雄激素受體在乳腺癌內(nèi)分泌治療中的臨床意義及機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　傳統(tǒng)內(nèi)分泌治療在雌激素受體陽性（Estrogen Receptor Positive,ER+）乳腺癌（Breast Cancer,BC）治療策略中有著不可或缺的地位，然而隨著治療的進(jìn)展，一些腫瘤對傳統(tǒng)內(nèi)分泌治療產(chǎn)生耐藥，使治療效果大幅降低。且部分乳腺癌患者由于雌激素受體陰性（Estrogen Receptor Negative, ER-）而無法接受傳統(tǒng)內(nèi)分泌治療。因此，尋找新的藥物或者治療靶點成為目前乳腺癌內(nèi)分泌治療研

2、究的熱點。雄激素受體（Androgen Receptor,AR）在乳腺癌組織中廣泛表達(dá)，其拮抗劑在前列腺癌的治療中取得了巨大成功。因此AR能否成為乳腺癌新的內(nèi)分泌治療靶點成為目前研究者們關(guān)注的焦點。
　　本文主要研究以下內(nèi)容：
　?。?）驗證AR在乳腺癌中的表達(dá)及臨床意義；
　?。?）初步探究AR在乳腺癌他莫昔芬耐藥細(xì)胞株（MCF-7/TAM-R）以及三陰性乳腺癌細(xì)胞株（MDA-MB-453）中的作用。
　　方法

3、：
　　臨床研究：選取2013年07月至2015年07月在北京大學(xué)深圳醫(yī)院乳甲外科就診的患者，病理證實為乳腺浸潤性導(dǎo)管癌（Invasive Ductal Carcinoma,IDC），根據(jù)分層抽樣，分成ER陽性組和ER陰性組。簡單隨機(jī)抽取ER+患者94例，ER-患者74例，共計168例。免疫組織化學(xué)法（Immunochemistry,IHC）檢測AR、ER、PR、Her-2、Ki-67在乳腺癌石蠟切片組織中的表達(dá)情況，并分析其臨床

4、意義。
　　體外研究：選取三株不同的乳腺癌細(xì)胞株：MCF-7（ERα、ERβ、AR陽性）、MCF-7/TAM-R（ERα、ERβ、AR陽性）及MDA-MB-453（ERα陰性、ERβ陽性、AR陽性）。利用新一代AR抑制劑恩雜魯胺（Enzalutamide, Enza）、AR激動劑雙氫睪酮（Dihydrotestosterone,DHT）以及瞬時轉(zhuǎn)染AR siRNA沉默AR的表達(dá)作用于MCF-7、MCF-7/TAM-R及MDA-MB

5、-453。通過CCK8檢測藥物及轉(zhuǎn)染處理后細(xì)胞的增殖情況。q-PCR檢測藥物及轉(zhuǎn)染后AR、ERβRNA變化情況。蛋白免疫印跡實驗（Western Blot,WB）檢測藥物及轉(zhuǎn)染后AR、ERβ蛋白的變化。
　　結(jié)果：
　　AR在ER陽性乳腺癌中表達(dá)率為84.0％（79/94），在ER陰性乳腺癌中表達(dá)率為52.7%(39/74)。AR在乳腺癌亞型中表達(dá)率如下：管腔A型（Luminal A）80.0%(8/10)、管腔B型（Lum

6、inal B）84.5%(71/84)、人表皮生長因子受體2過表達(dá)型（HER-2 Over Expression,Her-2OE）77.1%（27/35）、三陰性乳腺癌（Triple Negative Breast Cancer,TNBC）30.8%（12/39）。在ER陽性組中，AR表達(dá)與年齡相關(guān)（p＜0.01）；ER陰性乳腺癌組中，AR表達(dá)與年齡、絕經(jīng)狀態(tài)、是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Her-2表達(dá)相關(guān)（p＜0.05）。
　　CCK-8

7、結(jié)果顯示在MCF-7中，Enza1μM作用24h后促進(jìn)細(xì)胞生長，DHT100nM作用24h抑制細(xì)胞生長；MCF-7/TAM-R中，Enza10μM作用24h后抑制細(xì)胞生長，不同濃度DHT在各時間點對細(xì)胞生長無明顯影響；在MDA-MB-453中，Enza10μM作用24h后抑制細(xì)胞生長，DHT1nM作用24h后促進(jìn)細(xì)胞生長；。
　　q-PCR結(jié)果顯示在MCF-7中，Enza處理及轉(zhuǎn)染AR siRNA后，AR RNA下調(diào)，ERβRNA

8、也出現(xiàn)了下調(diào)；在MCF-7/TAM-R及MDA-MB-453中，Enza處理及轉(zhuǎn)染AR siRNA后，AR RNA下調(diào)，但ERβRNA出現(xiàn)上調(diào)，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　WB結(jié)果顯示在MCF-7中，Enza處理及轉(zhuǎn)染AR siRNA后，AR蛋白表達(dá)降低，ERβ蛋白表達(dá)也出現(xiàn)了降低；在MCF-7/TAM-R及MDA-MB-453中，Enza處理及轉(zhuǎn)染AR siRNA后，AR蛋白表達(dá)下降，但ERβ蛋白表達(dá)卻增多。
　　結(jié)論：