臨床血液學檢驗技術血液病micm檢驗

1、血液病MICM檢驗,醫(yī)院血液內科,背景介紹,血液病是原發(fā)于造血系統(tǒng)的疾病，或影響造血系統(tǒng)伴發(fā)血液異常改變，以貧血、出血、發(fā)熱為特征的疾病。,出血性疾病,貧血癥,白細胞疾病,常見血液病,造血系統(tǒng)惡性腫瘤,,FAB分型1976,MIC分型1986,MICM分型2001,MICM分型2008,白血病的診斷分型：MICM分型發(fā)展由來,,MICM分 型 2016,1827年， 法國的Alfred Velpeau 描述

2、第一例白血病1847 年，Virchow首次提出了“白血病”這個名稱1976年，法、美、英3國7位血液學家以光鏡下的形態(tài)為主，參照細胞化學染色，制定了FAB分型標準，標志著現(xiàn)代白血病診斷與分型的開端 80年代末至90年代初，隨著免疫學、細胞遺傳學和分子生物學理論和技術的發(fā)展，出現(xiàn)了MICM（形態(tài)學、免疫學、細胞遺傳學、分子生物學）分型WHO造血和淋巴組織腫瘤分類方案（2001， 2008、2016）,FAB分型及WHO分類,FA

3、B：主要建立在形態(tài)學基礎上WHO (2001和2008、2016)骨髓或外周血原始細胞比例≥20%將一些有明確診斷及預后指導意義的細胞或分子遺傳學異常作為診斷和分型的重要標志將患者診斷之前的疾病狀態(tài)和治療措施納入考量,FAB和WHO分類方案的主要區(qū)別,急性髓細胞白血?。ˋML）和相關腫瘤 WHO分型,伴再現(xiàn)性遺傳學異常的AML伴MDS相關改變的AML 繼發(fā)于MDS或MDS/MPN伴有MDS相關細胞遺傳學異常2或3系50%

4、以上的細胞有發(fā)育異常治療相關性AML 不另作分類的AML髓細胞肉瘤Down’s綜合征相關髓系增生疾病母細胞性漿細胞樣樹突細胞腫瘤,伴再現(xiàn)性遺傳學異常的AML,AML with t(8;21)(q22;q22)RUNX1-RUNX1T1AML with inv(16)(p13.1q22) or t(16;16)CBFB-MYH11APL with t(15;17)(q22;q12)PML-RARAAML wi

5、th t(9;11)(p22;q23)MLLT3-MLLAML with t(6;9)(p23;q34)DEK-NUP214AML with inv(3)(q21q26.2) or t(3;3)RPN1-EVI1AML -M7 with t(1;22)(p13;q13)RBM15-MKL1? AML with mutated NPM1? AML with mutated CEBPA,通常AML的診斷標準，原

6、始細胞比例>20%，但如果t(8;21)、t(15;17)或inv(16)陽性，則不論原始細胞比例為多少，AML診斷成立,MICMFAB形態(tài)學診斷(Morphology)免疫學檢查(Immunology )細胞遺傳學檢查(Cytogenetics)分子遺傳學檢查(Molecular),MICM分型原則中各檢測技術簡介,形態(tài)學：外周血涂片、骨髓涂片±骨髓活檢免疫表型檢測：多參數(shù)流式細胞儀細胞遺傳學檢測常規(guī)核型

7、分析，分子核型分析FISH分子遺傳學檢測融合基因檢測（RT-PCR）：PML-RARA、AML1-ETO、CBFB-MYH11、MLL-…、BCR-ABL……基因突變：FLT3-ITD、CEBPA、NPM1、TET2、IDH1、NOTCH1、IKZF1、FBXW7……拷貝數(shù)變化（CNV）:SNP-array高通量測序技術……,病史形態(tài)學： 結構：活檢細胞學：涂片骨髓血凝塊免疫分型：流式細胞或免疫組化細胞遺傳學：

