逍遙散抗抑郁有效部位最佳配伍篩選及譜效關(guān)系研究.pdf

1、選題依據(jù):抑郁癥是一種常見的精神疾病，預(yù)測其到2020年將要成為世界第二大疾病負擔源，其危害越來越引起醫(yī)藥衛(wèi)生界的高度重視。逍遙散是治療抑郁癥最常用的經(jīng)典名方之一，臨床及實驗研究均顯示該方有確切的抗抑郁作用，目前對逍遙散作用機制研究一直是中醫(yī)藥研究的熱點，但是對逍遙散抗抑郁作用的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的研究尚未見文獻報道。逍遙散抗抑郁的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)是指其復(fù)方中發(fā)揮抗抑郁作用的化學(xué)成分群，因此闡明其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，不僅對揭示其抗抑郁的有效性、多成分多

2、靶點作用的整體性與復(fù)雜性以及配伍科學(xué)性具有重要意義，而且為該方的質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)，同時為從中藥中研發(fā)療效更佳的抗抑郁新藥奠定基礎(chǔ)，也為其他中藥復(fù)方的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究提供借鑒?！爸兴幾V效關(guān)系”是中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究的新思路，其目的是通過譜效相關(guān)來揭示中藥所含的化學(xué)成分與藥效之間的相互關(guān)系，從而闡明與藥效之間相關(guān)的化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)。本課題組前期已經(jīng)對逍遙散做了大量的工作，已經(jīng)從該復(fù)方中篩選出具有明顯抗抑郁作用的的有效部位，并采用小鼠絕望模型

3、（小鼠的強迫游泳實驗和小鼠懸尾實驗）初步篩選出逍遙散抗抑郁有效部位的最佳的配伍比例，并初步尋找到與抑郁癥密切相關(guān)的化學(xué)成分，然而，對單一小鼠模型得出的實驗結(jié)果還有待更一進步的驗證，本研究在小鼠模型研究基礎(chǔ)上采用CUMS大鼠模型行為學(xué)及代謝組學(xué)對逍遙散的抗抑郁活性成分進行更加深入探討。
　　 目的:基于慢性溫和不可預(yù)知應(yīng)激(CUMS)大鼠模型的行為學(xué)及代謝組學(xué)技術(shù)驗證前期通過小鼠絕望模型尋找到的逍遙散抗抑郁活性部位的最佳配伍比及與

4、抗抑郁活性密切相關(guān)的化學(xué)成分，以進一步闡明逍遙散抗抑郁作用的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。
　　 方法:將逍遙散抗抑郁有效部位XY-A和XY-B采用兩因子（有效部位XY-A和XY-B為兩因素）三水平（最佳劑量0、1、3倍為三水平）實驗設(shè)計配伍，以配伍后的組份、逍遙散組、前期通過小鼠絕望模型初步篩選的最佳配伍組份(XY-A∶XY-B=2∶2)及文拉法幸（陽性組）為干預(yù)藥物，采用CUMS模型結(jié)合孤養(yǎng)模型綜合考察逍遙散抗抑郁有效配伍組份對大鼠的平行格

5、數(shù)、直立次數(shù)、糖水偏愛率、體重及血漿內(nèi)代謝物的影響，確定最佳配伍比例及最佳給藥劑量。采用GC-MS方法建立逍遙散抗抑郁有效部位配伍組份指紋圖譜，用多種關(guān)聯(lián)分析法（主成分分析、相關(guān)分析、多元回歸分析等），客觀準確尋找與治療抑郁癥有關(guān)的特征峰，并對從圖譜中確定的對藥效貢獻大的化學(xué)成分進行定性識別。
　　 結(jié)果:1.行為學(xué)及代謝組學(xué)分析結(jié)果
　　 正常組和模型組在行為學(xué)上有顯著性的差異，在代謝輪廓上能夠明顯的分開，說明造模成功

6、。結(jié)合相應(yīng)的載荷圖和獨立樣本t檢驗，找到了13個引起差異的潛在生物標志物?；贑UMS模型的行為學(xué)及血漿代謝組學(xué)結(jié)果顯示逍遙散抗抑郁有效部位各配伍組對CUMS引起的變化起到不同的干預(yù)作用，其中XY-A2B2(XY-A∶XY-B=2∶2)組與其他組相比，在行為學(xué)（平行格數(shù)、直立次數(shù)、大鼠體重和糖水偏愛率）方面提高的最為顯著，在血漿內(nèi)代謝組學(xué)方面XY-A2B2組離正常對照組最近，離模型組最遠，表明其有明顯的抗抑郁效果最佳，且優(yōu)于逍遙散組和文

7、拉法辛組。因此本研究篩選出了最佳的抗抑郁有效部位配伍組份，即當有效部位按生藥量計，XY-A、XY-B均為92.6 g/kg時，抗抑郁作用最佳。
　　 2.譜效相關(guān)的結(jié)果
　　 (1)基于譜效關(guān)系研究思路，應(yīng)用GC-MS色譜分析方法對逍遙散抗抑郁有效部位配伍組份的化學(xué)成分進行“譜”分析。通過對各項指標的考察表明，本研究建立的分析方法均能達到指紋圖譜分析技術(shù)要求，所獲得的GC-MS指紋圖譜能夠全面、有效地反應(yīng)有效部位配伍組份

8、的的內(nèi)在主要化學(xué)成分。與此同時，對指紋圖譜中的特征峰進行了峰面積的測定。
　　 (2)結(jié)合各配伍組圖譜分析和相應(yīng)藥效結(jié)果，應(yīng)用相關(guān)分析、回歸分析等多種關(guān)聯(lián)分析法，相互佐證，建立譜效相關(guān)，尋找并指認出了一些與治療抑郁癥有關(guān)的化學(xué)成分，共尋找到11個活性成分，其中指認出6個(莰烯、蒼術(shù)酮、藁本內(nèi)酯、棕櫚酸、白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ)，未知化合物5個。部分化學(xué)成分的抗抑郁活性已被文獻所證實，一定程度上證明了本研究所采用的譜效分析方法的客

9、觀性與準確性。
　　 結(jié)論:1本研究發(fā)現(xiàn)有效部位配伍后形成的配伍組份優(yōu)于單獨的有效部位XY-A、XY-B，并篩選出了最佳的抗抑郁配伍組份，即當有效部位按生藥量計，XY-A、XY-B均為92.6 g/kg時，抗抑郁效果最佳。本研究為基于有效部位配伍的譜效關(guān)系研究奠定了基礎(chǔ)，同時，本研究結(jié)果為新型抗抑郁組分中藥的研發(fā)提供了一定的參考價值。
　　 2.基于譜效關(guān)系研究思路，運用GC-MS色譜分析方法及多種關(guān)聯(lián)分析法，成功尋找到

10、11個抗抑郁的活性成分（莰烯、蒼術(shù)酮、藁本內(nèi)酯、棕櫚酸、白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ等），從而為逍遙散的質(zhì)量控制與藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究提供了有價值的參考。
　　 3.本研究在小鼠絕望模型基礎(chǔ)上采用CUMS大鼠模型行為學(xué)及代謝組學(xué)研究逍遙散抗抑郁的活性成分。研究結(jié)果表明，蒼術(shù)酮、藁本內(nèi)酯、棕櫚酸、白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ為小鼠絕望模型和CUMS大鼠模型中共有的逍遙散的抗抑郁活性成分。
　　 4.基于有效部位配伍的譜效關(guān)系的研究思路體現(xiàn)