廣西巴馬小型豬ApoE的表達(dá)、真核載體構(gòu)建及功能驗證.pdf

1、阿爾茨海默病(Alzheimer's disease，AD)是繼心臟病、腫瘤、中風(fēng)之后，成為人類死亡的第四大死因，嚴(yán)重危害到老年人身體健康。研究發(fā)現(xiàn)，載脂蛋白E(apolipoprotein E，ApoE)與AD高度相關(guān)。因此，本研究以廣西巴馬小型豬為研究對象，測定了ApoE在不同組織、不同年齡和大腦不同部位的表達(dá)模式;構(gòu)建ApoE真核表達(dá)載體并對其功能進(jìn)行驗證，同時進(jìn)行轉(zhuǎn)ApoE基因小鼠的生產(chǎn)，為后續(xù)構(gòu)建廣西巴馬小型豬AD動物模型的研

2、究奠定基礎(chǔ)。
　　 根據(jù)GenBank公布的豬ApoE cDNA序列設(shè)計特異引物，利用RT-PCR(reverse transcription PCR，RT-PCR)分析廣西巴馬小型豬ApoE在心、脾、肝、腎、胰和腦等組織中的表達(dá)情況，并測定了ApoE在不同年齡(10，14，24，＞24月齡)豬腦組織中的表達(dá)模式。結(jié)果發(fā)現(xiàn)ApoE在腦和胰腺中的表達(dá)最高;老年（＞24月齡）豬腦組織中ApoE的表達(dá)量高于其它年齡;免疫組化的結(jié)果顯示

3、，ApoE在前腦皮質(zhì)的表達(dá)量高于海馬組織。
　　 將ApoE cDNA序列克隆到pMD18-T載體，雙酶切并連接構(gòu)建ApoE真核表達(dá)載體pEGFP-C1-ApoE，利用PK15和PC12細(xì)胞對載體的功能進(jìn)行了驗證。結(jié)果顯示，在兩種細(xì)胞中都檢測到綠色熒光，證明真核表達(dá)載體pEGFP-C1-ApoE在PK15和PC12細(xì)胞中均能正常表達(dá)目的蛋白。為了進(jìn)一步驗證重組質(zhì)粒的功能，將質(zhì)粒注入小鼠睪丸，自然交配獲得57只F1代小鼠，PCR檢