中藥阿膠質(zhì)量評價(jià)方法研究.pdf

1、阿膠(Colla Corii Asini)始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》,與人參、鹿茸并稱為“滋補(bǔ)三寶”。《中華人民共和國藥典》(2010)規(guī)定阿膠為馬科動物驢Equus asinus L.的干皮或鮮皮經(jīng)煎煮、濃縮而制成的。然而目前針對阿膠及其保健品尚缺乏有效的質(zhì)量評價(jià)方法,導(dǎo)致市場上假阿膠及劣質(zhì)阿膠層出不窮,尤其是在目前驢皮資源短缺的情況下,以豬皮、馬皮、騾皮、牛皮等熬制而成的膠,經(jīng)過適當(dāng)加工后,其外觀、性狀與阿膠無異,鑒別難度較大。因此,建立

2、有效的質(zhì)量評價(jià)方法,用于區(qū)分阿膠與其他動物皮膠類藥材,尤其是區(qū)分驢近親源性動物(馬和騾)的摻雜,對于阿膠的質(zhì)量控制具有重要的意義。論文一共包括8個(gè)章節(jié),主要由四個(gè)部分構(gòu)成。
　　論文的第一部分(第1章)為文獻(xiàn)綜述部分,總結(jié)了膠類中藥材的研究現(xiàn)狀及質(zhì)量評價(jià)方法;并總結(jié)了阿膠的研究現(xiàn)狀包括阿膠的化學(xué)成分、藥理作用以及質(zhì)量控制方法,最后闡述了課題研究的意義及研究內(nèi)容。
　　第二部分(第2、3章)為阿膠中的小分子量化合物的含量測定。

3、其中第2章,采用《中國藥典》(2010版)所規(guī)定的方法對市售阿膠中(市場價(jià)30-380元價(jià)格不等)的氨基酸含量進(jìn)行了測定,測定結(jié)果均能達(dá)到藥典的要求的標(biāo)準(zhǔn)。說明該方法無法用于評價(jià)阿膠的質(zhì)量。第3章,基于阿膠及核苷類化合物均可增強(qiáng)免疫力的藥理作用的理論基礎(chǔ),建立RP-HPLC法對阿膠的核苷類化合物進(jìn)行含量測定,測定結(jié)果提示不同廠家生產(chǎn)的阿膠核苷類化合物含量差異較大(核苷類總含量的RSD>40％)。導(dǎo)致此結(jié)果可能為不同廠家所用原料(動物皮)

4、的不同或生產(chǎn)工藝存在差異,但此方法亦無法用于評價(jià)阿膠的質(zhì)量。
　　第三部分(第4、5、6章)以阿膠藥理作用的主要物質(zhì)基礎(chǔ)——蛋白質(zhì)為核心研究對象,進(jìn)行了相關(guān)分離及對比分析,首先嘗試毛細(xì)管電泳分析(第4章)和凝膠色譜分析(第5章),但未獲得理想的效果。接著重點(diǎn)嘗試了凝膠電泳分析(第6章),通過SDS-PAGE的實(shí)驗(yàn)結(jié)果得知阿膠蛋白及多肽的分子量較大且呈連續(xù)分布,因此進(jìn)一步將其采用蛋白酶水解后進(jìn)行雙向電泳分離分析。用建立好的雙向電泳實(shí)

5、驗(yàn)方法對同種酶水解的5種動物皮膠(按照阿膠的生產(chǎn)工藝自制了豬、馬、牛、驢、騾皮膠)進(jìn)行分離及對比分析,但發(fā)現(xiàn)無明顯差異。因此,以蛋白類成分為阿膠的質(zhì)量評價(jià)指標(biāo)存在較大的困難,本文未取得相應(yīng)的理想質(zhì)量評價(jià)方法。
　　第四部分(第7章)采用DNA鑒定技術(shù),基于線粒體DNA的細(xì)胞色素c氧化酶亞基I序列,設(shè)計(jì)并篩選得到的馬特異性引物SEQ-1和SEQ-2,可用于馬源性成分特異性檢出的PCR法,該方法操作簡便、靈敏度高;基于SEQ引物序列進(jìn)