8、核型分析、FISH分子遺傳學：融合基因（RT-PCR\Q-PCR)/基因突變（測序）,,白血病MICM診斷程序及技術,白血病診斷的任務—不僅僅是FAB分類,是不是白血病？急性？慢性？系來源FAB分類預后分層治療、療效判斷MRD,病史+形態(tài),形態(tài)+免疫,形態(tài)+免疫+遺傳+分子,,,,形態(tài)+免疫+遺傳+分子,為什么需要MICM綜合診斷？,形態(tài)或病理或加細胞化學分析受觀察者個體經驗及分辨力的限制，一致率僅50-70%； 在此基

9、礎上增加免疫組化和/或FCM分析大大增加了分型的準確率，可達90%以上； 染色體、FISH及基因分析，進一步提高分型的準確率,MICM整合診斷的臨床意義,全面正確診斷與分型 評估預后 確立檢測MRD的標志，追蹤MRD 幫助建立分層、個性化的治療 定期追蹤幫助發(fā)現(xiàn)抗原丟失、克隆演變或突變 幫助確定病因或發(fā)病機制,MICM分型原則中各檢測技術簡介,細胞形態(tài)及細胞化學分析的優(yōu)缺點,優(yōu)點： 直觀：鏡下直接觀察細胞形態(tài)，對MDS

10、的診斷、一些少見的、大的惡性細胞的確定優(yōu)于流式細胞分析惡性細胞的比例更準確： 簡單快速，有顯微鏡即可完成報告缺點： 人為因素影響大 難以鑒別細胞的成熟階段，B、T等系列的惡性細胞 細胞較成熟時，難以鑒別良惡性 不能提供太多的預后信息,形態(tài)M,病理及免疫組織化學的優(yōu)缺點,標本直接固定，不容易損失信息，惡性細胞比例更客觀，對一些抽不出或少見細胞，仍可診斷。如伴骨髓纖維化、MM、淋巴瘤、轉移癌、組織細胞、巨噬細胞、樹突細胞、何杰

11、金細胞等 可以直接觀察到組織結構，容易確定惡性細胞的組織部位 診斷慢、受診斷者個人經驗及知識水平影響大 對一些組織結構無破壞、細胞形態(tài)改變不大的細胞，難以鑒定良惡性及成熟度 有些惡性細胞在液體中，難以獲取組織標本，難以判斷組織結構,形態(tài)M,流式細胞術,流式I,FCM檢測的參數(shù),,FSC: 細胞大小 SSC:細胞內顆粒多少及細胞內構造的復雜性 FL：3-10多種（熒光素耦聯(lián)的單克隆抗體）,流式I,R8：幼稚細胞群，正常骨髓中此

12、群細胞數(shù)量極低或空缺,流式I,確定系來源原理：不同系有特定的抗原表達髓系/B系/T/NK系/組織細胞和樹突狀細胞確定細胞分化階段不同發(fā)育階段細胞，其抗原表達不同預后判斷有些抗原表達和淋巴瘤/白血病預后相關治療方法選擇-治療靶向療效判斷、復發(fā)監(jiān)測診斷雙表型、混合性，M0、未分化型等特殊類型白血病髓系分亞型與FAB分亞型有一定差異,1）血液系統(tǒng)腫瘤的免疫表型分析,,流式細胞免疫分型的作用,I： immunology,免疫

13、學,M0 CD34,CD33,CD13 M1 MPO,CD34,CD33,CD13, HLA-DR M2 MPO,CD34,CD15,CD13, HLA-DR M3 MPO, CD33,CD13、CD9(HLA-DR、CD11b常陰性) M4 MPO,CD33,CD15,CD14,CD13 M5

14、 CD68,CD33,CD14,CD13,HLA-DR,CD36，CD64 M6 CD33,CD235a,CD71 M7 CD33,CD41,CD42b,CD61,急性髓系白血病免疫表型與FAB分型相關性,形態(tài)與免疫表型的符合性不足80%，不能脫離形態(tài)學單純依賴免疫表型進行白血病的診斷與分型。FAB基于形態(tài)，兩者不符以形態(tài)為主。,流式I,混合性白血病的判定,如有2

