裳卷蛾變形孢蟲(chóng)vairimorphaceracessp.nov.ssurrna核心序列的克隆與分析

1、西南大學(xué)碩士學(xué)位論文裳卷蛾變形孢蟲(chóng)（Vairimorpha ceraces sp.nov.）SSUrRNA核心序列的克隆與分析姓名：馬露蕓申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：特種經(jīng)濟(jì)動(dòng)物飼養(yǎng)指導(dǎo)教師：萬(wàn)永繼20080401西南大學(xué)碩士學(xué)位論文( 2 ) 利用微孢子蟲(chóng)S s U r R N A 基岡共有的保守序列設(shè)計(jì)了裳卷蛾變形孢蟲(chóng)s s u r 】卟『A 核心序列的引物，經(jīng)過(guò)P C R 擴(kuò)增得到一條長(zhǎng)度約為1 2 0 0 b p 的目的條帶。( 3

2、 ) 采用T - A 克隆法對(duì)裳卷蛾變形孢蟲(chóng)S S I 『r R N A 核心序列進(jìn)行了克隆，對(duì)陽(yáng)性克隆進(jìn)行了雙酶切鑒定和P C R 檢驗(yàn)。通過(guò)測(cè)序，去除上下游引物，得到裳卷蛾變形孢蟲(chóng)的S S I 『r ．R N A 核心序列共1 2 2 8 b p ，具有4 3 種常見(jiàn)酶的1 1 9 個(gè)酶切位點(diǎn)。其G C 含量為3 4 ．6 9 ％，豁D N A 分子量是3 7 ．O l l ①，裳卷蛾變形孢蟲(chóng)S S I 『r R N A 核心序列在

3、G c n B a n l 【中的登錄號(hào)為g i l 6 1 1 3 7 6 1 8 I E U 2 6 7 7 9 6 。2 裳卷蛾變形孢蟲(chóng)( 砌鰣m D 腳口∞僦囂s p ．n o v ．) s 雙『I 鼠N A 核心序列的相似性分析通過(guò)B L A S T 比對(duì)，與裳卷蛾變形孢蟲(chóng)S S U r 】心『A 核心序列相似的序列基本都來(lái)自于陷鰣m D ，砷口屬和^ 梳繃口屬。它與玩洲肌D 腳口屬的模式種玩f r 咖D 伊施刀刪觸的相似性?xún)H

4、有7 l ％，但與一些分離于鱗翅目昆蟲(chóng)的陷渤口棚口屬和№繃口屬微孢蟲(chóng)具有9 9 ％的高相似性。3 裳卷蛾變形孢蟲(chóng)( 砌f 砌靠D 啊I I I 口陀m c 囂s p ．n o v ．) S 文脈N A 核心序列的同源性分析利用C l 吣t a l x l ．8 3 和M E G A 3 ．1 軟件構(gòu)建了陷鰣m o 腳口屬和妣墟繃口屬部分S 雙『r l t N A 序列的系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹(shù)。在構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹(shù)中，玩f ，伽D 腳口屬和^

5、協(xié)跏口屬不能很清晰地分成兩個(gè)類(lèi)群，而是出現(xiàn)交叉聚類(lèi)的現(xiàn)象。裳卷蛾變形孢蟲(chóng)與分離于鱗翅目昆蟲(chóng)的陷f ，．咖D 棚口屬和^ 枷繃口屬部分序列聚為一類(lèi)，它們的遺傳距離為0 ．o o 加．O l 。這種現(xiàn)象在用S s I 『r R N A 、S S I y r 【) N A 、L S I 7 r R N A進(jìn)行玩f ，咖口腳口屬和^ 協(xié)硎口屬的進(jìn)化分析時(shí)不斷出現(xiàn)。這可能與玩f 砌D ，砷口屬和^ 枷e m 口屬之間本來(lái)就具有很近的親緣關(guān)系有關(guān)，

6、也可能與微孢子蟲(chóng)細(xì)胞內(nèi)寄生生長(zhǎng)受到宿主基因組控制產(chǎn)生一些協(xié)同進(jìn)化有關(guān)。與裳卷蛾變形孢蟲(chóng)分支最近的還是冶蜘口啊I I I 口s p ．G l 鋤嗯n y ，表明它們的同源性仍然是最高的。4 裳卷蛾變形孢蟲(chóng)的分類(lèi)地位更有價(jià)值的微孢子分類(lèi)系統(tǒng)不僅包括其生物學(xué)特征，也與現(xiàn)代分子生物學(xué)和生物信息學(xué)密不可分，兩者相輔相成。裳卷蛾變形孢蟲(chóng)( 砌觚m D 枷口∞r(nóng) 口‘翹s p ．n o v ．) 在孢子生殖時(shí)存在著二孢子形態(tài)和八孢子形態(tài)，本實(shí)驗(yàn)又對(duì)其