家蠅蛆粉對(duì)ApoE---小鼠抗動(dòng)脈粥樣硬化作用及其機(jī)制的探討.pdf

1、動(dòng)脈粥樣硬化(atherosderosis，AS)指動(dòng)脈及其分支的脈管壁內(nèi)膜及內(nèi)膜下的脂質(zhì)沉著，同時(shí)伴有中層平滑肌細(xì)胞移行至內(nèi)膜下增殖，使內(nèi)膜增厚，形成黃色或灰黃色狀如粥樣物質(zhì)的斑塊。動(dòng)脈粥樣硬化可導(dǎo)致心腦血管疾病，嚴(yán)重危害人類的健康。我國(guó)動(dòng)脈粥樣硬化及其引發(fā)的心腦血管疾病發(fā)病率逐年上升，且發(fā)病呈“年輕化”的趨勢(shì)。動(dòng)脈粥樣硬化已為醫(yī)學(xué)界所重視，但是其治療的藥物療效有限且需要長(zhǎng)期使用。
　　 目前，臨床上廣泛使用的抗動(dòng)脈粥樣硬化藥

2、物如辛伐他汀、普羅布考等均存在不容忽視的毒副作用，其長(zhǎng)期療效在臨床上也備受質(zhì)疑。因此，尋找天然、無(wú)毒、有效的抗動(dòng)脈粥樣硬化藥物是臨床藥學(xué)的研究熱點(diǎn)之一。
　　 家蠅蛆（Housefly maggot, HM）含有多種活性肽，已被證實(shí)有降低膽固醇，提高機(jī)體免疫能力，降血壓等作用。從上個(gè)世紀(jì)80年代至今，家蠅抗菌肽、甲殼素等生物活性物質(zhì)的研究一直是生命科學(xué)研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)之一。我們的前期結(jié)果顯示，家蠅蛆粉能夠有效降低高脂血癥SD大鼠的

3、血脂水平，并對(duì)SD大鼠動(dòng)脈粥樣硬化也有一定的預(yù)防作用。為進(jìn)一步探討家蠅蛆粉的抗動(dòng)脈粥樣硬化作用，本實(shí)驗(yàn)以國(guó)際公認(rèn)的動(dòng)脈粥樣硬化模型——ApoE基因敲除（ApoE-/-）小鼠為研究對(duì)象，從降血脂、抗氧化等方面來探討家蠅蛆粉的抗動(dòng)脈粥樣硬化機(jī)制。
　　 研究方法：
　　 1、ApoE基因敲除（ApoE-/-）小鼠分組和用藥處理：繁殖鑒定ApoE-/-小鼠，隨機(jī)分組，分為模型對(duì)照組、家蠅蛆粉處理（8g/kg/day）組、辛伐他

4、汀處理（50mg/kg/day）組；ApoE-/-小鼠具有C57BL/6J小鼠遺傳背景，故設(shè)一組C57BL/6J小鼠以做正?？瞻讓?duì)照。為探討家蠅蛆粉的抗氧化機(jī)制，以臨床常用抗氧化類治療動(dòng)脈粥樣硬化藥物普羅布考（30mg/kg/day）設(shè)一處理組以做陽(yáng)性參照。各組小鼠予灌胃用藥處理，模型對(duì)照組和空白對(duì)照組則予灌胃生理鹽水處理。
　　 2、家蠅蛆粉對(duì)ApoE-/-小鼠動(dòng)脈粥樣硬化的預(yù)防及治療效果探討：每組小鼠用藥處理8周后，以辛伐他

5、汀處理組做陽(yáng)性參照，分別檢測(cè)其主動(dòng)脈和腹主動(dòng)脈油紅O 染色斑塊百分比，心臟三尖瓣部位病理切片油紅-O 染色斑塊面積，主動(dòng)脈橫切面病理切片Elastin Van Gieson （EVG）染色觀察彈性纖維增生情況等，并對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　 3、家蠅蛆粉抗動(dòng)脈粥樣硬化的降血脂機(jī)制探討：每14天檢測(cè)各組ApoE-/-小鼠的膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）水平，以辛伐他汀處理組做陽(yáng)性參照，觀察家蠅蛆粉的降血脂效果。同時(shí)測(cè)定小鼠膽汁流

6、量和膽汁酸含量，檢測(cè)HMG-CoA 還原酶活性，以探討家蠅蛆粉抗動(dòng)脈粥樣硬化的降血脂機(jī)制。
　　 4、家蠅蛆粉抗動(dòng)脈粥樣硬化的抗氧化機(jī)制探討：每14天檢測(cè)各組ApoE-/-小鼠的高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）水平，以普羅布考處理組做陽(yáng)性參照，觀察家蠅蛆粉的抗氧化效果。同時(shí)于用藥8周后檢測(cè)小鼠血丙二醛（malonyldialdehyde，MDA）和氧化低密度脂蛋白（Ox-LDL）水平，并檢測(cè)各組小鼠心臟三尖瓣粥樣斑

