培元固本法的理論探討及其對老年性癡呆作用的研究.pdf

1、目的：
　　培元固本法是中醫(yī)學(xué)的重要治法之一，在各種疾病尤其是老年病的防治過程中起著重要作用，歷代醫(yī)家極為重視培元固本法，對其多有闡發(fā)。本課題從中醫(yī)培元固本法的自身發(fā)展脈絡(luò)出發(fā)，梳理其基本概念和理論內(nèi)涵，對其進行分析歸納總結(jié)，并結(jié)合本課題組前期的研究基礎(chǔ)，以老年性癡呆為切入點，探討元氣與老年性癡呆發(fā)病的關(guān)系和培元固本法防治老年性癡呆的作用及機制。以 APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠作為老年性癡呆的動物模型，觀察培元固本中藥復(fù)方補元清腦顆

2、粒治療老年性癡呆的作用及其對PI3K/Akt信號通路的影響，旨在為中醫(yī)培元固本法的理論研究和培元固本法防治老年病的研究提供理論基礎(chǔ)和實驗依據(jù)。
　　方法：
　　1.理論探討：整理與中醫(yī)培元固本法有關(guān)的古今文獻，分析培元固本法的中醫(yī)學(xué)概念、內(nèi)涵，探討中醫(yī)培元固本法的理論，及其防治老年性癡呆的理論依據(jù)。
　　2.實驗研究：以APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠作為老年性癡呆的動物模型，以 PI3K/Akt信號通路為研究靶點，研究培元

3、固本中藥復(fù)方補元清腦顆粒對老年性癡呆的作用及其機制。以 Morris水迷宮測試、跳臺測試為行為學(xué)指標，檢測小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力；以Western Blot法檢測小鼠海馬組織PI3K/Akt信號通路主要蛋白的含量；以Real Time-PCR檢測小鼠海馬組織PI3K/Akt信號通路主要 mRNA的表達，及其上游β淀粉樣前體蛋白(APP)mRNA的表達；免疫組織化學(xué)染色法檢測小鼠海馬組織 PI3K/Akt信號通路主要蛋白的含量；電鏡觀察小鼠海

4、馬CA1區(qū)細胞凋亡情況。
　　結(jié)果：
　　1. Morris水迷宮測試結(jié)果顯示：與空白組比較，模型組小鼠上平臺潛伏期、第1次抵原平臺時間和游泳總路程明顯增加(P＜0.01)，穿越平臺次數(shù)、目標象限時間均明顯減少(P＜0.01)；與模型組比較，各組小鼠的上平臺潛伏期、游泳總路程均減少(P＜0.01，P＜0.05)，目標象限時間均增加(P＜0.01，P＜0.05)，補元清腦顆粒高劑量組和等效劑量組小鼠的穿越平臺次數(shù)增加(P＜0.

5、01，P＜0.05)，兩組之間呈現(xiàn)出一定的量效關(guān)系；與西藥陽性對照組多奈哌齊組比較，補元清腦顆粒高劑量組和等效劑量組小鼠的游泳總路程明顯減少（P＜0.01）；與中藥陽性對照組菖蒲益智丸組比較，補元清腦顆粒高劑量組和等效劑量組小鼠的游泳總路程明顯減少（P＜0.01），補元清腦顆粒高劑量組小鼠的穿越平臺次數(shù)增加(P＜0.05)。
　　2.跳臺測試結(jié)果顯示：與空白組比較，模型組小鼠的出錯次數(shù)明顯增加(P＜0.01)，潛伏期明顯縮短(P＜

6、0.01)；與模型組比較，多奈哌齊組和補元清腦顆粒高劑量組小鼠的出錯次數(shù)減少(P＜0.01，P＜0.05)，多奈哌齊組和菖蒲益智丸組小鼠的潛伏期延長(P＜0.01，P＜0.05)。
　　3. Western Blot結(jié)果顯示：與空白組比較，模型組小鼠海馬組織的Akt、Bcl-2蛋白相對表達量減少(P＜0.05)；與模型組比較，多奈哌齊組、菖蒲益智丸組小鼠海馬組織的Akt蛋白相對表達量增加(P＜0.01，P＜0.05)，菖蒲益智丸組

