復(fù)方柴歸方抗抑郁組分藥效及機(jī)理研究.pdf

1、選題依據(jù)：抑郁癥（depression）是一種病因病機(jī)復(fù)雜、伴有多系統(tǒng)功能紊亂的疾病，且發(fā)病率高、易復(fù)發(fā)，嚴(yán)重者有自殺想法或行為，嚴(yán)重危害健康甚至危及生命。目前化學(xué)藥物占領(lǐng)抗抑郁藥物的主要市場(chǎng)，但對(duì)有效率和副作用等方面的研究也未有新的突破。中藥在臨床實(shí)踐中療效確切，但作用機(jī)理、發(fā)揮藥效途徑等有待研究，針對(duì)中藥作用多靶點(diǎn)的特性，從中醫(yī)古方、臨床驗(yàn)方中二次開(kāi)發(fā)療效更佳的理想抗抑郁中藥復(fù)方組分、明確抗抑郁藥物作用機(jī)制成為研究熱點(diǎn)。
　　

2、本課題前期對(duì)逍遙散抗抑郁組分進(jìn)行了系統(tǒng)的化學(xué)研究及藥效學(xué)研究，確定了逍遙散低極性組分為其發(fā)揮藥效的物質(zhì)基礎(chǔ)，且去掉對(duì)該組分貢獻(xiàn)極低的茯苓和白芍，得到由柴胡、白術(shù)、當(dāng)歸、生姜、炙甘草、薄荷6味藥組成的新方——復(fù)方柴歸方，又經(jīng)工藝篩選確定了超臨界CO2萃取工藝[1]，但該工藝產(chǎn)業(yè)化可行性不強(qiáng)。本課題旨在以前期研究為基礎(chǔ)，獲得更為經(jīng)濟(jì)實(shí)用且易于生產(chǎn)的溶劑提取組分，從藥效學(xué)角度進(jìn)行篩選驗(yàn)證，并對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行探究。
　　目的：以乙醇作為提

3、取溶劑，對(duì)逍遙散處方、提取濃度、萃取精制等方面開(kāi)展藥效學(xué)考察，最終篩選出合理的處方及抗抑郁組分，并驗(yàn)證其藥效。從代謝組學(xué)、神經(jīng)內(nèi)分泌激素等方面尋找相關(guān)代謝通路，探究該組分可能的作用機(jī)制，為其作為抗抑郁新藥開(kāi)發(fā)提供科學(xué)數(shù)據(jù)。
　　方法：采用小鼠行為絕望模型（懸尾實(shí)驗(yàn)、強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)）對(duì)處方化裁、提取濃度、萃取精制進(jìn)行藥效學(xué)篩選，以行為絕望時(shí)間作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，得到了復(fù)方柴歸方75％乙醇提取物乙酸乙酯萃取物（FFCGF-EE）可作為新藥開(kāi)發(fā)

4、對(duì)象；采用慢性溫和不可預(yù)知應(yīng)激（CUMS）大鼠抑郁模型，進(jìn)行多方面行為學(xué)的考察，驗(yàn)證FFCGF-EE有抗抑郁活性；針對(duì)CUMS大鼠血清應(yīng)用1H NMR代謝組學(xué)方法，結(jié)合多元統(tǒng)計(jì)分析技術(shù)，分析內(nèi)源性代謝產(chǎn)物的變化規(guī)律，尋找潛在的生物標(biāo)志物，對(duì)FFCGF-EE進(jìn)行藥效學(xué)評(píng)價(jià)的同時(shí)探討其可能的抗抑郁作用機(jī)制；采用酶聯(lián)接免疫吸附測(cè)定（ELISA）的方法，考察FFCGF-EE對(duì)CUMS大鼠血清中，與下丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)軸（HPAA）、下丘腦-

5、垂體-甲狀腺軸（HPTA）以及下丘腦-垂體-性腺軸（HPGA）中相關(guān)的激素，包括血清促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）、血清皮質(zhì)酮（CORT）、血清促甲狀腺激素（TSH）、血清三碘甲狀腺原氨酸（T3）、血清甲狀腺素（T4），和睪酮（T）含量變化，并與代謝組學(xué)中發(fā)現(xiàn)的生物標(biāo)志物做相關(guān)性探討。
　　結(jié)果：1.通過(guò)藥效學(xué)篩選確定了逍遙散去掉“白芍”和“茯苓”的合理性，化裁為復(fù)方柴歸方，又確定了75%的乙醇提取乙酸乙酯萃取工藝藥效明確， CUM

6、S實(shí)驗(yàn)中綜合體重及外觀、曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)、糖水偏愛(ài)實(shí)驗(yàn)、高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)等行為學(xué)指標(biāo)得出，F(xiàn)FCGF-EE中劑量和高劑量與逍遙散原方藥效相當(dāng)，且與陽(yáng)性藥物效果接近。
　　2.應(yīng)用1H NMR代謝組學(xué)技術(shù)整體分析得到了抑郁模型大鼠及FFCGF-EE干預(yù)后的代謝表型譜，鑒定了與抑郁癥相關(guān)的乳酸、亮氨酸、膽堿等6種特征代謝物，而FFCGF-EE可以調(diào)節(jié)特征代謝物趨近正常，其抗抑郁作用機(jī)制可能涉及糖代謝、氨基酸代謝、膽堿代謝等環(huán)節(jié)的調(diào)控。

7、　　3. ELISA方法對(duì)CUMS大鼠血清神經(jīng)內(nèi)分泌激素測(cè)試結(jié)果顯示，模型組大鼠血清中ACTH、CORT、T3濃度顯著升高（P<0.01，0.05），TSH、T濃度顯著降低（P<0.01，0.05），F(xiàn)FCGF-EE能不同程度地回調(diào)CUMS模型引起的激素水平變化，使其趨近于空白對(duì)照組。說(shuō)明FFCGF-EE具有調(diào)節(jié)抑郁癥神經(jīng)內(nèi)分泌功能的作用。與基于代謝組學(xué)技術(shù)發(fā)現(xiàn)的代謝通路相互聯(lián)系，發(fā)現(xiàn)調(diào)節(jié)機(jī)制有一定聯(lián)系，且具有一致性。
　　結(jié)論：