基于尿液代謝組學(xué)的逍遙散抗抑郁臨床療效分析.pdf

1、選題依據(jù)：抑郁癥(depression)是由多種因素引起的以情緒低落為主要表現(xiàn)的精神類疾病，增加社會醫(yī)療支出和經(jīng)濟負擔，嚴重地影響著人們的生活和工作。目前抑郁癥的治療仍以西藥為主，而西藥從單一的靶點出發(fā)，副作用大、不良反應(yīng)多、藥物昂貴不適合長期服用等問題，促使國內(nèi)外眾多學(xué)者對傳統(tǒng)抗抑郁中藥復(fù)方的興趣。逍遙散為抗抑郁經(jīng)典名方，具有不良反應(yīng)少、價格便宜、多靶點整體調(diào)節(jié)等優(yōu)勢，抗抑郁效果明顯。代謝組學(xué)研究可以借助各種分析手段獲得生物樣本中變化

2、的代謝物情況，根據(jù)變化的代謝物在生物樣本中的含量情況及在代謝通路中的作用，有助于人們更好地理解逍遙散抗抑郁作用機制及進行治療效果的評價。課題組前期采用代謝組學(xué)技術(shù)先從動物實驗入手，分析逍遙散對抑郁模型大鼠的干預(yù)作用，取得了一定的成果。之后在臨床實驗中，從西醫(yī)與中醫(yī)兩個角度同時出發(fā)，采用HAMD、CGI與中醫(yī)證候量表三種診斷工具對逍遙散治療抑郁癥療效進行評價，并采用基于1H NMR代謝組學(xué)技術(shù)對抑郁癥患者服用逍遙散前后尿液中代謝物的變化進

3、行了動態(tài)分析，發(fā)現(xiàn)一些與逍遙散抗抑郁療效相關(guān)的差異代謝物。這些工作對進一步的逍遙散抗抑郁療效分析及逍遙散抗抑郁療效關(guān)聯(lián)標志物的確定提供了技術(shù)支持和研究基礎(chǔ)。
　　目的：尋找患者尿液中逍遙散抗抑郁療效關(guān)聯(lián)標志物，并進行定量分析，作為逍遙散抗抑郁療效客觀評價指標，從代謝物角度探討逍遙散抗抑郁作用機制。
　　方法：本研究以抑郁癥患者為研究對象，對抑郁癥患者在服用逍遙散前以及服藥2周、4周、6周和8周的尿液樣本進行分析，以健康人尿液

4、為對照。測定各組尿液樣本的肌酐含量作為調(diào)整GC-MS分析所需尿液量的依據(jù)，采用氯甲酸乙酯衍生化方法對樣本進行衍生化。采集GC-MS代謝組學(xué)數(shù)據(jù)，采用SIMCA-P13.0軟件進行多元統(tǒng)計分析，通過健康組以及各給藥組與抑郁癥組兩兩比較的正交-偏最小二乘判別分析（OPLS-DA）和S-plot，結(jié)合VIP(variable importance in the projection)值及t檢驗結(jié)果，尋找逍遙散抗抑郁療效標志物。然后綜合前期通過

5、代謝組學(xué)方法在抑郁模型大鼠和臨床患者中發(fā)現(xiàn)的逍遙散抗抑郁療效標志物，確定逍遙散抗抑郁療效的關(guān)聯(lián)標志物，并探討其抗抑郁作用機制，并采用GC-MS的方法對關(guān)聯(lián)標志物進行定量測定，作為逍遙抗抑郁療效評價的客觀指標。
　　結(jié)果：
　　1.建立了臨床尿液GC-MS代謝組學(xué)數(shù)據(jù)采集方法，并對采集的譜圖轉(zhuǎn)換成數(shù)據(jù)進行代謝組學(xué)分析，抑郁癥患者與健康人存在明顯的差異，經(jīng)逍遙散治療后，這種差異明顯減小，進一步的差異代謝物分析中共發(fā)現(xiàn)尿液中丙氨酸

6、、苯丙氨酸、馬尿酸、檸檬酸和酪氨酸在逍遙散干預(yù)后發(fā)生了顯著性的向健康組相關(guān)代謝物含量水平回調(diào)，表明逍遙散對這5種代謝物具有明顯的調(diào)節(jié)作用。
　　2.綜合抑郁模型大鼠實驗和臨床實驗研究結(jié)果，在尿液中發(fā)現(xiàn)的與逍遙散相關(guān)的代謝物主要分為三大類，它們分別是氨基酸類及其衍生物(酪氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、馬尿酸)、有機酸類(檸檬酸、乳酸、黃尿酸、?；撬?、α-酮戊二酸)以及胺類(二甲胺)，并對這些代謝物進行了代謝通路和生物學(xué)功能分析，這些代謝物

7、在對機體的能量代謝調(diào)控、神經(jīng)遞質(zhì)調(diào)節(jié)、腸道菌群活動影響三方面具有重要的作用，表明逍遙散抗抑郁作用的發(fā)揮與調(diào)節(jié)抑郁癥患者能量代謝、異常神經(jīng)遞質(zhì)水平以及紊亂的腸道菌群活動相關(guān)。
　　3.本研究中對關(guān)聯(lián)標志物中的氨基酸類以及檸檬酸進行了GC-MS定量測定，以氯甲酸乙酯為衍生化試劑的GC-MS測定方法在線性、樣本的穩(wěn)定性、加樣回收率等方面均能滿足定量分析的要求。抑郁癥和健康人尿液中苯丙氨酸、馬尿酸、丙氨酸、酪氨酸和檸檬酸的含量具有顯著性的

8、差異，經(jīng)逍遙散治療后，這些代謝均不同程度的向健康人尿液中相關(guān)代謝物含量水平回調(diào)，其含量范圍處于抑郁癥患者和健康人尿液中的含量范圍之間。抑郁癥患者服用逍遙散后尿液中這五種代謝物含量的變化情況，表明逍遙散具有明顯的抗抑郁效果。檸檬酸在健康人中的含量范圍與抑郁癥患者尿中含量范圍沒有交集，酪氨酸、馬尿酸、苯丙氨酸以及丙氨酸雖然在健康人和抑郁癥患者尿液中的含量范圍有交集，但是其交集較小，通過這些代謝物在尿液中的含量情況可以幫助抑郁癥的診斷以及評價