基于尿液代謝組學(xué)的脾氣虛證本質(zhì)研究.pdf

1、目的：脾氣虛證實(shí)質(zhì)研究是證本質(zhì)研究的一項(xiàng)重要內(nèi)容。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為脾氣不足，運(yùn)化功能失常，津液不能布散而停滯體內(nèi)，可產(chǎn)生濕、痰、飲等病理產(chǎn)物，從而引發(fā)各種不同的疾病，故有“內(nèi)傷脾胃，百病由生”“脾為生痰之源”之說?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為中醫(yī)脾是一個多系統(tǒng)、多器官的功能單位，它是以消化系統(tǒng)為基礎(chǔ)的，包括能量代謝和水液代謝，并與血液、內(nèi)分泌、免疫和神經(jīng)系統(tǒng)等有密切聯(lián)系的一個概念。代謝綜合征（metabolic syndrome，MS）是以中心性肥胖為中心，

2、涉及多種代謝異常包括血壓、血糖、血脂，與心血管疾病緊密聯(lián)系的疾病狀態(tài)，其病因?qū)W主要以肥胖為核心，痰濕是肥胖的重要病理因素，而MS以肥胖為中心，可以說痰濕是貫穿MS的主要證候群的中心病理因素。由此可見，脾虛失運(yùn)脾不散精是MS發(fā)生的重要病機(jī)。因此代謝綜合征的發(fā)病，與脾的功能密不可分。代謝組學(xué)是一門新興科學(xué)，廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，它通過核磁共振（NMR）、色譜（GC）、質(zhì)譜（MS）等現(xiàn)代儀器分析手段，定性或定量研究生物體液或組織中的小分子代謝產(chǎn)

3、物，系統(tǒng)地揭示疾病過程中的生理病理狀態(tài)，而這種系統(tǒng)性正與中醫(yī)學(xué)的整體觀相吻合。目前代謝組學(xué)已經(jīng)作為一種新的技術(shù)應(yīng)用于研究臨床疾病的診斷。本研究運(yùn)用病證結(jié)合手段，采用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（LC-MS）技術(shù)的代謝組學(xué)方法，以代謝綜合征為基礎(chǔ)病探討其脾氣虛患者尿液中小分子代謝組成分。挖掘代謝組變化模式或特征峰，通過綜合集成分析，嘗試對中醫(yī)脾氣虛證的診斷或評價指標(biāo)進(jìn)行定性、定量的表達(dá)。從而進(jìn)一步揭示脾氣虛證的代謝產(chǎn)物特征，揭示中醫(yī)脾本質(zhì)的現(xiàn)代研究

4、指標(biāo)。 方法：病例來源于大連醫(yī)科大學(xué)附屬第醫(yī)二院體檢中心，年齡40-60歲的體檢人員。采用2005年4月國際糖尿病聯(lián)盟（IDF）頒布的代謝綜合征診斷標(biāo)準(zhǔn)，2002年《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》的脾氣虛證診斷標(biāo)準(zhǔn)將人員分成3組即代謝綜合征脾氣虛組、代謝綜合征組及正常組。將入選人員晨尿或二次晨尿1ml由-20℃保存一周后轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱備用。運(yùn)用超高效液相色譜-四極桿-飛行時間質(zhì)譜（UPLC-Q-TOF-MS）聯(lián)用技術(shù)分析尿液成分

5、，采用偏最小二乘．判別分析法（PLS-DA）對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。并且對表達(dá)差異的尿液代謝產(chǎn)物定性。 結(jié)果：經(jīng)代謝組學(xué)分析后，PLS-DA模式圖顯示每兩組間尿液中的代謝輪廓都有良好的區(qū)分，并得出相應(yīng)的潛在標(biāo)志物即：代謝綜合征尿液中保留時間為10．0895出現(xiàn)的分子量為130．048的未知化合物和310．198的肉堿相對正常組濃度減低；代謝綜合征脾氣虛組尿液中1．1242時出現(xiàn)的分子量為229．137的leucylproline較代謝綜

6、合征組和正常組均明顯升高，而5．7365時出現(xiàn)的分子量為265．115的苯乙酰谷氨酰胺較代謝綜合征組和正常組均明顯降低。 結(jié)論： 1．脾氣虛代謝綜合征組與代謝綜合征組和正常對照組尿液代謝輪廓均有良好區(qū)分。 2．發(fā)現(xiàn)了一些脾氣虛證的潛在標(biāo)記物，如leucylproline和苯乙酰谷氨酰胺。有助于脾氣虛證臨床微觀指標(biāo)的診斷，對中醫(yī)脾氣虛證的量化起了一定的規(guī)范作用。 3．代謝組學(xué)技術(shù)的系統(tǒng)性與中醫(yī)的整體觀念相似