HDL-C的濃度分別為(1.68±0.27) mmol/L，(20.96±1.78) mmol/L，(18.88±1.57) mmol/L，（0.70±0.11）mmol/L，與正常對(duì)照組相比，除HDL-C水平明顯降低外，其余血脂水平均顯著升高(P＜0.01); salusi

4、n-α組小鼠血漿中TG、TC、LDL-C和HDL-C的濃度分別為（1.60±0.26）mmol/L，(19.45±0.94) mmol/L，(16.76±0.87) mmol/L，（0.89±0.14）mmol/L，與模型組相比HDL-C的含量明顯升高(P＜0.05)，其它血脂水平雖然有所改善，但變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;salusin-β組小鼠血清中TG、TC、LDL-C和HDL-C的濃度分別為（1.46±0.18）mmol/L，(21.88

5、±1.78) mmol/L，(19.66±1.66) mmol/L和（0.62±0.15）mmol/L，與模型組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2.Salusins對(duì)小鼠血管壁脂質(zhì)沉積的影響油紅O染色結(jié)果表明，正常對(duì)照組幾乎沒(méi)有出現(xiàn)脂質(zhì)沉積，模型組的斑塊面積/內(nèi)膜面積比值明顯高于正常對(duì)照組(＜0.01);注射salusin-β可使病變處脂質(zhì)沉積更為嚴(yán)重，斑塊面積/內(nèi)膜面積比值明顯高于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);相反，注射sa

6、lusin-α后斑塊面積/內(nèi)膜面積比值較模型組有明顯的減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　3.Salusins對(duì)小鼠血管壁病理改變的影響HE染色結(jié)果顯示，正常對(duì)照組小鼠的內(nèi)膜表面光滑平整，無(wú)增厚;ApoE-/-小鼠血管壁均形成明顯的AS斑塊，內(nèi)膜明顯增厚，有纖維帽形成，斑塊中含少量膽固醇結(jié)晶;salusin-α可使病變程度減輕，部分出現(xiàn)少量纖維斑塊和內(nèi)膜增厚;而與模型組比較，salusin-β組小鼠AS斑塊體積增大，內(nèi)膜

7、增厚更明顯，斑塊內(nèi)可見(jiàn)大量膽固醇結(jié)晶。
　　結(jié)論：在本部分實(shí)驗(yàn)條件下得出以下結(jié)論:
　　1.給予外源性的salusin-β對(duì)ApoE-/-小鼠血脂水平無(wú)顯著性的影響，而salusin-α則可以升高ApoE-/-小鼠血漿HDL-C水平。
　　2.外源性的salusin-α可明顯抑制ApoE-/-小鼠主動(dòng)脈AS的形成，而salusin-β則可以明顯加重ApoE-/-小鼠主動(dòng)脈AS病變情況。
　　第二部分Salusin

8、s對(duì)ApoE-/-小鼠血管炎癥反應(yīng)的影響。
　　目的：分別探討心血管活性肽salusin-α和-β對(duì)ApoE-/-小鼠血管炎癥反應(yīng)的影響。
　　方法：21只六周齡雄性ApoE-/-小鼠（與C57BL/6J小鼠具有相同的遺傳背景）以及7只六周齡C57BL/6J正常對(duì)照組小鼠均給予高脂飲食造模8周以促成動(dòng)脈粥樣斑塊的形成。8周后處死各實(shí)驗(yàn)組小鼠。采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA法)檢測(cè)各組小鼠血漿中IL-6和TNF-α的水平;采用

9、實(shí)時(shí)熒光定量PCR(real-time PCR)
　　檢測(cè)各組小鼠主動(dòng)脈中MCP-1、VCAM-1的mRNA表達(dá);采用免疫組化染色技術(shù)檢測(cè)小鼠主動(dòng)脈中MCP-1、VCAM-1、NF-κB p65的蛋白表達(dá);采用western-blot方法檢測(cè)小鼠主動(dòng)脈中VCAM-1、IκBα的蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果：1.Salusins對(duì)小鼠血漿中IL-6、TNF-α水平的影響ELISA結(jié)果顯示，模型組小鼠血漿中IL-6、TNF-α的水平