15、系或以上的特異性標志，可診斷為急性混合性白血病,流式I,MRD流式細胞學檢測,腫瘤細胞與正常起源細胞免疫表型不同跨系表達抗原表達不同步抗原表達丟失抗原表達減弱其它抗原表達初始免疫分型結果、白血病相關表型特點抗體組合越多覆蓋率越高、敏感性越高假陽性、假陰性均存在隨訪、動態(tài)觀察更有意義,流式I,監(jiān)測外周血造血干細胞的動員效果指導外周血造血干細胞的采集時機判斷造血干細胞采集量3）紅細胞分析網織紅細胞計數(shù)血細胞CD5

16、5和CD59表達水平分析紅細胞內HbF的分析紅細胞表面相關免疫球蛋白測定,2）造血干/祖細胞計數(shù)（CD34+細胞的測量）,流式細胞免疫分型的作用,流式細胞免疫分型的作用,4）血小板分析循環(huán)血小板活化分析血小板對體外不同刺激劑的反應性測定血小板免疫表型分析血小板自身抗體測定血小板免疫計數(shù)網織血小板計數(shù)抗血小板藥物治療監(jiān)測5）外周血淋巴細胞亞群計數(shù)監(jiān)測腫瘤患者的病情監(jiān)測機體的免疫狀態(tài)監(jiān)測病毒感染等等,FCM的優(yōu)缺點

17、,優(yōu)點：一次可檢測數(shù)萬至數(shù)十萬個細胞上的數(shù)十種標記，可同時檢測每個細胞的六個以上參數(shù)，敏感性高，分析全面 更容易區(qū)分良惡性，惡性細胞的系列及成熟度 可幫助確定免疫治療的靶點并監(jiān)測療效，如CD20、CD19是監(jiān)測MRD覆蓋面最廣的方法。 快速、簡便、重復性好 缺點：不能確定組織結構，一些罕見的大細胞不能分析到，一些細胞粘附性高，難以抽出。因此對HL等難以確診。判斷惡性細胞的比例不如形態(tài)準確，對M6、MDS的診斷不如形態(tài)預后

18、價值不如染色體和基因的檢測,流式I,診斷誤區(qū)舉例,原始細胞增多是診斷前體惡性血液病尤其AL的重要指標，但原始細胞應根據免疫學標志/基因/染色體證實為惡性造血前體細胞一些形態(tài)上的原始細胞可以是正常造血細胞（尤其見于兒童感染后，G-CSF,GM-CSF等刺激或化療后或移植后）,病例1 兒童B-ALL,化療3年后停藥，來我院復查，骨髓涂片8%的幼稚細胞,,,流式幼稚B淋巴細胞增生，未見異常表型,病例2 NK細胞白血病移植后40天，骨髓涂

19、片8%的幼稚細胞,,,流式: 未見表型異常細胞，CD34陽性細胞為幼稚B淋巴細胞,即染色體異常 包括染色體的結構和數(shù)量異常 根據這些特征性的異常，對惡性血液病進行診斷和分類、預后分層及指導治療。,細胞遺傳學C,血液染色體檢驗,,,,,,,,,1950,1960,1970,1980,1990,2000,2010,,確定染色體數(shù)目=46,,發(fā)現(xiàn)Ph；發(fā)現(xiàn)+21,,各種顯帶技術出現(xiàn)；發(fā)現(xiàn)多數(shù)AL患者伴有染色體異常,,FISH出現(xiàn)；闡明某

20、些染色體異常的分子學改變,,SKYCGHPCR技術FLT3-ITD(1996)c-KIT突變（1993）…………..,,芯片技術：cDNA array、SNP-array、測序技術的發(fā)展大量基因突變的發(fā)現(xiàn)：JAK2、NPM、CEBPA、PAX5、IKZF1、FLT3、RUNX1、WT1、RAS、NOTCH1…………..,,新一代高通量測序技術；各種遺傳學改變間的相互作用,白血病遺傳學研究的歷史,細胞遺傳學C,細胞遺傳學C,

