腸道病毒71型(EV71)與柯薩奇病毒A組16型(CA16)單克隆抗體治療的可行性評(píng)價(jià).pdf

1、腸道病毒71型(EV71)與柯薩奇病毒A組16型(CA16)是引起兒童手足口病(HFMD)的主要病原體。近些年來，手足口病在我國的發(fā)病率逐年上升，由手足口病導(dǎo)致的重癥感染和死亡人數(shù)也明顯增加，嚴(yán)重危害了兒童的生命安全，因此急需有效的治療性藥物來治療并控制其感染與流行。單克隆抗體由于具有毒性低、特異性高等優(yōu)點(diǎn)，是治療病毒性感染的良好的候選藥物。本研究的目的為優(yōu)化EV71的小鼠攻毒模型同時(shí)建立穩(wěn)定的CA16小鼠感染模型，并利用動(dòng)物模型篩選和

2、評(píng)價(jià)具有治療潛力的EV71及CA16治療性單抗，為開展EV71及CA16治療性藥物研制提供基礎(chǔ)。
　　本研究首先對(duì)原有的EV71動(dòng)物模型的攻毒方式和攻毒劑量進(jìn)行了優(yōu)化，使該模型能夠達(dá)到穩(wěn)定的100％致死率。同時(shí)利用13株CA16臨床分離株對(duì)1日齡新生鼠進(jìn)行攻毒評(píng)價(jià)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)大多數(shù)CA16病毒對(duì)小鼠表現(xiàn)出了強(qiáng)毒力，攻毒小鼠表現(xiàn)出癱瘓和肢體麻痹等神經(jīng)癥狀。病理學(xué)檢測顯示攻毒小鼠的大腦和脊髓等部位出現(xiàn)了嚴(yán)重的壞死與炎癥，與CA16在人體

3、內(nèi)的感染情況極為相似?；谏鲜鼋Y(jié)果，本研究建立了通過灌胃注射CA16感染1日齡BALB/c小鼠的CA16小鼠感染模型，為開展后續(xù)研究提供了重要基礎(chǔ)。
　　本研究應(yīng)用所建立的CA16攻毒模型對(duì)CA16中和單抗的體內(nèi)治療效果進(jìn)行評(píng)價(jià)，并根據(jù)體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)的結(jié)果確立了一株候選的CA16中和單抗14810。通過評(píng)價(jià)感染CA16后不同治療時(shí)間點(diǎn)及治療策略的效果發(fā)現(xiàn)，14810在攻毒后2天內(nèi)進(jìn)行單針治療能夠達(dá)到超過90％的治療存活率，而利用三針治

4、療方案則能夠在攻毒后第3天、即小鼠開始發(fā)病前1天有效治療小鼠，從而證實(shí)了14810對(duì)CA16的感染具有良好的體內(nèi)治療能力。
　　本研究進(jìn)一步應(yīng)用EV71攻毒模型對(duì)13株EV71中和單抗的體內(nèi)治療能力進(jìn)行篩選評(píng)價(jià)，從而確立了一株EV71中和單抗CT11F9。通過對(duì)攻毒EV71后不同治療時(shí)間和治療策略的評(píng)價(jià)發(fā)現(xiàn)，CT11F9在攻毒后三天內(nèi)進(jìn)行單針治療能夠達(dá)到100％的存活率及健康率，而利用三針治療方案則能夠在攻毒后第4天、即小鼠開始發(fā)

5、病時(shí)有效提高小鼠的存活率，且對(duì)癱瘓小鼠具有一定的治療能力。通過與人血清的阻斷ELISA實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，CT11F9識(shí)別的表位在人血清中是免疫優(yōu)勢的。至此證實(shí)了CT11F9對(duì)EV71感染具有良好的體內(nèi)治療能力。
　　綜上所述，本研究優(yōu)化了原有的EV71動(dòng)物模型的攻毒參數(shù)并建立了穩(wěn)定的CA16小鼠感染模型，利用該模型成功篩選并獲得了對(duì)EV71或CA16感染具有良好治療能力的中和單抗。這些研究為研發(fā)EV71及CA16治療性抗體提供了重要的數(shù)據(jù)