2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、近年來,由禽流感病毒引起的流感疫情在全球各地大規(guī)模爆發(fā)。高致病性禽流感不僅能使禽類大批量死亡,而且還能感染人類引發(fā)嚴重的呼吸道疾病。低致病性禽流感會引起家禽患病、產蛋量下降甚至死亡。因此爆發(fā)禽流感疫情將導致嚴重的經(jīng)濟損失,嚴重威脅人類生命健康。隨著我國家禽養(yǎng)殖業(yè)不斷發(fā)展,養(yǎng)殖規(guī)模不斷擴大,H9N2型禽流感爆發(fā)將帶來嚴重的經(jīng)濟損失。H5N1型禽流感病毒致病能力強,能使人類和家禽均患病且死亡率高,已然成為全球公共衛(wèi)生關注的焦點。目前,我國防

2、治禽流感疫情主要依靠疫苗免疫接種。市場上銷售的禽流感疫苗主要以滅活疫苗為主,但該疫苗存在返毒風險及滅活劑等缺點,無法應對禽流感疫情的爆發(fā)。因此研制出高效安全的流感疫苗越來越受到關注。由于VLP不含有病毒核酸,無致病性,且其表面具有抗原成分,是新型疫苗研究的熱點。目前,我國尚未出現(xiàn)用于預防H5N1、H9N2型禽流感的VLP疫苗?;谝陨蠁栴},本課題將研制出三種不同佐劑類型的流感H5N1/H9N2型二價VLP疫苗,并從免疫方面驗證二價VLP

3、疫苗的免疫效果。
  目的:本研究利用桿狀病毒表達系統(tǒng)制備H5N1 VLP和H9N2 VLP,以脂質體、白油及殼聚糖微球為佐劑,研制出三種不同佐劑的二價VLP疫苗。對VLP疫苗進行動物免疫效果評價,篩選出免疫原性強、安全及長效的流感H5N1/H9N2型二價VLP疫苗。
  方法:通過對H5N1和H9N2重組桿狀病毒P1代進行增殖及TCID50測定,Western Blot檢測VLP中HA、M1蛋白的特異性,并用ELISA和血

4、球凝集實驗分別測定VLP中HA含量及其血凝效價。其次采用薄膜凍融法制備脂質體,通過單因素和正交實驗篩選出脂質體制備的最佳工藝,研制出二價脂質體VLP疫苗,并對脂質體的包封率、物理穩(wěn)定性、剩余水分和安全性等檢驗。擬用白油及微球佐劑制備出二價VLP油乳佐劑疫苗、二價微球VLP疫苗,并對二價VLP疫苗進行相關質量安全評價及安全試驗。最后通過動物免疫實驗檢測二價VLP疫苗特異性抗體水平。
  結果:
  1.通過Western Bl

5、ot鑒定、HA定量ELISA及血球凝集實驗檢測兩種VLP。結果表明,H5N1和H9N2 VLP均出現(xiàn)特異性條帶,HA含量分別為134.42±4.78μg/mL、129.73±4.20μg/mL。具有較高的免疫原性,可作為二價VLP疫苗的原料。
  2.制備的二價VLP疫苗脂質體的包封率為83.37%,真空烘干法測得的脂質體凍干粉剩余水分為2.5%,4℃低溫保存120天后其包封率達60.78%。油乳佐劑疫苗的穩(wěn)定性常數(shù)為95.5%,

6、二價微球VLP疫苗的體外釋放度達83.1%。
  3.免疫SPF雞28d后,脂質體組抗H5N1抗體及抗H9N2抗體的HI滴度分別為9.28Log2、9.43Log2,均顯著高于油乳和微球實驗組的抗體滴度(p<0.01);除脂質體組外,其它各實驗組中和H5N1、H9N2病毒的抗體滴度均顯著低于滅活疫苗組(p<0.01),而脂質體組中和H5N1、H9N2病毒的中和價分別為1/97、1/103,顯著高于油乳及微球實驗組(p<0.01);

7、T淋巴細胞增殖實驗結果表明,免疫28d后脂質體組的SI指數(shù)與滅活疫苗組無顯著差異,且顯著高于微球及油乳實驗組(p<0.01),免疫56d后脂質體組的SI指數(shù)均高于微球及油乳實驗組(p<0.01),H5N1病毒、H9N2病毒刺激脂質體組 T淋巴細胞增殖的SI指數(shù)分別為4.29、5.65,能引起有效的細胞免疫應答。
  結論:本課題初步研制的二價脂質體VLP疫苗,免疫動物后能誘導產生較好的體液及細胞免疫應答,能為VLP疫苗的研制提供一

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