21、多數(shù)AML患者有非隨機性染色體改變，包括易位、倒位、插入、缺失、擴增、等臂染色體等染色體異常在AML診斷、分型、預后評價、發(fā)病機制研究及靶向治療藥物研發(fā)方面有重要價值一些特殊的細胞遺傳學異常在WHO分型建議中已被列為特殊亞型對不同細胞遺傳學類型的血液腫瘤患者進行個體化治療可以獲得更好的療效,,AML的WHO分型,?伴再現(xiàn)性遺傳學異常的AML?伴多系發(fā)育異常的AML繼發(fā)于MDS；無MDS病史,?治療相關性AML,烷化劑相關；

22、拓撲異構酶抑制劑相關；其它,?無法分類的AML?髓細胞肉瘤,?Down’s綜合征相關AML,細胞遺傳學C,,伴再現(xiàn)性遺傳學異常的AML,AML with t(8;21)(q22;q22)AML with inv(16)(p13.1q22) or t(16;16)APL with t(15;17)(q22;q12)AML with t(9;11)(p22;q23)AML with t(6;9)(p23;q34)AML

23、 with inv(3)(q21q26.2) or t(3;3)AML -M7 with t(1;22)(p13;q13),RUNX1-RUNX1T1CBFB-MYH11PML-RARAMLLT3-MLLDEK-NUP214RPN1-EVI1RBM15-MKL1,? AML with mutated NPM1? AML with mutated CEBPA通常AML的診斷標準，原始細胞比例為20%，但如果t(8;

24、21)、t(15;17)或inv(16)陽性，則不論原始細胞比例為多少，白血病診斷成立,細胞遺傳學C,細胞遺傳學C——染色體核型分析正常核型：男：46，XY女：46，XX異常核型：46，XY，t(8;21)(q22;q22)46，XX，t(15;17)(q22;q21.1)47,XY,del(6)(q15),+11,-15,add(17)(p13),+mar[16]……,MICM分型原則中各檢測技術簡介,Chromo

25、some Banding technology,Conception,G帶 R帶,Structure and Nomenclature of chromosome,Structure,Nomenclature,Group and Karyotype for normal Chromosome,Abnormal Chromosome and

26、 diseases,約55%的AML患者可檢出克隆性染色體異常分子遺傳學技術的進展使得多數(shù)AML患者檢出基因水平的異常，如FLT3、CEBPα及NPM1基因的突變遺傳學異常對于理解AML發(fā)病機制、建立新的診斷方法、研發(fā)治療藥物或指導臨床治療有重要的價值在WHO分型建議中，一些特殊的遺傳學異常被列為診斷和分型的依據AML：50%~90%的患者細胞遺傳學可檢出異?？寺LL：大約60%～85%的患者可檢出克隆性染色體畸變,細胞遺傳

27、學C,Abnormal number,Abnormal structure,Abnormal structure of Karyotype： Congenital and Acquired,Description of Abnormal Karyotype,the mode of recording Chromosome 1p33.11 1號染色體短臂3區(qū)3帶1 亞帶1,Description of Karyotype

28、 46,XX,t(8;21)(q22;q22) [20],AML常見染色體異常,單一異常：45%≥2種異常：55%,-5/5q-；-7/7q-；＋8；-Y；+11；+13；+21; +22,3q26； del(9q)t(6;9)； t(9;22)等,,,,t(8;21)(q22;q22),見于約10%AML，形成8號染色體上的AML1-ETO 融合基因CR率高，EFS長，預后相對較好 20%-30%伴KIT突變，

29、復發(fā)率增高，預后較差≥75%伴性染色體丟失及del(9q)等附加異常，伴性染色體丟失不影響預后，伴del(9q)提示預后不良,AML-M2 t(8;21)(q22;q22),9q-,-Y,t(8;21)(q22;q22)模式圖,Common abnormity of AML chromosome,AML-M3 +8, t(15;17),AML-M3 t(11;17),?ATRA敏感 ?ATRA耐藥?ATRA相對耐藥

