老年性癡呆與TOLL樣受體表達(dá)的研究.pdf

1、第一部分 TLR2基因表達(dá)與漢族人群遲發(fā)性阿爾茨海默氏病的相關(guān)性研究
　　 研究背景：
　　 阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)是一種發(fā)生于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的退行性病變，是目前老年人癡呆的最主要原因，至今病因不明。全球范圍內(nèi)約35，000，000人罹患此病[1]。該病特征性表現(xiàn)是進(jìn)行性記憶力減退和認(rèn)知功能障礙。AD病理學(xué)的特征性改變?yōu)棣?淀粉樣肽(β-amyl oid，Ap)沉積形成的老年斑，由ta

2、u蛋白異常聚集形成的神經(jīng)原纖維纏結(jié)，大腦皮層細(xì)胞不同程度的減少，以及星形膠質(zhì)細(xì)胞的增生和肥大。AD原因錯(cuò)綜復(fù)雜，其中神經(jīng)炎癥機(jī)制在阿爾茨海默病的發(fā)生和發(fā)展進(jìn)程中發(fā)揮了重要作用，Aβ沉積激活小膠質(zhì)細(xì)胞引起的炎癥反應(yīng)可能是AD的核心病理機(jī)制。TOLL-樣受體(Toll-like recepter，TLR)家族成員可通過(guò)識(shí)別各種病原體相關(guān)分子模式(pathogen associated moleculaur pattern，PAMP)引發(fā)機(jī)體

3、免疫應(yīng)[2，3]，一些列研究證實(shí)Toll樣受體2(TLR2)可能在AD的神經(jīng)變性機(jī)制和病情進(jìn)程中起到重要的作用。而且，TLR2參與細(xì)胞對(duì)AD相關(guān)Aβ的攝取及清除。我們以前的研究已經(jīng)證實(shí)TLR2基因改變AD的遺傳易感風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)。
　　 在人類，TLR2基因基因均有許多多態(tài)性位點(diǎn)，他們所在區(qū)域亦均為AD遺傳易感相關(guān)區(qū)域。因此我們首次提出TLR2基因遺傳多態(tài)性可能為AD的遺傳風(fēng)險(xiǎn)因子，而外周血單核細(xì)胞TLR2基因和蛋白表達(dá)量可能為AD的

4、早期診斷生物標(biāo)志。
　　 方法：
　　 本研究采用美國(guó)神經(jīng)病學(xué)、語(yǔ)言障礙和卒中研究所-老年性癡呆和相關(guān)疾病學(xué)會(huì)(NINCDS-ADRDA)中“很可能AD(probable)”標(biāo)準(zhǔn)，選擇LOAD患者60例(年齡>65歲，民族為漢族，女性33例，平均年齡80.2±8.2歲)，并選擇同期就診的60例健康查體者作為對(duì)照(女性34例，平均年齡80.6±6.3歲)。所有研究對(duì)象均為中國(guó)北方漢族人且無(wú)親緣關(guān)系。所有入選病人均禁食12小

5、時(shí)，抽取清晨空腹血各5.5mLEDTA抗凝，采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù)、流式細(xì)胞術(shù)、單管雙向等位基因特異性擴(kuò)增分別對(duì)mRNA、血漿蛋白表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)。使用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。病例組和對(duì)照組各種特征的比較采用t檢驗(yàn)或卡方檢驗(yàn)。多組之間的比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用Bonferroni法。使用Pearson積矩相關(guān)來(lái)評(píng)估m(xù)RNA、蛋白與MMSE評(píng)分的相關(guān)性。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。所

6、有統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)均為雙側(cè)概率檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的標(biāo)準(zhǔn)。測(cè)定研究對(duì)象的一般特征，確保兩組研究人員在年齡、性別、BMI、血壓數(shù)值、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、膽固醇、血糖上均無(wú)顯著差異。
　　 結(jié)果：
　　 結(jié)果發(fā)現(xiàn)和健康對(duì)照組相比，病例組中TLR2mRNA的表達(dá)均高于對(duì)照組(TLR2:0.390±0.204比0.281±0.167，P<0.01)。病例組中TLR2的蛋白表達(dá)也顯著高于健康對(duì)照組(TLR2:9

7、7.12±1.67％比41.07±18.44％，P<0.01)。且無(wú)論在病例組還是健康對(duì)照組，TLR2mRNA的表達(dá)均與TLR2蛋白的表達(dá)顯著相關(guān)(分別為TLR2：r=0.980和0.976，P<0.01；)。
　　 結(jié)論：
　　 本實(shí)驗(yàn)首次對(duì)中國(guó)北方漢族人群TLR2在LoAD患者外周血中mRNA和血漿蛋白水平的表達(dá)進(jìn)行研究，LOAD組TLR2 mRNA及其蛋白水平明顯增加，而且TLR2 mRNA水平與TLR2的蛋白表達(dá)