二醇基修飾磁性殼聚糖微球的制備與應(yīng)用.pdf

1、天然產(chǎn)物中存在多種豐度很低的小分子蛋白，為維持生命體的正常運(yùn)行發(fā)揮重要作用。固定化金屬親和層析法因其特異性吸附功能而備受青睞，但雜蛋白會與目標(biāo)小分子競爭親和介質(zhì)的吸附位點(diǎn)，降低親和分離的選擇性。為削弱雜蛋白對吸附位點(diǎn)的競爭，本課題使用二醇基修飾固定化金屬親和介質(zhì)，以更好地排阻雜蛋白，增強(qiáng)吸附活性小分子。為避免因載體均一度不佳而影響應(yīng)用，本課題采用膜乳化-原位法制備出均勻的親和載體。
　　結(jié)果如下:
　　(1)以膜乳化法制備殼

2、聚糖微球，在乙酸含量3％、乳化劑含量4％、乳化壓力200kPa、轉(zhuǎn)速400 r·min-1、交聯(lián)劑2mL及固化溶液pH值為7.5的條件下，可得到平均粒徑為5.95μm，粒徑分布系數(shù)為0.37的殼聚糖微球。再結(jié)合原位法，當(dāng)殼聚糖與FeCl2·4H2O的質(zhì)量比為1∶1時(shí)，可得到磁飽和強(qiáng)度為25.69 emu·g-1的均勻磁性殼聚糖微球(M-CS)。
　　(2)用環(huán)氧氯丙烷(ECH)來活化載體(M-CS)，在45℃、ECH體積分?jǐn)?shù)為50

3、％、NaOH濃度為0.6 mol·L-1及反應(yīng)6h的條件下，所得環(huán)氧基密度最高，為189.72μmol·g-1。再以IDA為螯合劑，制備出磁性固定化Cu2+親和介質(zhì)(M-CS@Cu2+)，并優(yōu)化該介質(zhì)吸附牛血清蛋白(BSA)的條件:當(dāng)BSA濃度為1.0mg·mL-1時(shí)，在0.01 mol·L-1的PBS緩沖液pH為6.8，35℃吸附1.5h的條件下，M-CS@Cu2+對BSA的吸附量最大，為123.27mg·g-1。同時(shí)發(fā)現(xiàn)可用Freu

4、ndlich方程來描述M-CS@Cu2+對BSA的吸附，且該吸附符合偽二級動力學(xué)模型。
　　(3)通過控制IDA的用量來分配環(huán)氧基的反應(yīng)路徑，在M-CS@Cu2+的基礎(chǔ)上制備出二醇基修飾的親和介質(zhì)(M-CS@Cu2+@OH)。以VSLPEW為活性小分子模型，BSA為大分子蛋白模型，比較M-CS、M-CS@Cu2+和M-CS@Cu2+@OH對BSA與VSLPEW的混合體系的吸附，發(fā)現(xiàn)M-CS@Cu2+@OH存在更好的特異性吸附效果，