30、 ? 對ATRA敏感性未定,CML t(9;22)(q34;q11),inv(16)(p13;q22)/t(16;16)(p13;q22),見于約5%AML、20%AML-M4及100%AML-M4Eo遺傳學特點：因16號染色體較小及帶型的限制，常規(guī)核型分析容易漏診有典型形態(tài)學改變及常見繼發(fā)性異常的患者須行FISH或PCR檢測CBFβ/MYH11融合基因常伴繼發(fā)性異常：+8，+21，+22約30%患者亦存在KIT突變，復發(fā)率

31、增高、預后欠佳 化療敏感，預后相對好，易發(fā)生CNSL,AML-M4Eo 骨髓象,AML-M4Eo +8,inv(16),FISH檢測inv(16),inv(16)模式圖,一些染色體有診斷價值: 如重現(xiàn)性染色體異常，如t(8;21)，inv(16)、t（16；16）、 t(15;17)（q22;q12），t(5;14)(q31;q32) ，t(3;3),t(4;11)可直接診斷急性白血?。?一些染色體和/或基因有輔助診斷價值，如5q3

32、1、CEP7、7q31、CEP8、20q、CEPY、P53 高度疑似MDS等； 有-7、5q-、 t(3;3)、t(4;11)、t(9;22)、復雜染色體等的急性白血病預后不好,染色體的診斷價值,細胞遺傳學C,有絲分裂相少或缺如染色體質量低劣，顯帶不佳染色體異常復雜如果惡性細胞不分裂，其結果是假陰性由于分析的細胞少，有部分白血病患者無染色體異 常，監(jiān)測殘留白血病不敏感,白血病染色體分析存在的問題：,細胞遺傳學C,熒光原

33、位雜交（FISH）,利用已知核酸序列作為探針，以熒光素直接標記后與靶DNA進行雜交，最后在熒光顯微鏡下觀察雜交信號，從而對標本中待測核酸進行定性、定位和定量分析,細胞遺傳學C,熒光原位雜交 (FISH),生命科學中的“釣魚” 技術原理：通過熒光標記的DNA探針與細胞核內的DNA靶序列雜交 目的：獲得細胞內多條染色體或多種基因狀態(tài)的信息,熒光原位雜交（Fluorescence in situ hybridization, FISH

34、）,細胞遺傳學C,細胞遺傳學C——熒光原位雜交（FISH）探針類型雙色單融合（Dual Color, Single Fusion）雙色雙融合（Dual Color, Dual Fusion）雙色分離（Dual Color, Break Apart）額外信號（Extra Signal）建議與染色體核型分析同時送檢,細胞遺傳學C,雙色單融合示意圖,細胞遺傳學C,細胞遺傳學C,細胞遺傳學C,,,BCR/ABL雙色雙融合探針,細胞

35、遺傳學C,BCR/ABL額外信號探針,Role of Sex Chromosome in ALLO-BMT (異基因骨髓移植),細胞遺傳學C,有獨立的診斷及預后價值 可以檢測出顯微鏡下人眼難以分辨的染色體異常 診斷時間比染色體短 與染色體分析比較，對診斷人員的經驗依賴程度低 對不分裂的細胞也可以分析，分析的細胞數(shù)量比染色體多，更能反映正常和惡性細胞的比例，監(jiān)測殘留白血病比染色體敏感 可以對既往的骨髓片回顧分析，進一步明確或排除

36、診斷 探針昂貴，每次只能分析1-2種異常，只能分析已知的染色體或基因異常,FISH的優(yōu)缺點,細胞遺傳學C,,FISH檢測可以彌補染色體不足，染色體檢測為陰性，F(xiàn)ISH可能為陽性。,細胞遺傳學C,1）染色體是獨立的預后指標并有助與治療方案的選擇,細胞遺傳學C,2）鑒別白血病微小殘留病灶 (MRL),白血病化療或骨髓移植后達到完全緩解體內殘存微量白血病細胞106-108檢測到原已消失的克隆性染色體異常和(或)新的克隆性染色體

