家蠅蛆粉抗高血脂與動(dòng)脈粥樣硬化的研究.pdf

1、隨著經(jīng)濟(jì)發(fā)展和人民生活水平的不斷提高，心腦血管疾病已成為危害人們健康的主要疾病，居各類死亡原因之首。心腦血管疾病的病理基礎(chǔ)是動(dòng)脈粥樣硬化，而脂類代謝與動(dòng)脈粥樣硬化密切相關(guān)。臨床使用的一些化學(xué)合成藥物在治療高血脂與動(dòng)脈粥樣硬化過程中出現(xiàn)了不容忽視的毒副作用。近年來昆蟲藥物的研究受到重視，本文就家蠅蛆粉抗高血脂與動(dòng)脈粥樣硬化作用及可能的機(jī)制進(jìn)行初步探討。 研究目的： 1.確定有效的家蠅幼蟲批量誘導(dǎo)的物理方法，富集小分子蛋白。

2、 2.優(yōu)化蠅蛆蛋白粉與殼聚糖的制備工藝，初步探討小鼠對(duì)家蠅蛆粉的最大耐受量。 3.探討蠅蛆蛋白粉與殼聚糖抗高血脂作用的最佳配伍及可能的機(jī)制。 4.探討蠅蛆蛋白粉與殼聚糖抗動(dòng)脈粥樣硬化作用的最佳配伍及可能的機(jī)制，初步探討家蠅幼蟲提取物對(duì)泡沫化巨噬細(xì)胞膽固醇外流的影響。 研究方法： 1.家蠅及幼蟲的飼養(yǎng)與批量誘導(dǎo)。待3齡幼蟲化蛹羽化后飼以葡萄糖和水，3天后在籠中放入集卵器收集蠅卵，幼蟲孵出后飼以奶粉、

3、麥麩、酵母粉混合的飼料，待其發(fā)育到3齡時(shí)進(jìn)行收集。以冰冷刺激、熱刺激、冷熱刺激、紫外照射、超聲刺激等方法對(duì)幼蟲進(jìn)行批量誘導(dǎo)，測定各組蛋白含量并進(jìn)行電泳分析，確定家蠅幼蟲最佳批量物理誘導(dǎo)條件。 2.蠅蛆蛋白粉與殼聚糖的制備及最大耐受量實(shí)驗(yàn)。誘導(dǎo)后的3齡幼蟲勻漿處理，濾液采用冷凍干燥方式來制備蠅蛆蛋白粉，濾渣采用酸堿法制備殼聚糖。將10倍實(shí)驗(yàn)劑量蠅蛆粉與普通飼料混合后制成新的飼料投放給小鼠，觀察其對(duì)小鼠生存狀態(tài)的影響。 3.

4、家蠅蛆粉對(duì)SD大鼠高脂血癥的預(yù)防和治療。預(yù)防性實(shí)驗(yàn)：動(dòng)物分籠飼養(yǎng)一周后隨機(jī)分為9個(gè)處理組：蛋白粉低劑量組、蛋白粉高劑量組、殼聚糖組、蛋白粉:殼聚糖＝10:1組、蛋白粉:殼聚糖＝20:1組、陽性對(duì)照組、陰性對(duì)照組、模型組和正常對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后剖殺全部大鼠，計(jì)算肝臟與體重的比值。治療性實(shí)驗(yàn)：高脂溶液灌胃建立高脂血癥模型后，將模型組動(dòng)物分為3個(gè)處理組，實(shí)驗(yàn)周期為25天，后5天停藥觀察血清TC、TG、HDL、LDL指標(biāo)的反彈情況，觀察抗氧化情

5、況及肝臟病理狀態(tài)。 4.家蠅蛆粉抗動(dòng)脈粥樣硬化的研究。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：將模型組的動(dòng)物隨機(jī)分為6個(gè)處理組：蛋白粉組、殼聚糖組、蛋白粉:殼聚糖＝10:1組、蛋白粉:殼聚糖＝20:1組、陽性對(duì)照組、陰性對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后觀察血脂變化及抗炎抗氧化效果，對(duì)iNOS、eNOS的表達(dá)進(jìn)行RT-PCR鑒定，對(duì)胸主動(dòng)脈與肝臟進(jìn)行常規(guī)HE染色。家蠅幼蟲提取物對(duì)泡沫化巨噬細(xì)胞膽固醇外流的影響：高脂血癥大鼠的肝臟勻漿液建立泡沫化巨噬細(xì)胞模型，將泡沫化的巨噬細(xì)

6、胞分為5個(gè)處理組：高劑量組、中劑量組、低劑量組、陽性對(duì)照組、陰性對(duì)照組和正常對(duì)照組，油紅O染色計(jì)算各組細(xì)胞紅染的面積。 結(jié)果： 1.籠養(yǎng)方式獲取的幼蟲足以滿足實(shí)驗(yàn)要求，電泳結(jié)果顯示6.5KD以下的小分子蛋白經(jīng)過誘導(dǎo)后得到富集。各項(xiàng)指標(biāo)的組間比較結(jié)果以冷熱刺激誘導(dǎo)方式為優(yōu)。 2.冷凍干燥法制得的蛋白干粉產(chǎn)率為48.56％±5.36％，酸堿法制得的殼聚糖產(chǎn)率為56.22％±14.35％，脫乙酰度為84.52％±13.

7、56％。最大耐受量實(shí)驗(yàn)中以高于實(shí)驗(yàn)劑量10倍標(biāo)準(zhǔn)飼喂小鼠，發(fā)現(xiàn)雌雄小鼠均無死亡。 3.高血脂預(yù)防性實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)過程中各治療組均能有效的抑制TC、TG、LDL水平的升高及HDL水平的下降，減輕肝臟病理變化，其中以蛋白粉:殼聚糖＝10:1組為最優(yōu)。治療性實(shí)驗(yàn)：治療組可以有效的降低血清TC、TG、LDL水平升高HDL水平，且停藥后未出現(xiàn)反彈。SOD與MDA水平改善，肝臟的病理狀態(tài)得到改善。 4.抗動(dòng)脈粥樣硬化動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果：各治療

8、組均能有效的降低血清TC、TG、LDL，升高HDL，各治療組的肝臟指數(shù)降低。各治療組SOD活力升高，MDA水平下降，動(dòng)脈血管的病理狀態(tài)改善，其中以蛋白粉:殼聚糖＝10:1組療效為最優(yōu)。iNOSmRNA治療組表達(dá)量降低，而eNOSmRNA表達(dá)量提高。 5.家蠅幼蟲提取物對(duì)小鼠泡沫化巨噬細(xì)胞膽固醇外流影響的結(jié)果：脂質(zhì)圖像分析數(shù)據(jù)分析顯示，高、中、低劑量組細(xì)胞紅染面積均減少，高、中劑量組效果顯著。 結(jié)論： 經(jīng)冷熱刺激誘