逍遙散抗抑郁有效部位的藥效動力學(xué)研究.pdf

1、選題依據(jù):經(jīng)過多年的基礎(chǔ)和臨床研究已經(jīng)證明逍遙散經(jīng)典名方具有非常明確的抗抑郁作用，本課題組前期研究已經(jīng)證明了逍遙散石油醚提取部位是有顯著抗抑郁活性。但由于抑郁癥(depression)是由多種因素引起的情感障礙性疾病，目前臨床對抑郁癥的診斷主要是使用量表結(jié)合臨床體征進(jìn)行，如漢密頓抑郁量表(Hamiltondepressionscale，HAMD)和抑郁自評量表(self-ratingdepressionscale，SDS)等，尚缺乏客觀

2、、可量化的抑郁癥診斷方法和指標(biāo)，且抑郁癥發(fā)病機(jī)制還未明確，缺乏特異性。對抗抑郁藥物的療效評價也缺乏客觀的效應(yīng)指標(biāo)，藥物與機(jī)體作用的動態(tài)性特點(diǎn)尚不清楚。近年來學(xué)者們進(jìn)行了大量的研究，其中單胺神經(jīng)遞質(zhì)假說堪稱經(jīng)典，隨著代謝組學(xué)技術(shù)的發(fā)展，發(fā)現(xiàn)抑郁狀態(tài)時某些內(nèi)源性小分子化合物有顯著變化。為此，本研究以行為學(xué)指標(biāo)為基準(zhǔn)，從神經(jīng)遞質(zhì)與內(nèi)源性小分子化合物中篩選獲得與抑郁癥密切相關(guān)的潛在效應(yīng)指標(biāo)，然后給予陽性藥進(jìn)行進(jìn)一步篩選和驗(yàn)證，獲得效應(yīng)指標(biāo)，綜合

3、行為學(xué)指標(biāo)得到藥效指標(biāo)，進(jìn)行逍遙散石油醚部位抗抑郁藥效動力學(xué)研究，為抑郁癥的臨床診斷與臨床用藥方案設(shè)計提供研究依據(jù)。
　　 目的:1.通過與行為學(xué)指標(biāo)的相關(guān)性比較，并給予陽性藥進(jìn)行驗(yàn)證，找出可反映抑郁癥特征的潛在效應(yīng)指標(biāo)，為臨床抑郁癥的輔助診斷與藥物療效的評價提供客觀、可量化的指標(biāo)。2.采用藥效指標(biāo)進(jìn)行逍遙散石油醚部位藥效動力學(xué)的研究，為下一步逍遙散藥動學(xué)-藥效學(xué)相關(guān)性研究提供科學(xué)依據(jù)。
　　 方法:1.建立血清及海馬組

4、織中神經(jīng)遞質(zhì)的HPLC-FD定量測定方法;采用GC-MS代謝組學(xué)方法找出潛在的生物標(biāo)志物，并建立潛在生物標(biāo)志物的的定量測定方法。
　　 2.選用雄性成年SD大鼠分別設(shè)模型組(MS)、空白組(NS)2個組，建立慢性不可預(yù)知溫和應(yīng)激(CUMS)模型，于造模0、7、14、21天分別進(jìn)行行為學(xué)測定，造模0、6、9、12、15和22天分別進(jìn)行和眼眶取血，并于造模結(jié)束后即第22天采集海馬組織，采用HPLC和GC-MS對所得生物樣品進(jìn)行分析，

5、測定不同時間樣品中各指標(biāo)的含量，通過主成分分析和相關(guān)性分析方法，篩選出與抑郁癥關(guān)系密切的潛在效應(yīng)指標(biāo)。
　　 3.建立CUMS模型，選用雄性成年SD大鼠分別設(shè)模型組(MS)、空白組(NS)、文拉法辛組(YW)和逍遙散石油醚組(XS)4個組，第0-21天邊造模邊給藥，22-42天只造模不給藥，分別于造模0、7、14、21、28、35和42天分別進(jìn)行行為學(xué)測試和眼眶取血，采用HPLC和GC-MS對所得血清進(jìn)行分析，獲得行為學(xué)和前期篩

6、選出的效應(yīng)指標(biāo)的數(shù)據(jù)，考察藥物對各指標(biāo)的調(diào)節(jié)作用，進(jìn)一步驗(yàn)證篩選出可靠性高的效應(yīng)指標(biāo)，并將驗(yàn)證后的效應(yīng)指標(biāo)與行為學(xué)指標(biāo)綜合起來作為藥效指標(biāo)，進(jìn)行藥效動力學(xué)研究。
　　 結(jié)果:1.建立了血清與海馬組織中神經(jīng)遞質(zhì)HPLC-FD測定方法和潛在生物標(biāo)志物GC-MS代謝組學(xué)法的定量分析方法，兩種方法均靈敏、穩(wěn)定、可靠;通過對比血清與海馬中各指標(biāo)的差異，發(fā)現(xiàn)血清中指標(biāo)的變化可反應(yīng)海馬中變化，選擇血清作為測定樣本。
　　 2.在篩選潛

7、在效應(yīng)指標(biāo)的動物實(shí)驗(yàn)中，行為學(xué)結(jié)果顯示造模成功。而且行為學(xué)中體重、糖水偏愛、直立次數(shù)和穿格數(shù)4個指標(biāo)可作為下步篩選效應(yīng)指標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)，找到了與抑郁癥密切相關(guān)的效應(yīng)指標(biāo)共8種，分別為NE、5-HT、甘氨酸、谷氨酸、葡萄糖、果糖、檸檬酸、棕櫚酸。
　　 3.驗(yàn)證潛在效應(yīng)指標(biāo)的動物實(shí)驗(yàn)中，行為學(xué)結(jié)果顯示造模成功，在給藥21天后逍遙散石油醚組和文拉法辛組都表現(xiàn)出了抗抑郁的效果，在應(yīng)激進(jìn)行到35天后，給藥組的抗抑郁效果消失。通過比較給藥前后指

8、標(biāo)的變化趨勢，進(jìn)一步驗(yàn)證篩選出相關(guān)性較高的4個指標(biāo)作為效應(yīng)指標(biāo)，NE、5-HT、甘氨酸和果糖。
　　 4.將效應(yīng)指標(biāo)與行為學(xué)指標(biāo)綜合可作為最終的藥效指標(biāo)，使用DAS軟件進(jìn)行分析，進(jìn)行藥效動力學(xué)的研究。根據(jù)不同指標(biāo)數(shù)據(jù)的分析可知，此數(shù)據(jù)分析方法可行，且效應(yīng)指標(biāo)可作為抗抑郁藥物輔助的藥效指標(biāo)。逍遙散石油醚部位和文拉法辛分別于22.2天和23.3天到達(dá)了藥效的最大值，逍遙散石油醚部位比文拉法辛的藥效更加平穩(wěn)個體差異更小，二者有相似的抗