37、異常時，往往預示疾病將復發(fā),3) 在骨髓增生異常綜合征(MDS)中的應用,4) 在淋巴瘤中的應用,5）在其他血液病中的應用真性紅細胞增多癥（PV）常見的染色體異常有del(2v)(q11)，+8和+9，可見于PV病程的始末。原發(fā)性骨髓纖維化常見的染色體異常為-7，-9，+8，+2或lq、13q等結構異常。在多發(fā)性骨髓瘤（MM)中的應用,The role of chromosome in Disease Monitoring,,,,

38、,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,2×Ph，+8，i（17q）,,Abnormal chromosome recurrence,CML in blastic phase:,6）新的異常染色體的出現(xiàn)常提示復發(fā),有獨立的診斷及預后價值 可以檢測出染色體或FISH不能檢測出的異常，聯(lián)合染色體和 FISH，增加了

39、對疾病預后的判斷能力。 診斷時間比染色體及FISH短 與染色體及FISH分析比較，對檢測人員的經驗依賴程度低 是最敏感的監(jiān)測殘留白血病的指標 對試驗設計、試驗質控要求高 對無基因異常的疾病難以診斷 疾病是復雜的，僅有基因異常未必完全決定預后,基因檢測的優(yōu)缺點,分子生物學M,Dohner, H. et al. Blood 2010;115:453-474,在AML 中, 基因突變與細胞遺傳學異常一樣普遍,AML基因突變,分子生

40、物學M,分子生物學M,分子生物學M,分子生物學M,分子生物學M,分子生物學M,分子生物學M——融合基因BCR/ABL：t(9;22)(q34;q11) PML/RARα：t(15;17)(q22;q21) AML1/ETO：t(8;21)(q22;q22) TEL/AML1：t(12;21)(p13;q22) E2A/PBX1：t(1;19)(q23;p13)……,分子生物學M,分子生物學M,分子生物學M,分子生物學M,分子

41、生物學M,分子生物學M,分子生物學M,分子生物學M,血液病分子診斷的意義,分子生物學M,,31種白血病融合基因(122種變異體) 篩查,分子生物學M,,,,,分子生物學M,分子生物學M,分子生物學M,分子生物學M,分子生物學M,分子生物學M,分子生物學M,分子生物學M,分子生物學M,分子生物學M,分子生物學M,分子生物學M,分子生物學M,分子生物學M,分子生物學M,分子生物學M,分子生物學M,急髓相關突變檢測,,CEBPA基因位于19

42、q13.11，CCAAT盒/增強子結合蛋白，粒細胞分化過程中起重要作用，預后良好c-KIT基因位于4q11-21，t(8;21)和inv(16)伴c-KIT突變在AML預后危險分級中由“低危”升級為“中?！盢-Ras為Ras基因家族成員之一，見于10%左右的M4、M5、M6，該突變預后意義尚不明FLT3-TKD，F(xiàn)ms樣酪氨酸激酶3-TK區(qū)域點突變，13q12，預后不良,分子生物學M,AML患者常見基因突變和異常表達的預后意義,分

43、子生物學M,骨髓增殖性腫瘤,分子生物學M,骨髓增生異常綜合征,NCCN提及的MDS分子檢測項目TET2突變，見于20%MDS，預后較好ASXL1突變，見于15%MDS，預后較差RUNX1突變、EZH2突變、ETV6突變，預后較差CBL突變、IDH2突變、U2AF1/U2AF35突變、SF3B1突變SRSF2突變、ZRSR2突變，預后較差，增加白血病轉化率,分子生物學M,分子生物學M,分子生物學M,MRD主要檢測方法比較,血液腫

