末水壇紫菜多糖降解物降脂減肥作用的研究及其復(fù)合沖劑的研制.pdf

1、末水壇紫菜，通常指六水紫菜，雖然色澤差，口感粗糙，但其含有大量多糖（20.67％）、蛋白質(zhì)和礦物元素等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，具有很高開(kāi)發(fā)利用價(jià)值。相關(guān)研究表明，壇紫菜及其多糖具有增強(qiáng)免疫力、抗腫瘤、抗衰老、降低血清膽固醇等作用。然而，末水壇紫菜多糖的降脂減肥作用研究目前未見(jiàn)報(bào)道。本文對(duì)末水壇紫菜多糖進(jìn)行適度降解，研究多糖降解物的體外降脂效果，然后將多糖降解物與山楂黃酮和絞股藍(lán)皂苷進(jìn)行復(fù)配，通過(guò)體外高脂細(xì)胞模型和體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)探討三者構(gòu)成的復(fù)合物降脂減

2、肥協(xié)同效應(yīng)，并優(yōu)化復(fù)合物的配方；將復(fù)合物制備成沖劑并進(jìn)行毒性評(píng)價(jià)。最終，研制開(kāi)發(fā)出安全有效的降脂減肥沖劑。具體內(nèi)容如下：
　?。?）多糖降解物的制備：采取水提醇沉法提取多糖，經(jīng)除蛋白、透析等獲得末水壇紫菜多糖（PHP）。①超聲波法制備多糖降解物：以α-淀粉酶和胰脂肪酶抑制率為考察指標(biāo)，PHP濃度、超聲功率、超聲處理時(shí)間為因素進(jìn)行正交試驗(yàn)優(yōu)化降解條件。結(jié)果表明，PHP濃度9.0mg/mL、超聲功率800w、超聲處理1.0h時(shí)、制備的

3、超聲多糖降解物（UDP）對(duì)ɑ-淀粉酶和胰脂肪酶的抑制活性最高，其半數(shù)抑制濃度IC50值分別為15.65mg/mL和16.08mg/mL，遠(yuǎn)低于未降解多糖（PHP）的47.63mg/mL和66.21mg/mL。②化學(xué)法制備多糖降解物：采用實(shí)驗(yàn)室前期建立的條件，即利用過(guò)氧化氫（H2O2）和維生素C（VC）體系產(chǎn)生的羥自由基（·OH）對(duì)PHP進(jìn)行化學(xué)降解，通過(guò)超濾得到分子量為10KD-50KD多糖溶液，冷凍干燥得化學(xué)多糖降解物（CDP）。

4、r>　?。?）多糖降解物、山楂黃酮、絞股藍(lán)皂苷及其復(fù)合物體外降脂活性研究和復(fù)方優(yōu)化：以含1%BSA、1.5mmol/L油酸的DMEM培養(yǎng)基孵育HepG2細(xì)胞24h后，建立體外高脂細(xì)胞模型，以脂質(zhì)清除率為指標(biāo)評(píng)價(jià)多糖降解物、山楂黃酮、絞股藍(lán)皂苷的體外降脂功效，繼而利用響應(yīng)面法對(duì)三者的復(fù)合物配方進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果表明：UDP和CDP體外均具有較好的降脂效果，當(dāng)兩者濃度為200μg/mL時(shí)，脂質(zhì)清除率分別達(dá)到50.78%和51.21%；而山楂黃酮

5、和絞股藍(lán)皂苷亦顯示了良好的體外降脂作用，當(dāng)濃度分別為200μg/mL和90μg/mL時(shí)，脂質(zhì)清除率分別達(dá)51.19%和50.22%；響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析發(fā)現(xiàn)：當(dāng)UDP、山楂黃酮、絞股藍(lán)皂苷分別以濃度194.39μg/mL、216.24μg/mL、91.27μg/mL組合成復(fù)合物（CTC）時(shí)，在相同用藥體積下脂質(zhì)清除作用最強(qiáng)，脂質(zhì)清除率高達(dá)72.92%，具有較好的協(xié)同降脂效應(yīng)。
　?。?）不同藥物體內(nèi)降脂減肥作用的研究：高脂肥胖大鼠模

6、型建立后分組，其中各給藥組灌胃給予不同藥物治療，高脂肥胖模型對(duì)照組給予等量生理鹽水。給藥四周后實(shí)驗(yàn)大鼠眼眶取血、解剖，分析相關(guān)生化指標(biāo)。結(jié)果表明：與模型對(duì)照組相比，不同藥物組均顯著抑制高脂肥胖大鼠攝食量（P<0.01），降低大鼠體重（P<0.01）和脂肪指數(shù)；大鼠血清TC、TG、LDL-C水平明顯降低，HDL-C含量升高，其中以復(fù)合物中劑量（M-CTC）和UDP中劑量組效果最佳（P<0.01）；同時(shí)，不同藥物亦可不同程度降低谷草轉(zhuǎn)氨酶（

7、AST）活性，提高脂蛋白脂酶（LPL）、肝脂酶（HL）酶活，并對(duì)肝臟損傷具有一定的修復(fù)作用。表明多糖降解物及其與中藥成分組成的復(fù)合物具有良好的降脂、減肥、保肝作用，該實(shí)驗(yàn)結(jié)果與體外實(shí)驗(yàn)一致。
　?。?）復(fù)合降脂減肥沖劑的制備及其毒性評(píng)價(jià)：以經(jīng)脫腥脫色處理后、粉碎過(guò)200目篩的末水壇紫菜為主料，與UDP、山楂黃酮、絞股藍(lán)皂苷構(gòu)成紫菜復(fù)合物，利用添加脫脂奶粉和木糖醇以調(diào)整營(yíng)養(yǎng)和風(fēng)味，通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)探討黃原膠、羧甲基纖維素鈉、微晶纖維素

8、對(duì)沖劑感官的影響。最后利用正交實(shí)驗(yàn)確定了復(fù)合降脂減肥沖劑的最佳工藝配方為：以10g粉為單位，其中紫菜復(fù)合物4.0g、脫脂奶粉4.0g、木糖醇2.0g，另添加黃原膠0.08g，CMC－Na0.015g，微晶纖維素0.02g。由此配方組合所得沖劑風(fēng)味、感官評(píng)價(jià)最佳。毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，復(fù)合降脂減肥沖劑屬于實(shí)際無(wú)毒級(jí)，其LD50>10g/kg。
　　綜上所述，UDP、山楂黃酮、絞股藍(lán)皂苷組合存在協(xié)同效應(yīng)，其復(fù)合物具備良好的降脂減肥活性。