10、明顯高于正常對(duì)照組(P＜0.01);與模型組相比，salusin-α明顯降低ApoE-/-小鼠血漿中IL-6、TNF-α的水平(＜0.01);相反，持續(xù)給予salusin-β可使ApoE-/-小鼠血漿中IL-6、TNF-α的水平顯著增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。
　　2.Salusins對(duì)小鼠主動(dòng)脈中VCAM-1和MCP-1 mRNA表達(dá)的影響Real-timePCR結(jié)果顯示:與正常對(duì)照組相比，VCAM-1和MCP-1

11、的mRNA表達(dá)在模型組小鼠主動(dòng)脈中均明顯增加（P＜0.01）;與模型組相比，salusin-α對(duì)小鼠主動(dòng)脈中VCAM-1和MCP-1的mRNA表達(dá)幾乎無(wú)影響，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;而連續(xù)注射salusin-β后，ApoE-/-小鼠主動(dòng)脈中VCAM-1和MCP-1的mRNA表達(dá)均顯著增加（P＜0.01）。
　　3.Salusins對(duì)小鼠主動(dòng)脈中VCAM-1和MCP-1蛋白表達(dá)的影響免疫組化染色結(jié)果顯示:正常對(duì)照組小鼠血管壁未見(jiàn)明顯的VC

12、AM-1和MCP-1的陽(yáng)性染色，而模型組小鼠血管壁可見(jiàn)明顯的VCAM-1和MCP-1的陽(yáng)性表達(dá)，與正常對(duì)照組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01); salusin-α組與模型組比較，主動(dòng)脈中VCAM-1和MCP-1的陽(yáng)性染色雖略有減弱，但均無(wú)顯著性差異;相反，salusin-β組小鼠主動(dòng)脈中VCAM-1和MCP-1的陽(yáng)性染色明顯增強(qiáng)(P＜0.01，P＜0.05)。Western-blot結(jié)果同樣證實(shí)，模型組小鼠主動(dòng)脈中VCAM-1的蛋

13、白表達(dá)明顯高于正常對(duì)照組(P＜0.01);與模型組相比，salusin-β能明顯增強(qiáng)ApoE-/-小鼠主動(dòng)脈中VCAM-1的蛋白表達(dá)(P＜0.01);而salusin-α對(duì)ApoE-/-小鼠主動(dòng)脈中VCAM-1的蛋白表達(dá)幾乎無(wú)影響。
　　4.Salusins對(duì)小鼠主動(dòng)脈中NF-κBp65蛋白表達(dá)的影響NF-κ Bp65的免疫組化染色結(jié)果表明:正常對(duì)照組小鼠血管壁細(xì)胞幾乎無(wú)NF-κ Bp65的激活;在模型組小鼠血管壁部分內(nèi)皮細(xì)胞及平

14、滑肌細(xì)胞中有明顯的細(xì)胞核棕黃色陽(yáng)性染色，與正常對(duì)照組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）;注射salusin-β的小鼠血管壁NF-κBp65陽(yáng)性細(xì)胞染色率顯著高于模型組(P＜0.05);而salusin-α組NF-κ Bp65陽(yáng)性細(xì)胞染色率與模型組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　5.Salusins對(duì)小鼠主動(dòng)脈中IκBα蛋白表達(dá)的影響IκBα的western-blot結(jié)果顯示:模型組小鼠主動(dòng)脈中IκBα的蛋白表達(dá)明顯低于正常對(duì)照組(P

15、＜0.01); salusin-α組小鼠主動(dòng)脈中IκBα的蛋白表達(dá)與模型組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;而連續(xù)注射salusin-β后小鼠主動(dòng)脈中IκBα的蛋白表達(dá)明顯低于模型組（P＜0.05）。
　　結(jié)論：在本部分實(shí)驗(yàn)條件下得出以下結(jié)論:
　　1.與正常小鼠相比，AS模型小鼠血管壁炎癥因子的表達(dá)顯著增加。
　　2.Salusin-α可降低ApoE-/-小鼠血漿IL-6、TNF-α的水平，但對(duì)血管壁其他炎癥因子的表達(dá)無(wú)顯著影響，說(shuō)