SIRT3通過抑制氧化應(yīng)激保護糖尿病大鼠心肌缺血再灌注損傷的研究.pdf

1、目的：1.在離體心臟灌流模型上研究心肌缺血/再灌注后SIRT3的表達變化以及心肌乙酰化水平變化。2.構(gòu)建糖尿病大鼠模型，研究 SIRT3在糖尿病大鼠心肌缺血/再灌注模型中對蛋白乙酰化及氧化應(yīng)激的影響，同時驗證SIRT3對糖尿病大鼠心肌缺血/再灌注損傷的保護作用。
　　方法：第一部分：10只雄性SD大鼠，2~3月齡，體重（220-250）g，隨機分為對照組（A組，n=5）、實驗組（B組，n=5）。兩組均采用Langendorff心臟

2、離體灌流模型。A組平行灌注20min心臟功能穩(wěn)定后再接著平行灌注60min；B組平行灌注20min心臟功能穩(wěn)定后，全心停止灌注40min再復(fù)灌60min制成心肌缺血/再灌注模型。灌注結(jié)束后分別用熒光定量 PCR（RT-qPCR）和冷凍切片免疫熒光法檢測心肌Sirt3的表達情況及心肌整體乙酰化水平。第二部分：24只雄性SD大鼠，2~3月齡，體重（250-300） g，通過腹腔注射鏈脲佐菌素（Streptozotocin,STZ）誘導(dǎo)建立1

3、型糖尿?。―iabetes mellitus,DM）模型，在注射后的72h、7、14、28天分別取大鼠尾靜脈血監(jiān)測血糖，血糖＞16.70mmol/L，尿糖+++以上者表示造模成功。造模成功后將DM大鼠隨機分為對照組（A組，n=8）、SIRT3抑制劑組（B組，n=8）和SIRT3激活劑組（C組，n=8）。飼養(yǎng)5周后，A組行生理鹽水灌胃4周；B組行尼克酰胺灌胃4周；C組行白藜蘆醇灌胃4周。三組DM大鼠均采用Langendorff心臟離體灌流

4、建模方法，平行灌注20min、全心停止灌注40min、復(fù)灌60min，制成心肌缺血/再灌注模型。灌注過程中，心肌缺血前后記錄不同實驗組的心功能變化包括心率（HR）、左心室發(fā)展壓（LVDP）、左室收縮壓最大上升／下降速率（±dp／dtmax)等。分別在平行灌注20 min時和再灌注1h時收集冠脈流出液，運用ELISA方法檢測肌鈣蛋白T（Tn-T）含量。灌注結(jié)束后，通過TTC染色測定灌注后心肌梗死面積，分別用冰凍切片免疫熒光和western

5、 bolt測定caspase3的表達水平以反映心房細胞凋亡，并測定心肌組織乙?；?，以及SOD活性及丙二醛（MDA）的含量。
　　結(jié)果：第一部分：各組灌注結(jié)束后心肌 Sirt3 mRNA表達量比較，A組是B組的1.7倍，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（p＜0.05）。各組免疫熒光檢測心肌組織乙?；较啾容^，B組比 A組明顯升高。第二部分：各組心肌缺血/再灌注后的心率、左心室發(fā)展壓、左心室收縮壓最大上升速率及左心室收縮壓最大下降速率比較，差異

6、均有統(tǒng)計學(xué)意義（p＜0.05），且結(jié)果顯示C組上述各指標高于A組、B組，B組各指標最低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義（p＜0.05）。各組缺血/再灌注后的心肌梗死面積比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義， B組明顯大于A組、C組而C組最低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（p＜0.05）。各組心肌缺血/再灌注后用冰凍切片免疫熒光檢測心肌caspase3蛋白表達量， B組明顯高于A、C組，C組最低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（p＜0.05）。各組心肌缺血/再灌注后用western blot

7、檢測心肌乙?；?，結(jié)果表明B組明顯高于 A、C組，C組最低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（p＜0.05）。各組缺血/再灌注后心肌組織SOD活性相比較，C組高于A組、B組而B組最低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（p＜0.05）。各組缺血/再灌注后心肌MDA水平相比較， B組明顯高于A、C組，C組最低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（p＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.正常成年大鼠心臟經(jīng)離體缺血/再灌注后SIRT3的表達量有明顯下調(diào)，而心肌整體乙?；斤@著升高