高靈敏DNA單分子檢測法及對苯二酚共振能量猝滅法.pdf

1、第一章中主要對單分子檢測作了簡要的綜述，單分子檢測技術(shù)可用于生物分析檢測的多個領(lǐng)域，應(yīng)用在單分子檢測中的技術(shù)也有很多種，在分析化學領(lǐng)域里，單分子檢測達到了分析檢測的極限，目前單分子檢測的主要包括化學法和光學法兩大類，本章主要對激光共聚焦熒光顯微術(shù)，全內(nèi)反射熒光顯微術(shù)和落射熒光顯微術(shù)的原理及在單分子檢測中的應(yīng)用進行了介紹。
　　 第二章中主要講述了雜交富集單分子計數(shù)法的原理以及單細胞中mRNA測定原理及方法，并將雜交富集單分子計數(shù)

2、法應(yīng)用到單細胞中β2MmRNA的測定，采用目標DNA富集9h時，繪制不同濃度DNA檢測的工作曲線，此時線性范圍為8.0×10-18mol/L-1.0×10-15mol/L，在沒有PCR擴增的前提下測定了人體乳腺癌細胞中β2MmRNA的含量，證明了該方法測定mRNA的可行性。
　　 第三章中我們報道了一種超靈敏的只需1.8nL樣品的單分子計數(shù)DNA微點檢測方法，設(shè)計點樣程序，將目標DNA(tDNA)用點樣機點在結(jié)合了捕獲DNA(D

3、NA1)的蓋玻片上創(chuàng)建直徑為300μm的微點，然后用乙醇胺和牛血清蛋白進行封閉，這樣通過tDNA和DNA1的雜交將tDNA結(jié)合到蓋玻片上，之后將tDNA用事先修飾好量子點的檢測DNA標記，接下來，將微點在全內(nèi)反射誘導(dǎo)熒光的激發(fā)下用微點讀出系統(tǒng)進行熒光成像。采用這種方法，至4×10-22mol（240個分子）DNA能被檢測出，線性范圍為6.0×10-22mol到1.2×10-19mol，所有的數(shù)據(jù)采集及處理采用MetaMorph軟件。該方

4、法可以用于在沒有PCR擴增的條件下，單細胞內(nèi)骨橋蛋白(OPN)的信使核糖核酸(mRNA)的檢測。
　　 第四章，將分別用AMCA、FAM、Cy5染料標記的DNA修飾到粒徑為300nm的鏈酶親和素修飾的磁性亞微米珠上，根據(jù)光的三原色原理，采用落射熒光顯微術(shù)分別獲得磁球的藍，綠，紅三基色熒光圖像，將得到的熒光圖像疊加后得到磁球的實際熒光圖像，通過控制三種染料的比例，制備了22種編碼微球，制備的這些編碼可以實現(xiàn)生物分子的同時測定。

5、r>　　 第五章中我們報道了一種固相熒光共振能量猝滅(FREQ)超靈敏檢測對苯二酚(DHB)的方法，該法采用固定在二氧化硅納米粒子上的巰基丁二酸(MSA)包被的CdTe量子點(CdTe-QDs)作為能量供體。在這種方法里，二氧化硅納米粒子表面先修飾一層3-氨丙基三乙氧基硅烷(APTS)，然后將MSA包被的CdTe-QDS通過與APTS氨基的鍵合固定到二氧化硅粒子的表面，最后，溶液中的對苯二酚通過與二氧化硅表面剩余氨基的靜電作用結(jié)合到二