生物大分子的光譜法研究.pdf

1、核酸與蛋白質(zhì)是生命的物質(zhì)基礎(chǔ)。核酸是由許多核苷酸聚合成的生物大分子化合物，為生命的最基本物質(zhì)之一。它不僅是基本的遺傳物質(zhì)，而且在蛋白質(zhì)的生物合成上也占重要位置，因而在生長(zhǎng)、遺傳、變異等一系列重大生命現(xiàn)象中起決定性的作用。蛋白質(zhì)是一切生命的物質(zhì)基礎(chǔ)，是肌體細(xì)胞的重要組成部分，是人體組織更新和修補(bǔ)的主要原料。人體的生長(zhǎng)、發(fā)育、運(yùn)動(dòng)、遺傳、繁殖等一切生命活動(dòng)都離不開(kāi)蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)的測(cè)定和小分子與蛋白質(zhì)相互作用的研究在蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)研究，臨床醫(yī)學(xué)，

2、藥學(xué)，生命科學(xué)等方面都有著極其重要的意義。因此核酸的測(cè)定，以及探究藥物小分子與核酸蛋白的相互作用方式，對(duì)新藥物的合成以及臨床檢測(cè)等方面具有重要意義。
　　 本論文以熒光和共振光散射技術(shù)為主要研究手段，結(jié)合CD、TEM、UV等多種分析技術(shù)尋找新的核酸和蛋白質(zhì)光譜探針，探討光譜探針?lè)肿优c生物大分子的作用機(jī)理，建立了新型的靈敏的定量檢測(cè)方法。本文共五部分。
　　 論文第一部分綜述了熒光和共振光光譜探針以及納米粒子在核酸和蛋白質(zhì)

3、生物大分子分析中的研究進(jìn)展。
　　 論文第二部分，研究了山奈素、鋁、納米銀和核酸的相互作用。研究表明：核酸可增強(qiáng)山奈素-鋁體系熒光，納米銀對(duì)其熒光強(qiáng)度有進(jìn)一步的增強(qiáng)作用，且體系熒光增強(qiáng)程度與核酸的濃度在一定范圍內(nèi)具有良好的線(xiàn)性關(guān)系，據(jù)此建立了定量測(cè)定核酸的新方法。fsDNA、smDNA和yRNA的線(xiàn)性范圍分別為：5.0×10-9-2.0×10-6gmL-1，7.0×10-9-2.0×10-6gmL-1和2.0×10.8to3.0

4、×10-6g mL-1，檢出限分別為2.5×10-9g mL-1，3.2×10-9g mL-1和7.3×10-9 gmL-1。該方法測(cè)定實(shí)際樣品中DNA的結(jié)果令人滿(mǎn)意。并將本測(cè)定方法與山奈素、鋁和核酸體系進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)檢出限以及線(xiàn)性范圍都得到了改善。機(jī)理研究表明：在納米銀和核酸的協(xié)同作用下，山奈素與鋁形成了穩(wěn)定的熒光絡(luò)合物，能吸附于納米銀表面，并通過(guò)納米銀的表面增強(qiáng)熒光效應(yīng)對(duì)山奈素的熒光進(jìn)一步增強(qiáng)。
　　 論文第三部分，研究了林

5、可霉素、納米銀和核酸的共振光散射增強(qiáng)作用。研究發(fā)現(xiàn)，核酸的加入可以使林可霉素-納米銀體系的共振光發(fā)生增強(qiáng)，由此建立了一種簡(jiǎn)單的測(cè)定核酸的方法。在最佳實(shí)驗(yàn)條件下，核酸濃度與共振光散射增強(qiáng)程度之間具有良好的線(xiàn)性關(guān)系，yRNA和smDNA的線(xiàn)性范圍分別為：3.0×10-8-3.0×10-7g mL-1和3.0×10-8-3.0×10-7g mL-1，檢出限分別為1.1×10-8g mL-1和6.6×10-9g mL-1。機(jī)理研究表明：納米銀-

6、林可霉素-核酸之間的靜電作用以及分子間作用力導(dǎo)致了納米銀發(fā)生聚集。
　　 論文第五部分，研究了山奈素-鋁-SDBS與蛋白質(zhì)的相互作用，建立了定量測(cè)定蛋白質(zhì)的熒光分析新方法。在最佳實(shí)驗(yàn)條件下，山奈素-鋁-SDBS-蛋白質(zhì)體系熒光強(qiáng)度的增強(qiáng)程度與蛋白質(zhì)的濃度在一定范圍內(nèi)呈良好的線(xiàn)性關(guān)系，BSA和EA的線(xiàn)性范圍分別是：0.09-10μg mL-1和0.05-10μg mL-1，檢出限分別達(dá)到1.0×108gmL-1和1.6×10-7g

7、 mL-1。該方法具有穩(wěn)定性好，操作簡(jiǎn)單和靈敏度高等特點(diǎn)。機(jī)理研究表明：山奈素-鋁-SDBS-BSA四元復(fù)合物的形成以及BSA-SDBS提供的疏水微環(huán)境是該體系熒光增強(qiáng)的主要原因。
　　 論文第四部分，研究了吡蚜酮-納米銀體系的共振光散射增強(qiáng)效應(yīng)，建立了定量測(cè)定了吡蚜酮的新方法。在最佳實(shí)驗(yàn)條件下，吡蚜酮-納米銀體系共振光散射強(qiáng)度的增強(qiáng)程度與吡蚜酮的濃度在一定范圍內(nèi)呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。吡蚜酮的線(xiàn)性范圍為7.0×10-7-7.0×10

8、-5mol L-1，檢出限為6.1×10-7mol L-1。相互作用機(jī)理研究表明，在吡蚜酮的存在下，納米銀發(fā)生了聚集，導(dǎo)致體系共振光散射增強(qiáng)。
　　 本論文的主要特點(diǎn)：
　　 1、利用核酸對(duì)山奈素-鋁-納米銀的熒光增強(qiáng)作用，建立了靈敏度高，穩(wěn)定性好的定量測(cè)定核酸的熒光新方法，并用于瓊脂糖凝膠電泳分離核酸片段的染色。在相互作用機(jī)理上進(jìn)行了研究。
　　 2、研究了核酸對(duì)林可霉素-納米銀的共振光散射增強(qiáng)效應(yīng)，建立了測(cè)定