7、小鼠海馬組織的Bax蛋白相對表達量減少(P＜0.05)，各組小鼠海馬組織的Bcl-2蛋白相對表達量增加(P＜0.01，P＜0.05)。
　　4. Real Time-PCR結(jié)果顯示：與空白組比較，模型組APP mRNA、PI3K mRNA、Akt mRNA、Bcl-2 mRNA表達下調(diào)，Bax mRNA表達上調(diào)。與模型組比較，多奈哌齊組和補元清腦顆粒等效劑量組 PI3K mRNA、Akt mRNA、Bcl-2 mRNA表達上調(diào)，A

8、PP mRNA、Bax mRNA表達下調(diào)；菖蒲益智丸組APP mRNA、PI3K mRNA、Akt mRNA、Bcl-2 mRNA、Bax mRNA表達下調(diào)；補元清腦顆粒高劑量組APP mRNA、PI3K mRNA、Akt mRNA、Bcl-2 mRNA表達上調(diào)，Bax mRNA表達下調(diào)。
　　5.免疫組織化學(xué)法結(jié)果顯示：①小鼠海馬組織CA1區(qū)Bax免疫組化染色：空白組小鼠海馬 CA1區(qū)細胞帶完整，排列整齊，細胞形態(tài)正常，細胞膜和

9、細胞質(zhì)著淺黃棕色顆粒。與空白組比較，模型組小鼠海馬 CA1區(qū)細胞著深棕色顆粒。與模型組比較，各組小鼠海馬 CA1區(qū)細胞染色較淺，其中多奈哌齊組、菖蒲益智丸組和補元清腦顆粒高劑量組細胞膜和細胞質(zhì)著淺黃棕色顆粒，補元清腦顆粒等效劑量組細胞膜和細胞質(zhì)著棕色顆粒。②小鼠海馬組織 CA1區(qū) Bcl-2免疫組化染色結(jié)果：空白組小鼠海馬CA1區(qū)細胞帶完整，排列整齊，細胞形態(tài)正常，細胞膜和細胞質(zhì)著深棕黃顆粒。與空白組比較，模型組小鼠海馬 CA1區(qū)細胞排

10、列紊亂，染色較淺。與模型組比較，各組小鼠海馬 CA1區(qū)細胞排列有序，染色較深，其中多奈哌齊組、菖蒲益智丸組和補元清腦顆粒高劑量組細胞膜和細胞質(zhì)著深棕黃色顆粒，補元清腦顆粒等效劑量組細胞膜和細胞質(zhì)著棕色顆粒。
　　6.電鏡結(jié)果顯示：空白組小鼠海馬 CA1區(qū)神經(jīng)元的核膜完整，核仁明顯。其他各組與正常組比較，均出現(xiàn)凋亡表現(xiàn)，其中模型組最為顯著。與多奈哌齊組比較，補元清腦顆粒高劑量組和等效劑量組神經(jīng)元細胞核的核仁不明顯，胞質(zhì)內(nèi)空泡較多。與

11、菖蒲益智丸組比較，補元清腦顆粒高劑量組神經(jīng)元胞質(zhì)顏色較淺，胞核體積較大，染色質(zhì)聚集較少，胞漿內(nèi)空泡較少；補元清腦顆粒等效劑量組神經(jīng)元胞核體積較大。
　　結(jié)論：
　　1.元氣是人體各項生命活動的基礎(chǔ)，是腦部生理功能的根本。元氣充沛，則腦清神明；元氣虧虛，則髓海失養(yǎng)，痰瘀上蒙，清竅不明。通過培元固本法來培補元氣，固護脾腎，使先后天相互補充，相互滋長，達到防治老年性癡呆的目的。
　　2.培元固本法對APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