44、瘤初診檢測方案建議,MICM整合報告,AL——系別不清形態(tài)學流式細胞術免疫分型骨髓染色體核型分析分子生物學——白血病31種常見融合基因通篩,血液腫瘤初診檢測方案建議-AL,25個以上抗原，包括粒系、單核系、T系、B系、非系列特異性、干細胞（原始細胞）相關以及其他細胞等各種標志；除可以進行系別鑒定、亞型判斷外，還可進行一定的預后評估。,可以宏觀、全面地檢查細胞內所有染色體的各種異常，但對于一些微小異?；螂[匿性易位以及低含量的異常難

45、以查出。此外，由于標本本身等各種原因的影響，會有一定比例的無分裂相出現(xiàn)。建議必要時配合行FISH檢測。,診斷相關類：AML1/ETO：多見于M2，少見于M4和M1；M2b中最多RARα相關融合基因：M3PML/RARαPLZF/RARαNPM/RARαCBFβ/MYH11：M4Eo,用藥相關類：BCR/ABL：格列衛(wèi)PML/RARα：全反式維甲酸（ATRA）NPM/RARα：全反式維甲酸（ATRA）AML1/ET

46、O：大劑量的阿糖胞苷CBFβ/MYH11：大劑量的阿糖胞苷,ALL——T、B等不清骨髓形態(tài)學流式細胞術免疫分型細胞遺傳學檢測基因診斷——急淋15種常見融合基因篩查或者融合基因BCR/ABL、E2A/PBX1、TEL/AML1、MLL/AF4定量檢測,血液腫瘤初診檢測方案建議-ALL,流式細胞術免疫分型：T系：CD1a、CD2、CD3、CD4、CD5、 CD7、CD8、cCD3、TCRαβ、TCRγδ等B系：CD1

47、0、CD19、CD20、CD22、cIgM、cCD79a等NK系：CD16、CD56、CD57等,ALL-FISH套系：t(9;22)：預后極差11q23重排：預后差t(12;21)：預后好+4：預后好+10：預后好,ALL融合基因（建議查定量，但個別基因未開展定量檢測）：BCR/ABL：預后極差E2A/PBX1：常見于B-ALL，預后不良TEL/AML1：預后較好MLL/AF4：預后不良1p32染色體內微缺失SI

48、L/TAL1：常見于T-ALL,微小殘留病灶指的是疾病集中的部位或是綜合病癥、感染的主要部位。血液腫瘤微小殘留病灶是指血液腫瘤治療達到完全緩解后，用常規(guī)的形態(tài)學檢測方法不能檢測到明顯的腫瘤病灶，而此時體內仍存在的少量腫瘤細胞。微小殘留病灶是腫瘤復發(fā)的直接原因。因此，定期進行微小殘留病灶的檢測，對于監(jiān)測療效、早期發(fā)現(xiàn)復發(fā)傾向、及時干預、防止復發(fā)等方面有很重要的意義。,血液腫瘤治療后殘留檢測建議,骨髓形態(tài)學流式細胞術微小殘留病灶檢測（請

49、在申請單上注明亞型，最好附初診免疫分型報告；CMPD除外）查染色體核型分析或進行特異性FISH檢測查特異性融合基因/基因突變定量、WT1基因定量等此外，還應進行耐藥相關檢測,血液腫瘤治療后殘留檢測建議,流式細胞術檢測微小殘留病灶依據為是否違背細胞正常分化模式：表面抗原系列的變異；表面抗原表達不同步；表面抗原表達的缺失；表面抗原強度的異常。,惡性血液的診斷、分型及預后免疫球蛋白重鏈基因和T細胞受體基因重排的檢測遺傳性血液

50、的診斷HLA基因多態(tài)性檢測腫瘤細胞多藥耐藥基因的檢測基因治療,血液分子生物學檢驗技術的臨床應用及評價,舉例：患者，男，45歲，體檢發(fā)現(xiàn)白細胞，高入院。血常規(guī)：WBC90×10^9/L,HB80g/L,plt90×10^9/L，幼稚細胞82%。有核紅細胞3個/100個WBC.骨髓像：M5。細胞化學染色：POX陽性，a-NAE、aNBE陽性，且被氟化鈉抑制。免疫分型：考慮急性髓系白血病。表達CD13、34