7、塊中巨噬細(xì)胞特異表達(dá)蛋白MAC-3，了解巨噬細(xì)胞分布情況，以探討家蠅蛆粉抗動(dòng)脈粥樣硬化的抗氧化機(jī)制及其與巨噬細(xì)胞遷移的相關(guān)性。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　 1.家蠅蛆粉對(duì)ApoE-/-小鼠動(dòng)脈粥樣硬化的預(yù)防及治療效果探討：預(yù)防試驗(yàn)中，模型對(duì)照組和家蠅蛆粉預(yù)防組間的主動(dòng)脈和腹主動(dòng)脈部位動(dòng)脈粥樣硬化斑塊面積百分比平均值存在非常顯著差異（21.34％，13.58％，P<0.01），兩組間的心臟三尖瓣部位動(dòng)脈粥樣硬化斑塊面積平均值同

8、樣存在非常顯著差異（216272.27±28649μm2，131998.17±24165μm2，P<0.01）。而在治療試驗(yàn)中，模型對(duì)照組和家蠅蛆粉治療組間的主動(dòng)脈和腹主動(dòng)脈部位動(dòng)脈粥樣硬化斑塊面積百分比平均值也存在非常顯著差異（22.53％，15.91％，P<0.01），兩組間的心臟三尖瓣部位動(dòng)脈粥樣硬化斑塊面積平均值同樣存在顯著差異（283423.83±34649 μm2，236272.2347±36749μm2，P<0.05）。另

9、外，對(duì)ApoE-/-小鼠主動(dòng)脈橫切面組織病理切片進(jìn)行Elastin Van Gieson （EVG）彈性纖維特異染色結(jié)果顯示，預(yù)防和治療實(shí)驗(yàn)均同時(shí)使ApoE-/-小鼠主動(dòng)脈彈性纖維增生情況緩解明顯。
　　 2.家蠅蛆粉抗動(dòng)脈粥樣硬化的降血脂機(jī)制探討：家蠅蛆粉處理組的TC水平遠(yuǎn)低于模型對(duì)照組，存在非常顯著差異（P<0.01），接近于辛伐他汀處理組；家蠅蛆粉處理組的TG水平相對(duì)于模型對(duì)照組也有降低，存在顯著差異（P<0.05）。家蠅

10、蛆粉處理組的膽汁流量增加且優(yōu)于辛伐他汀處理組，并具有顯著差異（86.15±16.11μl/h，121.02±15.76μl/h，P<0.05），總膽汁酸（TBA）排泄量增加并具有顯著差異（3.34±0.68μmol/h，4.79±1.39μmol/h，P<0.05），HMG-CoA 還原酶的活性降低并具有顯著差異（P<0.05）。
　　 3.家蠅蛆粉抗動(dòng)脈粥樣硬化的抗氧化機(jī)制探討：與模型對(duì)照組對(duì)比，家蠅蛆粉處理組HDL水平逐步提

11、高，并在14周左右維持在較高的一個(gè)水平，存在非常顯著差異（P<0.01）；家蠅蛆粉處理組的LDL水平在用藥后得到有效控制，維持在一個(gè)較低的水平。家蠅蛆粉處理組的肝臟勻漿MDA和Ox-LDL水平與模型對(duì)照組相比存在非常顯著差異(P<0.01；P<0.005)，其中Ox-LDL的下降幅度甚至高于普羅布考組。免疫組化結(jié)果顯示家蠅蛆粉處理組粥樣斑塊中巨噬細(xì)胞數(shù)量明顯減少。
　　 結(jié)論：
　　 1.家蠅蛆粉對(duì)ApoE-/-小鼠動(dòng)脈

12、粥樣硬化有一定的緩解作用。其主要表現(xiàn)為家蠅蛆粉分別減少了ApoE-/-小鼠主動(dòng)脈和腹主動(dòng)脈部位以及心臟三尖瓣部位動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的面積；同時(shí)，使ApoE-/-小鼠主動(dòng)脈彈性纖維增生的情況得到明顯緩解。
　　 2.家蠅蛆粉的抗動(dòng)脈粥樣硬化作用涉及血脂的下降，其機(jī)制和膽汁流量增加、總膽汁酸（TBA）合成促進(jìn)、機(jī)體膽固醇排出加速及膽固醇合成系統(tǒng)限速酶（HMC-CoA）
　　 的抑制相關(guān)。
　　 3.家蠅蛆粉的抗動(dòng)脈粥樣