溫度敏感殼聚糖-接枝-NIPAAm-VL共聚物轉(zhuǎn)基因載體.pdf

1、本論文主要研究了溫度敏感殼聚糖(CS)-接枝-異丙基丙烯酰胺(NIPAAm)/月桂酸乙烯酯(VL)共聚物(PNVLCS)的制備，及其與DNA形成聚電解質(zhì)復(fù)合物的性質(zhì)以及此復(fù)合物介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染，主要內(nèi)容包括以下三個方面：1)對殼聚糖進行改性，制備出溫度敏感殼聚糖-接枝-NIPAAm/VL共聚物，并以多種手段考察PNVLCS的物化性能。通過紅外光譜和1HNMR譜確認共聚物的結(jié)構(gòu)，并以GPC測定產(chǎn)物的分子量，濁度法和DSC實驗揭示共聚物水溶液

2、具有溫度響應(yīng)性，LCST大約為26℃。 2)通過多種物理化學(xué)方法對共聚物PNVLCS/DNA復(fù)合物進行研究，考察PNVLCS與DNA的相互作用、復(fù)合物中DNA的構(gòu)象變化和復(fù)合物的粒徑以及溫度對其的影響。通過31PNMR譜和圓二色譜的分析得知，DNA在與載體形成聚電解質(zhì)復(fù)合物時引起價鍵的微小擾動，DNA由B型構(gòu)象轉(zhuǎn)變?yōu)镃型構(gòu)象，PNVLCS傾向于結(jié)合到DNA的小溝區(qū)域。變溫UV和變溫CD實驗證實，在溫度升高跨越LCST時，載體發(fā)生

3、相轉(zhuǎn)變使得與DNA之間的相互作用加強，結(jié)合更加緊密。對PNVLCS/DNA復(fù)合物的TEM的觀測和動態(tài)光散射測試表明，DNA復(fù)合物的粒徑因電荷比的不同而異，在高電荷比時可形成尺寸較小的納米尺度顆粒，復(fù)合物的形態(tài)基本呈現(xiàn)均一的小球狀。復(fù)合物的電泳實驗揭示，PNVLCS可與DNA形成復(fù)合物，相比較而言，37℃條件下形成的復(fù)合物更穩(wěn)定，能夠更顯著地限制DNA的移動。 3)以C2C12小鼠成肌細胞為宿主細胞，以殼聚糖和共聚物PNVLCS為