MicroRNA-219在癲癇發(fā)病中的作用及機制研究.pdf

1、目的:通過海人酸、匹羅卡品誘導C57BL/6、ICR小鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)發(fā)作，制造人類顳葉癲癇動物模型，探討microRNA-219在癲癇發(fā)病中的功能通路及調(diào)控網(wǎng)絡的動態(tài)變化，為癲癇的診斷提供新的依據(jù)，為抗癇藥物研制提示新的作用靶點。
　　方法:用成年雄性C57BL/6、ICR小鼠為研究對象，側腦室注射海人酸(Kainicacid，KA)或腹腔注射匹羅卡品誘發(fā)小鼠癲癇發(fā)作，建立小鼠癲癇動物模型。24小時后檢測小鼠皮質(zhì)腦電圖改變并運用熒

2、光定量PCR方法檢測小鼠海馬和皮質(zhì)中microRNA-219表達變化情況，同時運用蛋白免疫印跡方法檢測小鼠海馬中CaMKⅡγ、NMDAR1蛋白表達變化情況。收集8例顳葉癲癇患者和6例對照組患者的腦脊液，運用熒光定量PCR方法檢測腦脊液中microRNA-219表達變化情況。進一步給予小鼠側腦室注射microRNA-219的特異性拮抗劑（antagomir-219）、特異性激動劑（agomir-219）、陰性對照劑.(antagomir-

3、NC、agomir-NC)以及腹腔注射NMDA受體的非競爭性拮抗劑MK-801，觀察小鼠行為學改變，同時檢測小鼠皮質(zhì)腦電圖改變及海馬中microRNA-219、CaMKⅡγ、NMDAR1表達變化情況。
　　結果:1.海人酸或匹羅卡品可誘導小鼠癲癇發(fā)作和異常腦電圖改變。癲癇組小鼠較對照組小鼠，海馬內(nèi)microRNA-219水平顯著降低（降低70％），而皮質(zhì)中microRNA-219水平變化無統(tǒng)計學意義，海馬中CaMKⅡγ、NMDAR

4、1蛋白表達水平升高。癲癇患者腦脊液中microRNA-219水平較對照組也顯著降低;2.microRNA-219的特異性拮抗劑可誘導小鼠表現(xiàn)出癲癇發(fā)作癥狀和異常腦電圖表現(xiàn)。注射microRNA-219拮抗劑后，小鼠海馬內(nèi)microRNA-219水平顯著降低，海馬中CaMKⅡγ、NMDAR1蛋白表達水平升高;3.microRNA-219的特異性激動劑可使KA誘導的癲癇小鼠癥狀明顯好轉(zhuǎn)，腦電圖皮層癇樣放電明顯受到抑制?？墒拱d癇小鼠海馬內(nèi)mi

5、croRNA-219恢復到正常水平，CaMKⅡγ、NMDAR1蛋白表達水平降低:4.NMDA受體的非競爭性拮抗劑MK-801可顯著改善microRNA-219拮抗劑所誘導小鼠癲癇發(fā)作癥狀和異常腦電圖表現(xiàn)。
　　結論:在小鼠癲癇模型海馬和癲癇患者腦脊液中，microRNA-219表達水平顯著下降，microRNA-219可作為一種早期檢測癲癇類疾病的生物標志物，microRNA-219通過調(diào)節(jié)CaMKⅡ/NMDA受體信號通路發(fā)揮著抑